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显齿蛇葡萄提取物的体内和体外降血糖效果
目的：探讨不同显齿蛇葡萄提取物体外降血糖及抗氧化和体内降血糖效果研究。方法利用正己烷、氯仿、乙酸乙酯、甲醇和70％的乙醇提取显齿蛇葡萄中的活性成分，得到不同提取物，测定其中总酚和总黄酮的含量，考察对α-葡萄糖苷酶的抑制效果和对DPPH及ABTS的清除效果，体内降血糖效果是利用链脲佐菌素诱导小鼠糖尿病模型，正己烷提取物（HE）、氯仿提取物（CE）、乙酸乙酯提取物（EAE）、甲醇提取物（ME）和70％的乙醇提取物（ EE）按剂量200 mg／kg体重治疗4 w，每周末尾部动脉取血测定血糖，4 w后眼眶取血测定血清胰岛素。结果不同提取物中，EE中总酚类物质和总黄酮来物质的含量高，其次是ME，HE中该两种成分含量低，体外降血糖效果发现 EE 对α-葡萄糖苷酶具有较强的抑制活性并且体现剂量依赖性，体外抗氧化实验发现EE对DPPH和ABTS具有较强的清楚效果，而体内降血糖效果发现不同提取物对糖尿病小鼠具有一定的降血糖效果，特别是EE组降血糖效果非常明显，血清胰岛素的含量得到明显提高。结论显齿蛇葡萄70％EE具有明显的抗氧化和降血糖效果，是一种具有很大潜力的降血糖和抗氧化的天然药物。
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hISO基因原核表达载体的构建及其在大肠杆菌中的表达及鉴定
目的:构建原核表达载体pET-28a(+)-hISO,探讨其融合蛋白在大肠杆菌中的稳定表达情况,为后续实验研究奠定基础.方法:以Caco-2细胞的总RNA为模版,采用RT-PCR方法扩增出大小为1 770 bp的人异麦芽糖酶(hISO)基因片段,将其插入到pET-28a(+)中,构建重组载体pET-28a(+)hISO.经PCR、酶切及测序鉴定后,转化大肠杆菌BL21 (DE3),IPTG诱导表达,亲和层析纯化重组蛋白,利用SDS-PAGE电泳、Western blotting对重组蛋白进行分析和鉴定.结果:经PCR、酶切及测序鉴定后,重组质粒pET-28a(+)-hISO构建正确,表达重组蛋白相对分子质量为68 860,将融合蛋白进行纯化,经40和60 mmol·L-1咪唑缓冲液洗脱后能够得到浓度和纯度相对较高的蛋白.结论:成功地构建了hISO基因的原核表达载体,并在大肠杆菌中获得了融合蛋白表达.
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银杏叶提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及其降血糖作用机制
目的:通过体外药效学实验研究银杏叶提取物(GBE)对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,探讨其降血糖的作用机制,为开发利用银杏叶资源提供实验依据.方法:提取大鼠小肠中的α-葡萄糖苷酶液,利用葡萄糖试剂盒测定酶活力;体外抑制实验分为正常对照组、阳性对照组及GBE高、中、低剂量组(10.0、5.0、2.5 g·L-1),对反应体系中的葡萄糖浓度进行测定,计算药物对蔗糖酶的抑制率;离体器官实验分为正常对照组、阴性对照组、阳性对照组和GBE高、中、低剂量组(10.0、5.0、2.5 g·L-1),对反应体系中的淀粉光密度值进行测定,计算药物对淀粉酶的抑制率;半数抑制率(IC50)实验将GBE分为7个剂量组,分别计算药物对α-糖苷酶的抑制率及IC50;抑制曲线实验分为正常对照组、阳性对照组及GBE组,计算反应速率,以底物浓度的倒数作为横坐标,以反应速率的倒数作为纵坐标,绘制抑制曲线.结果:大鼠小肠酶活力值为67.2活力单位.与正常对照组比较,GBE高、中、低剂量组蔗糖酶抑制率明显增加(P<0.001,P<0.001,P<0.01);与正常对照组比较,GBE高剂量组大鼠小肠中淀粉酶抑制率明显增加(P<0.01);GBE对蔗糖酶的IC50值为0.758 6 g·L-1,对淀粉酶的IC50值为0.910 1 g·L-1;GBE组趋势线与正常对照组斜率相近,且截距大于正常对照组趋势线.结论:GBE对α-糖苷酶具有良好的抑制作用,其作用机制为反竞争性抑制.
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荔枝核降血糖有效部位的研究(一)
目的:从中药荔枝核中提取分离降血糖的有效部位和对该部位进行化学性质的研究.方法:采用动物实验和α-葡萄糖苷酶活性测定对荔枝核各部位进行活性筛选,采用酚-硫酸等方法对有效部位进行化学性质的研究.结果:荔枝核95%乙醇提取物对Ⅱ型糖尿病大鼠具有明显降血糖作用,正丁醇萃取物水不溶部分具有更强的α-葡萄糖苷酶抑制作用,该部位总皂苷含量为46.06%.结论:荔枝核的乙醇提取物具有明显的降血糖作用,该部位的正丁醇萃取物和正丁醇萃取物的水溶和水不溶部分均具有明显抑制α-葡萄糖苷酶活性.该活性可能为其中含有的皂苷类物质引起.
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中药提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用
目的:研究2种中药提取物对α-葡萄糖苷酶活性的影响.方法:以4-硝基苯基-α-D-吡喃葡萄糖苷(pNPG)为底物,用分光光度法测定反应体系的吸光度值,判定对α-葡萄糖苷酶活性的影响作用.结果:天麻素和川芎嗪对α-葡萄糖苷酶活性的大抑制率分别为89.1％和84.0％,IC5o值分别为2.4μg/mL和3.0 μ/mL,天麻素抑制机制为混合性而川芎嗪抑制机制为竞争性.结论:天麻素和川芎嗪对α-葡萄糖苷酶均具有较强的抑制作用.
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中药提取物中α－葡萄糖苷酶抑制活性因子的筛选
目的：从中药提取物中筛选α－葡萄糖苷酶抑制活性因子。方法：采用α－葡萄糖苷酶活性测定方法PNPG法，以阿卡波糖为阳性对照，对采取不同提取方法制备得到的多糖，生物碱，黄酮和皂苷类化合物进行α－葡萄糖苷酶抑制活性筛选。结果：党参多糖和桑白皮黄酮对α－葡萄糖苷酶抑制效果较好，接近阿卡波糖，党参皂苷次之，其余组分活性微弱或无活性。结论：本实验为今后进一步从党参和桑白皮中分离纯化出高活性的α－葡萄糖苷酶抑制活性因子提供了科学依据。
关键词： 党参 桑白皮 阿卡波糖 α-葡萄糖苷酶 α-葡萄糖苷酶抑制因子 -
桑叶中降糖活性成分筛选及其药效学研究
目的:筛选桑叶中α-葡萄糖苷酶(α-GS苷酶)抑制活性佳组分,并进行体内降糖活性研究.方法:采用柱层析法对桑叶水提物进行分离,利用体外细胞实验筛选出α-葡萄糖苷酶抑制活性佳组分,并采用链脲霉素诱导的大鼠高血糖动物模型进行跟踪验证.结果:细胞实验结果表明,桑叶提取物中生物碱的α-葡萄糖苷酶抑制活性强.体内试验中,与模型组比较,生物碱给药组糖尿病大鼠的血糖有明显降低.结论:桑叶中的生物碱具有显著的降血糖的作用(P＜0.05).
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昆仑雪菊提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用
目的:探讨昆仑雪菊提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性.方法:将昆仑雪菊干燥花序粉碎,分别用水提法和乙醇法制备5种提取物.采用α-葡萄糖苷酶体外活性抑制模型,测定昆仑雪菊的5种提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制活性.结果:这5种提取物对α-葡萄糖苷酶活性有较强的抑制作用,抑制活性均高于阿卡波糖.其中提取物I的抑制活性强,IC50=28.2mg/L.结论:昆仑雪菊提取物具有较高的α-葡萄糖苷酶抑制活性,提示昆仑雪菊在抗糖尿病产品开发方面具有很好的应用前景.
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山药水浸提物对α-葡萄糖苷酶抑制作用的初步研究
目的:通过研究山药水浸提物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,初步探索山药对2型糖尿病的预防和治疗作用.方法:对山药进行热水浸提,采用1∶5的料液比,浸提温度90℃,时间2小时,超滤获得山药水浸提物,利用α-葡萄糖苷酶对淀粉降解反应建立酶活检测体系,通过检测酶反应产物分析山药水浸提物对d-葡萄糖苷酶的抑制作用,并计算IC50.结果:山药水浸提物对α-葡萄糖苷酶的抑制率大于46％,IC50值为1.9 g/ml.结论:山药水浸提物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用提示山药可以作为肥胖或者2型糖尿病患者有效的一种药食同源食材,本实验结果为2型糖尿病高危人群及患者合理选择膳食结构提供新的科学依据.
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血糖安对2型糖尿病大鼠小肠α-葡萄糖苷酶mRNA表达的影响
目的观察血糖安对2型糖尿病大鼠小肠α-葡萄糖苷酶mRNA表达的影响.方法建立2型糖尿病大鼠模型.随机分成5组:血糖安大剂量组(9mg/kg.d)、血糖安中剂量组(3mg/kg·d)、血糖安小剂量组(1mg/k·d)、糖尿病模型组、苯乙双胍组(75mg/kg·d).连续用药7天用电极试纸法测空腹血糖值及糖耐量值.用小肠α-葡萄糖苷酶原位杂交试剂盒检测小肠α-葡萄糖苷酶mRNA的表达.结果①2型糖尿病大鼠经血糖安给药后,空腹血糖值与模型组相比明显降低(P＜0.05);②用药组大鼠的糖耐量曲线下面积(AUC)较模型组显著减少(P＜0.01);③用药组大鼠小肠α-葡萄糖苷酶mRNA的表达与模型组和正常组相比均有明显减少.结论血糖安对2型糖尿病大鼠有明显的降糖作用,对糖耐量具有保护作用,对2型糖尿病大鼠小肠α-葡萄糖苷酶mRNA的表达有抑制作用.
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木蝴蝶提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用
目的 研究木蝴蝶提取物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用.方法 将木蝴蝶的80％乙醇提取物依次用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取,测定各部分对α-葡萄糖苷酶的抑制作用,并对抑制作用强的部分进行酶抑制动力学研究.结果 正丁醇萃取部分(n-BO)对α-葡萄糖苷酶的抑制作用强,在试验质量浓度25 ～ 212.5 mg/L,其大抑制率为93.45％,半数抑制浓度(IC50)为47.96 mg/L,抑制活性高于阳性对照阿卡波糖(Acarbose IC50 =56.98 mg/L).抑制动力学表明n-BO为竞争性抑制,抑制常数(K)为27.05 mg/L.结论 木蝴蝶醇提物中n-BO对α-葡萄糖苷酶具有显著抑制作用,n-BO富集了抑制α-葡萄糖苷酶的有效成分.
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响应面法优化葛黄片提取工艺
目的 采用响应面法优化葛黄片提取工艺.方法 在单因素试验基础上,以综合评分(葛根素、总多糖含有量以及α-葡萄糖苷酶抑制率)为评价指标,提取时间和加水量为影响因素,响应面法优化提取工艺.结果 佳条件为加10倍量水提取2次,每次120 min,综合评分92.12,与预测值(93.20)接近.结论 该方法合理可行,可用于提取葛黄片.
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葛根异黄酮类化合物对α-葡萄糖苷酶的抑制作用及构效分析
目的 观察葛根异黄酮类化合物对α-葡萄糖苷酶活性的影响,并分析其构效关系.方法 以蔗糖作为底物,优化反应条件,建立α-葡萄糖苷酶-蔗糖筛选模型,观察葛根异黄酮类化合物(0.1、1、10、100 μmol/L)对α-葡萄糖苷酶的抑制作用.结果 大豆素、刺芒柄花素、大豆苷、3'-甲氧基大豆素、葛根素、3'-甲氧基葛根素对α-葡萄糖苷酶有一定的抑制作用,其中大豆素、刺芒柄花素在100 μmol/L时对α-葡萄糖苷酶的抑制作用明显强于阿卡波糖(P＜0.01),其抑制率分别达37.56％和32.11％.3'-羟基葛根素在0.1μmol/L时的抑制作用较强,但在100 μmol/L的作用减弱.经构效分析发现:在大剂量时,异黄酮母核的3位和5位的取代基为羟基且其他位未被取代时,其抑制作用增强;4位取代基为糖氧基,活性将减弱;若为多糖氧基,其活性会更弱;6位为取代基为羟基,在低浓度时有较强的抑制作用,而在高浓度下作用很弱;若6位为甲氧基时,且4位被糖氧基取代时,活性减弱.结论 葛根异黄酮类化合物对α-葡萄糖苷酶活性具有一定抑制作用,其中大豆素、刺芒柄花素对α-葡萄糖苷酶的抑制作用较强.
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几种灰兜巴提取物配伍对α-葡萄糖苷酶抑制作用的影响
目的 研究中药灰兜巴石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取部分、醇提萃取剩余部分和水提部分5部分对于α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用.方法 通过高效液相色谱法检测不同灰兜巴提取物单因素及相互配伍后对于α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用.结果 灰兜巴各部分提取物均表现出良好的α-葡萄糖苷酶抑制活性,不同比例提取物配伍后对于α-葡萄糖苷酶的抑制作用明显升高,通过DPS数据分析可得出,灰兜巴乙酸乙酯部分对于α-葡萄糖苷酶的抑制作用强,配伍后优化实验的抑制率可高达98.62％.结论 证明灰兜巴具有良好的降糖疗效,且相互配伍有助于增强对于α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用.
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苦瓜根总皂苷的提取及其对α-葡萄糖苷酶活性抑制作用的研究
目的 研究了苦瓜根总皂苷的提取工艺及其对α-葡萄糖苷酶活性的抑制作用.方法 以人参皂苷Rb1为对照,采用分光光度法对苦瓜根总皂苷的含有量进行定量分析,通过正交试验L16(45)对其进行以提取温度、浸泡时间、乙醇体积分数和料液比为考察因素的工艺优化试验,同时对优条件下制备得到的总皂苷进行了α-葡萄糖苷酶的抑制活性实验.结果 在浸提温度40℃,浸提时间6h,乙醇体积分数70％及料液比1:5的佳提取条件下,苦瓜根总皂苷的提取率为2.3％,纯度达98％,而且对α-葡萄糖苷酶具有良好的抑制作用,IC50为1 538 μg/mL.结论 通过正交试验得到了苦瓜根总皂苷的佳提取工艺,而且其对α-葡萄糖苷酶表现出抑制作用,显示出一定的降糖活性.
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两种唇形科植物荔枝草和夏至草α-糖苷酶抑制活性研究
荔枝草系唇形科鼠尾草属植物的地上部分.夏至草为唇形科夏至草属植物夏至草的全草.本文利用已建立的α-葡萄糖苷酶体外抑制模型对上述两种植物的提取物α-葡萄糖苷酶抑制活性进行检测,以评价将这两种植物开发为糖尿病治疗药物的可行性.
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知母中4种成分及对α-葡萄糖苷酶的抑制作用
目的 比较了不同产地知母中黄酮类成分、皂苷类成分的含有量及其对α-葡萄糖苷酶抑制作用,并在此基础上提出知母质量标志物.方法 采用PNPG法测抑制率,UPLC法测定知母中新芒果苷、芒果苷的含有量,相关性分析筛选其药效成分.结果 芒果苷、总皂苷与抑制率的相关性较大,新芒果苷与抑制率无显著相关性.结论 知母药材中起α-葡萄糖苷酶抑制作用的主要成分可能为芒果苷,芒果苷可作为知母质量标志物.
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甘草乙醇提取物的体外抑制α-葡萄糖苷酶、抗氧化活性及HPLC-MS分析
目的 对甘草乙醇提取物体外降血糖和抗氧化活性进行研究,并对其化学成分进行分析.方法 甘草乙醇提取物经大孔树脂精制后进行抑制α-葡萄糖苷酶和清除DPPH自由基实验;采用高效液相色谱-质谱联用技术对甘草乙醇提取物化学成分进行分析.结果 甘草乙醇提取物能够较好地抑制α-葡萄糖苷酶活性和清除DPPH自由基,并与提取物浓度存在明显的量效关系,经液质联用分析共鉴定出15个脂溶性黄酮类成分.结论 甘草乙醇提取物具有体外抑制α-葡萄糖苷酶、抗氧化活性,其主要有效成分为脂溶性黄酮类化合物.
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治疗糖尿病常用中药对α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶的抑制活性研究
目的:从用于治疗糖尿病的中药中寻找α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制剂,为中药治疗糖尿病提供酶学依据.方法:中药粗粉经过50%乙醇回流提取两次,提取液浓缩后先后用醋酸乙酯和正丁醇分别萃取,得到两组成分,检测它们的α-葡萄糖苷酶和α-淀粉酶抑制活性.结果:醋酸乙酯和正丁醇提取物大都显示出明显的抑制活性,其中醋酸乙酯部分作用更明显;有些中药提取成分与阳性对照阿卡波糖比较,抑制活性更强.结论:用于治疗糖尿病的处方中经常出现的这些中药,有相当比例的具有较强的α-葡萄糖苷酶或α-淀粉酶抑制效果,与中药治疗糖尿病的理论相一致.
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59例双侧附睾梗阻性无精子症精浆α-糖苷酶测定
目的 探讨精浆α-1,4葡萄糖苷酶(α-糖苷酶)的来源.方法 测定59例双侧附睾梗阻性无精子症者及20例正常对照精浆q-糖苷酶.结果 40例正常对照组,31例双附睾头部梗阻,28例双附睾尾部梗阻者精浆α-糖苷酶浓度平均值分别为50.66 U/ml,25.46 U/ml,18.17 U/ml.正常对照组精浆α-糖苷酶浓度高于其他两组,差异有显著性(P＜0.001),双附睾头部梗阻较双附睾尾部梗阻α-糖苷酶浓度有下降,但差异无显著性(P＞0.05).结论 双侧附睾头部、尾部梗阻所致无精子症者精浆中性α-糖苷酶浓度虽有下降,但仍保持一定的浓度,提示精浆a-糖苷酶具有多源性.
