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利用组织培养技术开拓中药研究开发的新空间
药用植物组织培养是现代生物技术在药用植物学领域中研究与应用的一个重要组成部分,在中药材资源的短缺问题越来越严重的今天,有必要发挥中医药的特色,加强中药的研究与开发.利用药用植物组织培养技术,可以培育中药材新品种,对药用植物进行脱病毒,保存珍稀濒危种质资源、开发新药和活性物质.利用药用植物组织培养技术,还可以开拓中药研究与开发的新空间,论述了面向21世纪中药新药研究开发思路与方法.
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广佛手组织培养中的污染及防治研究
目的:研究广佛手组织培养中的污染问题,并提出防治措施.方法:采取广佛手顶芽、带节茎及叶片为材料,以MT为基本培养基,附加0.1mg·L-1的6-BA,对影响外植体消毒效果的因素进行了研究.结果:采用0.1%升汞(HgCl2)消毒6min后再用50mg/L的头孢噻肟(Cefotaxime)浸泡30min,消毒效果好;广佛手外植体在夏季污染率和死亡率均高,冬季广佛手的污染率和死亡率均降至低,成活率高,达67.9%;不同外植体中顶芽的污染率低,成活率高,叶片次之,带节茎的污染率高.结论:升汞与抗生素配合使用,消毒效果较好,能明显降低污染率与死亡率,提高成活率;冬季取材,外植体带菌率较低,可以提高广佛手组织培养的成功率.
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不同区域的肌腱组成细胞的增殖能力及其行为差异
背景:目前已经证实肌腱具有内在愈合的潜能,但不同区域的肌腱组成细胞在修复过程中的增殖能力及行为差异还有待进一步研究.目的:研究不同区域的肌腱组成细胞在体外培养过程中的增殖能力及行为学差异.设计:重复测量设计.地点和对象:南通医学院第二附属医院骨科.白色纯种Leghorn鸡15只,雌雄不拘,体质量约400 g,购自南通医学院动物中心.方法:将鸡Ⅱ区趾深屈肌腱立体分割成4区:腱外膜组织、外膜下腱组织、亚中心腱组织、中心腱组织.两相同区域肌腱组织按间隔0.5,1,2 mm 3种排列方式培养于24孔培养板中,每种排列方式培养5孔.完整肌腱段组织也以相同方式培养作为对照.每天计数每种排列方式细胞游出数目、方向及来源,培养第9天作组织学检查.主要观察指标:①不同区域的肌腱组织细胞增殖能力及其行为.②立体分割的肌腱段组织体外培养后的组织学变化.结果:细胞游出早、数目多的组织为腱外膜组织,其他依次为亚中心腱组织、中心腱组织、外膜下腱组织.两腱外膜组织间距越小细胞游出越早,而其他区域的肌腱组织则相反.组织学检查显示培养第9天的完整肌腱段组织,表面腱外膜细胞明显增殖;外膜下腱组织、亚中心腱组织内的腱内膜细胞与培养前相比,差异无显著性意义(t=2.31,P＞0.05);中心腱组织的腱内膜细胞(84±3)较培养前(167±5)减少,两者间差异有非常显著性意义(t=58.08,P＜0.01).培养第9天的中心腱组织,其腱内膜细胞(237±3)比培养前(167±5)增多,两者差异有非常显著性意义(t=33.73,P＜0.01).结论:不同区域的肌腱组成细胞在体外培养过程中的增殖能力及行为存在差异.
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肌腱损伤后腱中心区域组织愈合能力
背景:实验发现,在肌腱损伤后,腱中心部分细胞生长增殖能力不如腱外膜细胞和周边部分腱内膜细胞,肌腱中心部位细胞的分裂增殖能力及自愈能力究竟如何?目的:研究肌腱损伤后腱中心区域组织的愈合能力.设计:设立对照的重复测量设计.地点和对象:南通医学院第二附属医院骨科.白色纯种Leghorn鸡8只,雌雄不拘,体质量约400 g,购自南通医学院动物中心,许可证号SYXK(苏)2002-0066.干预:在无菌条件下切取鸡双侧长趾Ⅱ区趾深屈肌腱,切成4 nn长的肌腱段,分为两组,每组12条.实验组:切除腱外膜和外膜下腱组织肌的肌腱中心区域组织;对照组:仅剥除腱外膜组织的肌腱段.将两组肌腱组织进行体外培养,另取4条肌腱作正常对照组.主要观察指标:实验组和对照组于培养第9,8,7天取标本及正常对照组均进行大体观察和组织学检查.结果:腱细胞数两组培养前为167±13,培养第9,8,7天对照组分别为80±7,5±10,12±14,实验组分别为237±16,02±16,88±10.对照组均明显少于实验组及培养前,差异有显著性意义(P＜0.01);实验组比培养前明显增多,差异有显著性意义(P＜0.01);但培养第18和27天时,实验组腱细胞数较培养第9天少(P＜0.01).结论:屈肌腱损伤后肌腱中心区域组织有良好的愈合能力.
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应力环境组织培养法保存的人骨软骨移植物中胶原和基质金属蛋白酶组织抑制剂3
背景:应力可以对体内外软骨组织或软骨细胞产生多种影响.目的:观察应力环境对普通组织培养基体外保存的骨软骨移植物保存质量的影响.方法:将正常人的骨软骨移植物分成3 组:对照组即新鲜移植物,普通组移植物采用普通组织培养法保存,应力组用摇床作为动态加载装置对普通组织培养法保存的骨软骨移植物进行持续周期性应力加载.结果与结论:储存移植物2 周时,Western blot 法和透射电镜观察显示,与静态环境下保存相比,动态加载环境使关节软骨细胞外基质中基质金属蛋白酶组织抑制剂3 的表达明显提高(P < 0.01),能更好地保护基质中胶原成分的超微结构.结果证实,应力环境有利于保存人同种异体移植物软骨细胞和胶原的超微结构,动态非接触加载可提供一种更好的库存人同种异体骨软骨移植物的方法.
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人参皂甙Rg1对体外培养猪骨髓基质细胞增殖的影响
背景:既往的研究表明,人参总甙对体外培养的骨髓造血干细胞及祖细胞有促进增殖作用,对骨髓造血因子具有促分泌作用,但对骨髓基质细胞的增殖作用研究较少.目的:观察人参皂甙Rg1对体外培养猪骨髓基质细胞增殖的影响.设计:对照观察.单位:南京医科大学第一附属医院心内科、皮肤科,南京医科大学药理教研室.材料:实验于2002-01/2003-02在南京医科大学心血管药理实验室完成.选择实验用猪及人参皂甙Rg1干粉.方法:将体外培养的骨髓基质细胞分为对照组及实验组,实验组加入不同浓度的人参皂甙Rg1(10-7,5×10-7,10-6,5×10-6mol/L)诱导培养,对照组加入等量培养基.分别应用成纤维细胞体外集落形成法、[3H]TdR掺入法和四甲基偶氮唑盐法检测骨髓基质细胞的增殖情况.主要观察指标:①人参皂甙Rg1对体外培养骨髓基质细胞的成纤维样集落形成单位生长的影响.②人参皂甙Rg1对骨髓基质细胞[3H]TdR掺入的影响.③人参皂甙Rg1对四甲基偶氮唑盐法测定骨髓基质细胞增殖的影响.结果:①人参皂甙Rg1对体外培养骨髓基质细胞的成纤维样集落形成单位生长的影响:实验组成纤维细胞体外集落形成法集落数目均高于对照组(P＜0.05～P＜0.01),尤以(5～50)×10-7 mol/L组为明显,在浓度为10-6 mol/L集落数即达高峰.②人参皂甙Rg1对骨髓基质细胞[3H]TTdR掺入的影响:在人参皂甙Rg1浓度为10-6 mol/L时,其骨髓基质细胞[3H]TdR掺入率明显高于对照组(P＜0.05～P＜0.01),随着剂量的增加其促进增殖作用增强.③人参皂甙Rg1对四甲基偶氮唑盐法测定骨髓基质细胞增殖的影响:实验组的光密度值明显高于对照组(P＜0.05～P＜0.01),并呈剂量依赖性.结论:人参皂甙Rg1对体外培养猪骨髓基质细胞具有增殖作用,且具有剂量依赖性.
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骨折愈合刺激素(金葡液)对体外培养成骨细胞的影响
目的观察骨折愈合刺激素(金葡液)对体外培养成骨细胞的作用。方法在新生SD大鼠头颅骨第二继代成骨细胞(OB2)培养液中分别加入不同浓度(20000～200U/L)骨折愈合刺激素(金葡液),分别观察OB2的增殖功能(用波长570nm处OD值表示)、分化功能[用碱性磷酸酶(ALP)活性表示]和矿化功能(用矿化结节数量/视野表示)。结果OD值实验组为(0.336±0.073)～(0.359±0.051),对照组为0.347±0.035;ALP(U/g蛋白质)活性实验组为83±9,对照组为81±4;矿化结节数量/视野(个)实验组为6.000±1.826,对照组为1.5±1.0。结论骨折愈合刺激素(金葡液)各浓度对OB2的增殖和分化功能均无明显作用(P》0.05),而对其矿化功能具有明显的刺激作用(P《0.01)。
关键词： 骨折愈合刺激素(金葡液) 成骨细胞 组织培养 骨折愈合 -
组织工程化培养生物反应器传质过程分析
目的:分析组织工程化培养生物反应器传质过程,讨论影响传质能力的关键因素,探索改善传质能力的方法.方法:实验于2005-01/02在军事医学科学院卫生装备研究所组织工程实验室完成.建立理想模型,理论分析液膜中、培养液中的营养物从培养物表面到培养物内部、培养物内部细胞新陈代谢废物扩散的传质过程.结果:初步给出了传质过程的理论方程,给出了作为关键因素之一的压力对传质过程影响的微分方程.结论:传质过程是一个多因素相互制约的过程,压力是传质过程中的关键因素,选择合适的脉冲压力有助于改善传质水平,为设计新型高传质能力的组织工程化培养生物反应器提供了一种新的思路.
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高压蒸气灭菌方法的研究
在组织培养中常用高压蒸气灭菌法对一些物品及试剂进行灭菌 ,但是由于使用方法等问题,经常出现因灭菌不彻底而导致组织培养污染的现象.如何正确使用高压蒸气灭菌方法,我们进行了比较研究,现报告如下:
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人胎儿卵巢移植可行性的实验研究
目的探讨胎儿卵巢能否用于临床移植.方法取自流产或病理原因水囊引产的胎儿卵巢共49份.将卵巢切成碎块进行组织培养,培养后观察组织学变化,同时测定培养液中雌二醇(E2)浓度;取培养前后胎儿卵巢用免疫组化法检测 FSH-Binding、LH-Binding、LH-R、HLA-ABC、HLA-DR抗原含量;观察冷冻保存后卵泡形态发育及E2分泌.结果胎儿卵巢在体外培养条件下,能进一步发育,而且能分泌E2;胎儿卵巢早于20周出现FSH-Binding、LH-Binding、LH-R阳性表达;胎儿卵巢 HLA -ABC、HLA-DR抗原含量明显低于成人卵巢,经体外培养后HLA-DR抗原含量进一步降低;胎儿卵巢复苏培养后卵泡仍能进一步发育和产生E2.结论胎儿卵巢可用于卵巢移植,作为供体优于成人卵巢.
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深低温保存兔角膜细胞体外培养的实验研究
本文采用体外组织培养技术对深低温保存的兔角膜的上皮细胞、内皮细胞和基质细胞进行培养和观察.结果表明,上皮细胞一般在培养5～7天贴壁,2周以后出现老化和脱落,仅能传1代.内皮细胞2～3天可贴壁,不易传代.基质细胞1周后贴壁,能传2～3代.
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实验用犬淋巴细胞染色体的培养方法
关于各种动物组织培养报道较多,但有关犬的组织培养以及染色体的制备较少见.借鉴人类染色体培养技术,在此基础上反复摸索、实验总结出一套犬的淋巴细胞染色体的培养方法.
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牛蒡无性系建立研究
为保存野生资源,满足栽培对种苗的需要,以牛蒡嫩茎为材料,应用组织培养的方法,进行了嫩茎愈伤组织诱导与分化、分化芽生根、试管苗的生根继代及移栽和定植的研究.结果表明:MS+6-BA0.3mg·L-1+2,4-D2.0mg·L-1是嫩茎愈伤组织诱导培养和继代增殖培养的理想培养基；MS+6-BA1.5mg·L-1+NAA0.1mg·L-1+AgNO31.2mg·L-1是愈伤组织分化培养的理想培养基；Whire+NAA0.1mg·L-1+IAA0.2mg·L-1是不定芽生根培养、试管苗生根继代培养及快速繁殖的理想培养基.试管苗易移栽和定植易成活,且定植的试管苗保持了野生牛蒡的所有生物性状.
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玉竹组织培养研究
目的:利用组织培养技术,对玉竹进行体外繁殖,为加强玉竹优良种质资源的保存和选育莫定基础.方法:设计不同激素组合的培养基,对玉竹进行组织培养研究.结果:花通过愈伤组织可形成再生植株,根状茎可直接分化出不定芽.结论:通过组织培养技术能加快玉竹的繁殖,加强玉竹优良种植资源的选育.
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忍冬组织培养研究进展
目的:探讨忍冬组织培养的佳外植体、愈伤组织诱导的佳配方、试管苗增殖的佳条件、试管苗生根的佳配方.方法:收集、整理、归纳近20年来国内外有关忍冬组织培养的文献资料.结果:将文献中外植体的选取、灭菌和消毒等情况,愈伤组织诱导的情况,试管苗增殖的佳条件的情况及试管苗生根的情况分别列表进行对照比较.结论:各种外植体都可诱导不定芽的分化,其中顶芽是较好的部位.忍冬愈伤组织的诱导多以MS作为基本培养基,并附有1.0～2.5 mg/L细胞分裂素6-BA和0.01～1 mg/L生长素NAA等植物生长物质.忍冬增殖培养主要以MS培养基为主,添加1.0～2.5 mg/L 6-BA和0.1～0.5 mg/L NAA.忍冬生根培养基多采用1/2MS、1/4MS培养基,尤其多以1/2MS做为基本培养基,蔗糖浓度一般在1％～3％,附加NAA或IBA,浓度一般在0.5～1.0 mg/L.
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中药铁皮石斛研究概况
铁皮石斛是药食两用名贵中药之一,石斛中之极品,具有独特的药用价值,应用极其广泛.其含有多糖、氨基酸、挥发油等多种化学成分,具有抗氧化、抗肿瘤、降血糖等多种生物活性.该文就铁皮石斛组织快速繁殖培养、化学成分、药理作用、临床应用方面进行了综述概况.这对其药用价值和开发利用价值的进一步研究提供重要前提.
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人工培养蛹虫草多糖的研究
以人工培养蛹虫草为原料,分离纯化得到蛹虫草多糖(CMPS),经紫外扫描测定其为糖蛋白.用凝胶过滤色谱法和聚丙烯酰胺凝胶电泳法验证了纯度.测定了多糖的分子质量、糖含量和糖醛酸含量、单糖组成及摩尔比、蛋白含量及氨基酸组成、苷键构型等.
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肝细胞生长因子对兔关节软骨细胞培养影响的实验研究
目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)对兔关节体外培养软骨细胞的作用.方法:取10只大耳白兔的关节软骨制成软骨细胞悬液,接种到DMEM培养基中培养,细胞传至第3代后,加入不同浓度的HGF继续培养.通过MTT比色法及流式细胞仪技术检测培养细胞增殖情况.结果 :HGF使软骨细胞增殖明显加快(P<0.05),HGF的作用存在剂量效应关系.不同浓度的HGF对关节软骨细胞增殖的促进作用不同,1 ng/ml时对细胞分裂增殖效应有作用,5～10 ng/ml作用效果明显,加大HGF浓度,并未见促增殖效应加强.结论:HGF对关节软骨细胞有明显促增殖作用.
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由血管生成抑制剂的发现谈福克曼的科研思维
1 奇怪的现象--问题的发现60年代初期,福克曼和他的同事在研究无细胞的血代用品使培养中的甲状腺细胞保持存活的能力时,在甲状腺表面放了少量兔子的黑瘤细胞.根据使用正常血液组织培养的经验,他们设想黑瘤细胞会迅速生长下去.结果却出乎他们意料:当黑瘤细胞长到形成豌豆大小的肿瘤时,便停止生长了.
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干细胞微环境促进体外培养的卵巢组织内卵泡发育成熟
目的:研究骨髓间充质干细胞(Mesenchymal stem cell,MSC)-软琼脂培养体系对小鼠卵巢组织片中卵泡发育的作用.方法:分离、培养、FACS鉴定小鼠MSC;建立MSC-软琼脂"小岛"培养体系,500 μm厚小鼠卵巢组织片嵌入支架上培养.培养液内加入1.5 IU/ml PMSG,每2天半量换液1次,放射免疫法动态检测雌二醇(E2)和孕酮(P)含量.第6天加入1.5 IU/nd hCG,17 h后体视显微镜下获取窦卵泡内颗粒细胞-卵母细胞复合物(cumulus-oocyte complex,COC),体外受精后观察受精率和囊胚形成率.结果:卵巢组织在MSC-软琼脂培养体系中存活良好,卵泡直径、颗粒细胞数量和层数不断增加,E2水平稳定上升.加入hCG 17 h后,卵泡进一步成熟,有窦腔形成,P水平急剧上升.获取的卵母细胞体外受精率明显低于体内成熟组(62.5% vs 89%,P<0.01),但是囊胚形成率两者间比较差异无统计学意义(82.4%vs 87.5%,P>0.05).结论:MSC-软琼脂培养体系有利于卵泡发育、成熟,获得的卵母细胞功能良好.
