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航天环境对拟南芥幼苗内参基因表达稳定性的影响
目的 筛选在航天环境下表达稳定的拟南芥幼苗内参基因.方法 “神舟”8号飞船搭载拟南芥幼苗,设置3个试验处理:1)空间飞行处理(F ug);2)空间飞行+1g离心力处理(F1g);3)地面对照(G1g).样品返回后,提取总RNA,通过实时定量RT-PCR的方法,利用geNorm软件分析8个内参基因:ACT8,EF1α,eIF4A,YLS8,UBQ5,ACT2,TIP41和UBC8.结果 三个处理中,内参基因表达的稳定性如下:TIP41=UBC＞ACT2＞UBQ5＞YLS8＞eIF4A＞EF1α ＞ACT8,其中ACT2,TIP41和UBC的M值小于0.5.结论 利用qRT-PCR分析比较太空中拟南芥幼苗基因表达差异时,ACT2,TIP41和UBC可作为内参基因.
关键词： 航天环境 拟南芥 内参基因 实时定量RT-PCR -
回转器模拟微重力对拟南芥生物特性的影响
目的 研究模拟微重力条件对拟南芥生长过程中生理、生化特性以及亚显微结构的影响.方法 通过回转仪模拟微重力环境,利用激光共聚焦扫描显微镜和Ca2+荧光探针对生长7d的拟南芥幼苗进行细胞微管骨架变化、Ca2+分布以及相关酶活力进行研究测定.结果 在模拟微重力条件下拟南芥植株生长慢于对照;拟南芥叶片细胞的微管骨架有序性降低,微管数量显著增加,其排列模式呈现多样化,叶绿体含量有所减少;根尖Ca2+分布趋向均匀化,并且Ca2+向叶片组织的转运增加;过氧化物酶、过氧化氢酶活力以及抗坏血酸含量显著增加,超氧化物歧化酶活力有所增加,匀浆蛋白含量有所减少.结论 模拟微重力环境对拟南芥的生物特性有显著影响,拟南芥幼苗应激反应明显.
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三维回转模拟微重力对拟南芥根尖基因表达谱的影响
目的 从分子水平上分析和阐述植物根尖对模拟微重力效应的反应.方法 以三维回转仪模拟微重力效应,回转处理7d大小的拟南芥幼苗15 min.利用基因芯片技术,分析模拟微重力下拟南芥mRNA表达谱的变化.结果 拟南芥根尖细胞有392个基因的表达发生了显著变化,其中347个基因表达上调,45个基因表达发生下调.结论 模拟微重力效应可以影响拟南芥根尖基因的表达,这些差异表达基因的功能涉及到植物的许多生命过程,包括抗逆反应、细胞壁物质合成、基因转录和信号转导等.
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TopBP1在DNA损伤修复及乳腺癌发生中的作用
一、概 述人类DNA拓扑异构酶Ⅱβ结合蛋白1(DNA to-poisomeraseⅡβ-binding protein 1,TopBP1)是初于1997年由Yamane等人经双杂交筛选分离得到的一种能结合到DNA拓扑异构酶Ⅱβ蛋白C末端区域的蛋白[1].TopBP1基因定位于人类染色体3q22.1,含29个外显子,编码的TopBP1蛋白含1522个氨基酸,分子质量180kDa.人类TopBP1蛋白的同系物包括爪蟾的Xcut5/Xmus101,果蝇的Mus101,线虫的MUS-101,拟南芥的Mei1,啤酒酵母的Dpb11,裂殖酵母的Cut5/Rad4等[2].
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微小RNA与肿瘤发生的研究进展
微小RNA(miRNA)是1993年Lee[1]在线虫发育的研究中首次发现的一类非编码小分子RNA,长约21～24个核苷酸(nt),能够调控线虫胚胎后期发育,他将其称作lin-4.后来发现miRNA在果蝇、家鼠、人、拟南芥及水稻等生物体中广泛存在,对基因表达、生物体正常发育起着重要的调控作用.时至今日,人类已经发现了超过500种miRNA,并且推算出接近1000种miRNA存在于基因组中[2].
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中药三七根核糖体18S rRNA基因的序列分析
目的研究中药三七根核糖体18S rRNA基因的序列特征.方法根据模式植物拟南芥的18S rRNA的基因序列设计引物,对三七根的18S rRNA基因序列进行基因克隆、测序,并与模式植物拟南芥Arabidopsisthaliana以及人参属植物喜马拉雅人参Panax pseudoginseng Wall subsp.himalaicus var.angustifolius的相应序列进行比较.结果通过对产于广西靖西的三七Panax pseudoginseng Wall.var.notoginseng(Bukill)Hoo et Tseng根的18S rRNA基因进行克隆测序,获得了三七根的18S rRNA基因的部分序列特征.结论利用已完成全基因组序列测定的模式植物拟南芥的分子生物学信息来研究中药植物基源的基因组序列,将有助于加快中药植物基源的分子生物学研究进程.
关键词： 三七 拟南芥 1 8S rRNA基因 -
拟南芥生长素结合蛋白ABP1的原核表达及蛋白纯化
目的:鉴于生长素结合蛋白(Auxin Binding Protein,ABP)能与生长素特异性结合,因而探讨研究其直接用于生长素信号转导机理和生物传感器的可能性与可行性.方法:通过RT-PCR获得拟南芥生长素结合蛋白1(Auxin bing protein 1,ABP1)的全长CDS,将其克隆到原核表达载体pGEX4T-1中,成功构建pGEX4T-1-ABP1重组表达载体.经酶切、PCR及DNA测序鉴定后,将阳性质粒转化表达受体菌BL21(DE3).加入异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)进行诱导后,取样进行SDS-PAGE分析.结果:成功表达出一个分子量约为43 kD的可溶性融合蛋白,并利用GST亲和柱纯化方式得到了ABP1.结论:通过原核表达并经GST柱纯化后获得ABP1,为生长素生物传感器的研制开辟新的途径.同时为进一步研究ABP1与生长素的信号转导机制和生长素在生物传感测定技术中的研究和应用奠定基础.
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蜜腺发育过程中细胞分化、凋亡与泌蜜的关系
目的探讨拟南芥花蜜腺发育过程中蜜腺组织细胞分化、凋亡的超微结构变化与蜜腺泌蜜的关系,为进一步探讨蜜腺泌蜜的机制提供必要的依据.方法应用高压冷冻和低温置换电镜技术,样品制成超薄切片, 用H-600型电子显微镜分析.结果拟南芥花蜜腺发育过程中筛分子的分化为原蜜汁的运输提供了帮助,而蜜腺组织中深色细胞的分化及凋亡又为蜜汁的积累和运输提供了场所和通道.筛分子早期分化的超微结构与深色细胞凋亡的超微结构十分相似, 是否与二者都是执行输导功能有关,还需作进一步的研究.结论蜜腺组织中这些细胞的发育和分化虽然不尽相同,但其作用却相类似并且与整个蜜腺的发育周期相协调,为原蜜汁的运输、加工和蜜汁终通过蜜腺顶端的变态气孔排出提供了可靠的保证.
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拟南芥醇腈酶基因在大肠杆菌中的表达优化及酶学性质分析
[目的]优化重组醇腈酶在大肠杆菌(Escherichia coli)中的表达工艺,考察其酶学性质.[方法]基于密码子的偏好性,对拟南芥(Arabidopsis thaliana)醇腈酶基因进行密码子优化,克隆该基因到表达载体pET-28a(+)上,构建重组质粒pET-28a(+)-HNL-At.采用单因素法优化表达工艺,Ni柱亲和层析纯化目的蛋白,紫外荧光光度法考察酶学性质.[结果]通过IPTG诱导成功实现来源于拟南芥醇腈酶基因在大肠杆菌中的重组表达,对诱导条件优化后,发酵液中重组酶活力达到29.3U·mL-1,较未优化前提高68%.通过Ni柱亲和层析对目的蛋白进行纯化,经SDS-PAGE分析重组醇腈酶相对分子质量约为30kDa.通过酶学性质分析,适反应pH为5,适反应温度为30℃,比酶活为213.9U·mg-1.[结论]实现重组醇腈酶在大肠杆菌中的高效表达,优化工艺简单可行,酶学性质表征正确,为进一步的酶法制备手性氰醇类化合物奠定基础.
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抗汉坦病毒单链抗体基因向拟南芥遗传转化的初步研究
目的 构建抗汉坦病毒mAb 1A8 scFv的转基因拟南芥植株.方法 从含有1A8 scFv基因的重组质粒中酶切获得携带Nos终止子的抗体基因片段,将其与CaMV 35S启动子相连克隆入载体pCAMBIA2301,构建1A8 scFv基因的植物表达载体1A8scFv-pCAMBIA2301.通过农杆菌介导的花粉管法将其转入拟南芥,PCR及Dot blot检测是否获得转基因植株,ELISA和固相酶联斑点实验检测表达产物的生物学活性.结果 酶切鉴定结果证明1A8 scFv基因被成功克隆入植物表达载体pCAMBIA2301,构建获得1A8scFv-pCAMBIA2301重组质粒.PCR及Dot blot检测证明获得抗汉坦病毒mAb 1A8scFv的转基因拟南芥植株.ELISA和固相酶联斑点实验结果证明在转基因拟南芥中成功表达了具有生物学活性的抗汉坦病毒mAb 1A8 scFv片段.结论 成功地将外源基因转入拟南芥中并表达.为进一步研究利用植物表达医用抗体奠定了基础.
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拟南芥硝酸调控基因研究进展
氮素是植物生长发育所必需的重要营养成分，它参与植物生长中的许多生理过程，如促进根的生长、调节植物发育等。在植物中，有一个复杂的响应硝酸的系统，但是目前对于硝酸响应和调控机理的研究还很不充分，对参与在硝酸调控信号途径中基因的认识也还很不够。对硝酸调控基因研究，可以为我们解析硝酸信号调控网络提供参考，从而为进一步深入研究植物对硝酸高效利用的分子机理提供理论依据，因此，对硝酸调控基因的研究至关重要。
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抗HTNV mAb 3G1单链抗体基因转化植物的研究
目的 构建抗HTNV mAb 3G1 scFv的转基因拟南芥植株.方法 从含有3G1 scFv基因的重组质粒中酶切获得含有该目的基因的表达框,将其克隆入载体pCAMBIA2301,构建植物表达载体3G1scFv-pCAMBIA2301.通过农杆菌介导的花粉管法将其转入拟南芥,PCR和Southern blotting检测是否获得转基因植株.组织化学染色检测标记基因GUS是否表达.结果 限制性内切酶酶切鉴定结果证明3G1 scFv基因被成功克隆入植物表达载体pCAMBIA2301,构建获得3G1scFv-pCAMBIA2301重组质粒.PCR和Southern blotting检测证明获得抗HTNV mAb 3G1 scFv的转基因拟南芥植株.组织化学染色结果表明,标记基因亦高效表达.结论 成功地将外源基因转入拟南芥中并表达,为进一步研究利用植物表达医用抗体奠定了基础.
