首页 > 文献资料
-
基于mRNA稳定性推断死亡时间的研究
目的探讨大鼠死后不同时间肾、脾3-磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH) mRNA的表达对死亡时间(PMI)推断的应用价值.方法 28只大鼠断颈处死后置于20℃温控系统内,分别于死后0,8,16,24,32,40,48h共7个时相点(n=4)解剖,利用荧光RT-PCR技术检测大鼠肾、脾GAPDH mRNA相对表达量的变化.结果在大鼠死后40h肾、32h脾内可检测出GAPDH mRNA,且其表达产物均呈规律性下降趋势(荧光强度逐渐变暗并终消失).结论检测大鼠死后不同时间肾、脾GAPDH mRNA的表达对PMI推断具有一定的应用价值.
关键词： RNA稳定性 死亡时间 甘油醛-3-磷酸脱氢酶类 -
异基因造血干细胞移植后恶性血液病患者新增加染色体核型异常的研究
目的 探讨异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)前后恶性血液病患者染色体核型的变化规律及其在allo-HSCT预后监测中的意义.方法 回顾性分析21例allo-HSCT后复发的恶性血液病患者初诊和复发时的染色体核型资料,并结合临床进行相关性分析.染色体检查采用24 h短期培养R显带技术.结果 21例恶性血液病患者中11例(52.38%)患者allo-HSCT后复发时染色体核型发生改变,多见于1、3、6、12、17、21号等染色体,而且染色体数目和结构异常多同时出现.移植复发时染色体核型出现改变的患者移植复发中位生存时间显著短于未出现改变的患者(79 d 对522 d,P=0.027).出现6号染色体三体的患者比未出现该改变患者的移植复发中位生存时间明显缩短(9 d 对 275 d,P=0.005).结论 allo-HSCT后患者复发时染色体核型的改变与预后有关.
-
血浆中丙型肝炎病毒核酸在不同保存条件下的稳定性研究
目的 探讨不同的温度和时间条件对血浆中丙型肝炎病毒核酸(HCV RNA)稳定性的影响. 方法 选取在本院做HCV RNA定量检测的病人,采集患者外周血4ml,并进行分装,将分装的血浆分别于室温保存7d,4℃保存12d,-20℃保存4周,反复冻融5次,利用实时荧光定量聚合酶链反应检测血浆HCV RNA在相应温度下不同时间点的水平,并分别与样本采集时的HCV RNA比较,比较不同保存条件下血浆HCV RNA的稳定性. 结果 血浆样本在室温保存7d时,HCV RNA平均下降幅度≤2.51 U/mL;4℃保存12d时,HCV RNA平均下降幅度≤1.95 U/mL;-20℃保存4周时,HCV RNA平均下降幅度≤1.41 U/mL;反复冻融5次时,HCV RNA平均下降幅度≤1.26 U/mL. 结论 血浆样本在-20℃保存4周、反复冻融5次时,HCVRNA水平下降的幅度并不明显;但室温保存7d、4℃保存12d时HCV RNA水平显著下降.因此,在日常的工作中应尽量避免在该温度和时间条件下保存及运输血浆,以保证HCV RNA.
-
雌激素对SLE患者T细胞CD154mRNA稳定性的影响
目的 探讨SLE患者T细胞CD154表达的雌激素依赖性增加是否与其mRNA的稳定性变化相关.方法 用不含或含有17-β雌二醇(10-7mol/L)的无血清培养液培养SLE女性患者(10例)及正常人对照(7例)的T细胞共18 h.取一部分T细胞放至用抗CD3包被的培养皿中进一步培养激活,并在平行培养中加入放线菌D以阻止新的mRNA合成.CD154 mRNA的稳定性用RT-PCR测定,并与不经刺激的T细胞(静止细胞)作对照.结果 静止的SLE T细胞在含雌二醇的培养液中CD154/G3PDH为36.9～100,(x)=75.5;不含雌二醇的CD154/G3PDH为14.5～100,(x)=73.6,两组比较,P=0.88;正常T细胞分别为34.2～100,(x)=76.3和47～100,(x)=74.3,两组比较,P=0.65.在对雌激素应答过程中,静止的SLE T细胞和正常T细胞mRNA的稳定性差异均无统计学意义.同样,激活的SLE T细胞在含雌二醇的培养液中CD154/G3PDH为34～100,(x)=86.8;不含雌二醇的CD154/G3PDH为28.5～100,(x)=54.5,两组比较,P=0.15;正常T细胞分别为73～100,(x)=87.7和40～98,(x)=68.1,两组比较,P=0.077.在雌激素的作用下,激活的SLE T细胞和正常T细胞CD154 mRNA的稳定性差异也无统计学意义.结论 SLE T细胞中CD154的雌激素依赖性表达增加并不是由mRNA稳定性变化引起.
-
离心前保存和冷冻保存时间对HCV RNA含量的影响
目的:探讨标本离心前保存和冷冻保存时间对丙型肝炎病毒(HCV)核糖核酸(RNA)含量的影响.方法:筛选高、低载量的HCV RNA反应性标本各一个,接驳混匀其血浆和浓缩红细胞,从混匀好的2个血袋中各留取48支试管,每12管为一组,分为离心前保存0、4、8、24 h组,比较离心后各组间HCV RNA检测结果.挑选HCV RNA反应性标本一个,从其浆袋中留取32支试管冷冻保存,每8管为一组,分为冷冻保存1、7、30、40 d组,比较各组间HCV RNA检测结果.结果:4℃保存条件下,高、低载量组在离心24 h内各个时间段的HCV RNA含量差异无统计学意义(P>0.05),但各时间点高载量组HCV RNA含量明显高于低载量组(P<0.01);-20℃保存条件下,40 d内不同冷冻保存时间HCV RNA含量差异亦无统计学意义(P>0.05).结论:血站核酸检测标本4℃保存可在24 h内离心,-20℃保存可在40 d内完成检测.
-
KH型剪切调控蛋白:星形胶质细胞炎性细胞因子生成检测点
中枢神经系统(CNS)慢性炎性反应是许多神经退行性疾病和自身免疫性疾病的主要病理特点之一.作为免疫活性细胞,星形胶质细胞(Ast)在CNS炎性反应过程中发挥了重要作用.它可表达许多细胞因子,如肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-1β(IL-1β)等,这些细胞因子可直接或通过募集免疫细胞等途径间接促进炎性反应.检测点的存在可保证这些细胞因子的生成受到严密控制.细胞因子mRNA3’-非翻译区的腺苷酸/尿苷酸富含元件(ARE)由于可调节mRNA稳定性和翻译效率而扮演着主要检测点的角色.KH型剪切调控蛋白(KSRP)是一种RNA结合蛋白,可通过与ARE结合降低mRNA的稳定性.本研究检测了KSRP对Ast细胞因子表达和旁分泌表型的影响.笔者发现了一个包括TNF-α和L-1β在内的炎性介质网络.与同窝出生的对照小鼠相比,KSRP-/-小鼠Ast上述炎性介质的表达在RNA水平增高了2～4倍.而这种KSRP-/-小鼠Ast激活后产生的TNF-α和IL-1β甚至能达到对照组的15倍以上.离体情况下,KSRP-/-Ast条件性培养液有趋化作用且能诱导神经元死亡.令人惊讶的是,笔者发现仅通过特定途径激活Ast后才能观察到部分mRNA半衰期延长.荧光素酶报告系统研究显示KSRP可在转录水平和转录后水平调节细胞因子基因的表达.本研究提示KSRP在促炎介质的调控方面发挥重要作用,因此在CNS炎性和自身免疫性疾病中有广泛意义.
