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Caspase-1抑制剂对实验性重症急性胰腺炎肺损伤的保护作用
目的 评价Caspase-1抑制剂二甲基苯甲酰羟甲酮对实验性重症急性胰腺炎(SAP)肺损伤的保护作用.方法 SD大鼠42只,随机分为3组:健康对照组(HC组,n=6);SAP造模+生理盐水组(SAP-S组,n=18);SAP造模+ICE抑制剂组(SAP-ICE-Ⅰ组,n=18).以5%牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管制作大鼠SAP模型.SAP-S组于造模后2h腹腔注射生理盐水1ml,12h后重复1次;SAP-ICE-Ⅰ组于造模后2h腹腔注射ICE抑制剂.HC组模拟胰胆管穿刺操作,但不注射药物.采用ELISA法测定血清IL-1β水平;半定量RT-PCR检测肺内Caspase-1,IL-1β及IL-18 mRNA的表达,并观察肺湿干重比率及组织病理变化.结果 SAP-S组血清IL-1β水平在6h、12h、18h时分别为276.77±44.92、308.99±34.95、311.60±46.51pg/ml,显著高于HC组(P<0.01);SAP-ICE-Ⅰ组与SAP-S组比较水平显著降低(P<0.01).HC组肺内可见Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA表达;与HC组比较,SAP-S组3个时间点的表达水平显著上调(P<0.01);SAP-ICE-Ⅰ组与SAP-S组比较,IL-1β及IL-18mRNA的表达显著下调(P<0.01),Caspase-1 mRNA表达则无显著改变.SAP-S组肺湿干重比率比HC组显著升高(P<0.05,P<0.01);且显著高于SAP-ICE-Ⅰ组(P<0.05).Caspase-1抑制剂治疗使肺损伤程度减轻.结论 Caspase-1的激活、IL-1β及IL-18的过度表达在SAP肺损伤过程中发挥重要的作用;抑制Caspase-1可有效地保护SAP肺损伤.
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Caspase-1抑制剂对重症急性胰腺炎大鼠肝IL-18表达的影响
目的 观察Caspase-1抑制剂对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肝组织及肝内IL-18表达的影响.方法 采用4%牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管诱发SAP模型.SD大鼠42只,随机分为3组:对照组(HC组,n=6);SAP造模+生理盐水组(SAP-S组,n=18);SAP造模+Caspase-1抑制剂组(SAP-ICE-Ⅰ组,n=18).SAP-S组于造模后2h腹腔注射生理盐水1ml,12h后重复1次;SAP-ICE-Ⅰ组于造模后2h腹腔注射ICE抑制剂,12h后重复1次.HC组模拟胰胆管穿刺操作,但不注射药物.SAP-S组与SAP-ICE-Ⅰ组于造模后6、12、18h心脏穿刺抽血,测血清淀粉酶(AMY)、谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)水平,并测定腹水量,留取标本在光镜下观察胰腺及肝组织病理学改变,采用免疫组化方法 检测IL-18在肝脏中的表达和定位,并用Western blotting方法 检测肝内成熟IL-18蛋白的表达.结果 与HC组比较,SAP-S组与SAP-ICE-Ⅰ组血清AMY、ALT、AST水平明显升高,腹水量明显增多(P<0.01);与SAP-S组相比,SAP-ICE-Ⅰ各组血清AMY、血清ALT、AST水平和腹水量有显著下降(P<0.01).光镜下,SAP-S组胰腺和肝组织病理损害程度随时间明显加重,与SAP-S组相比,SAIXlCE-Ⅰ组对应时间点胰腺病变程度有所减轻,而肝组织损伤未见明显变化.免疫组化结果 显示,Kupffer细胞胞质中IL-18的表达在SAP-S组和SAP-ICE-Ⅰ组较HC组明显增多,而SAP-ICE-Ⅰ组较SAP-S组明显减少.Western blotting结果 显示,成熟的IL-18表达在SAP-S组各时间点明显升高,与HC组相比均具有显著性差异(P<0.01),SAP-ICE-Ⅰ组各时间点较SAP-S组显著减少(P<0.01),除6h组外均较HC组无显著差异(P>0.05).结论 Caspase-1抑制剂可以抑制成熟的IL-18蛋白的表达,可以有效改善SAP时受损的肝脏功能.
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参附注射液对缺氧缺血性脑损伤新生大鼠半胱氨酸蛋白酶-1的影响
目的:探讨参附注射液( SFI)对缺氧缺血性脑损伤(HIBD)新生大鼠脑组织中半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase -1)蛋白和mRNA的表达.方法:制备新生大鼠HIBD模型,将新生7日龄Sprague - Dawley (SD)大鼠随机分为假手术组(S)、生理盐水对照组(C)、参附组(SF),每组按术后观察时间点不同进一步分为3h、12 h、24 h、6天、14天5个亚组,采用RT - PCR方法检测病变侧大脑皮层Caspase -1 mRNA的表达,用免疫组织化学法行Caspase -1免疫阳性细胞计数.结果:C组和SF组Caspase -1 mRNA和Caspase -1免疫阳性细胞计数在24 h、6天、14天均较S组升高(P＜0.01).24 h开始增加,6天达到高峰,随后开始下降,但14天仍高于S组(P＜0.01)；SF组Caspase -1 mRNA和免疫阳性细胞计数在24h、6天、14天较C组减少(P＜0.01).结论:参附注射液(SFI)下调HIBD新生大鼠Caspase -1蛋白和mRNA的表达水平,SFI对新生大鼠HIBD有保护作用.
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半胱氨酸蛋白酶-1激活的细胞因子在实验性重症急性胰腺炎肝损伤中的作用
目的:研究半胱氨酸蛋白酶(Caspase-1)激活的细胞因子在实验性重症急性胰腺炎(SAP)肝损伤中的作用. 方法:SD大鼠32只,随机分为四组:正常对照组、SAP 6 h组、SAP 12h组和SAP 18h组.采用5%牛磺胆酸钠逆行注入胰胆管诱发大鼠SAP模型.通过HITACHI-7150型自动生化分析仪检测大鼠血清谷丙转移酶(ALT)、谷草转氨酶(AST);采用ELISA法测定血清白细胞介素(IL)-1β水平;酶化学法测定肝组织髓过氧化物酶(MPO)活性;半定量RT-PCR检测肝内Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA的表达. 结果:造模后血清ALT、AST和IL-1水平显著升高,并伴有肝组织MPO显著增加,与正常对照组相比,其差异均具有显著性意义(P<0.01).正常对照组肝内可见Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA表达;SAP各组肝内Caspase-1、IL-1β及IL-18 mRNA的表达显著上调(P<0.01),而且与肝损伤的严重程度相一致. 结论:Caspase-1激活的细胞因子IL-1β及IL-18的过度表达在SAP肝损伤发病机制中发挥重要的作用.
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NLRP3和TLR4调控的细胞焦亡在痛风性关节炎中的作用
细胞焦亡是一种强烈促炎性的程序性细胞死亡过程,由半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)介导,NOD样受体蛋白3(NLRP3)炎症小体和Toll样受体蛋白4(TLR4)信号通路共同调控,其在痛风性关节炎发病过程中扮演了重要角色.本文对痛风性关节炎中细胞焦亡的调控机制进行系统阐述,为新药研究提供方向.
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Caspase-1对小胶质细胞中 NOD2介导的免疫耐受的调节
目的：观察小胶质细胞中是否存在核苷酸结合寡聚化结构域蛋白2（NOD2）介导的免疫耐受现象，并探讨其与 Caspase-1的关系。方法分别采用不同浓度的胞壁酸二肽（MDP）或肺炎链球菌刺激小胶质细胞24 h， Western blotting 检测各组 NOD2和核因子κB（NF-κB）的表达情况，ELISA 检测白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）的表达情况；用 MDP（100μg ／mL）分别预刺激细胞0、3、24 h 后再用同浓度 MDP 刺激24 h，用 ELISA检测 IL-6和 TNF-α的表达量；Caspase-1活性被 ATP 激活或被其抑制剂抑制后检测 IL-6和 TNF-α的变化情况。结果与无刺激处理相比，MDP 或肺炎链球菌刺激小胶质细胞24 h 后，NOD2、NF-κB、IL-6和 TNF-α的表达量均明显增加（P ＜0．05）；MDP 分别预刺激细胞0、3、24 h 后再刺激24 h，发现预刺激3 h 和24 h 的细胞 IL-6和 TNF-α的表达量均低于预刺激0 h；通过 ATP 激活 Caspase-1活性可抑制细胞 IL-6和 TNF-α的表达，抑制 Caspase-1活性可促进 IL-6和 TNF-α的表达。结论长时间 MDP 刺激可以诱导小胶质细胞的免疫耐受现象，此现象与 Caspase-1的活性具有一定关系。
关键词： 小胶质细胞 核苷酸结合寡聚化结构域蛋白 2 耐受 半胱氨酸蛋白酶-1 三磷酸腺苷 -
脑室周围白质软化早产儿血清半胱氨酸蛋白酶-1和白细胞介素-18水平的变化
目的 研究脑室周围白质软化(PVL)早产儿血清半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)和IL-18水平的变化及二者的相关性,探讨PVL的发病机制及Caspase-1、IL-18的临床意义.方法 采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测日龄48～72 h的13例PVL早产儿(PVL组)、17例脑室内出血(IVH)早产儿(IVH组)及20例健康对照早产儿(对照组)出生第3天血清Caspase-1和IL-18的水平.采用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 PVL组早产儿血清Caspase-1和IL-18均明显高于IVH组和对照组早产儿,两组比较差异均有统计学意义(Pa＜0.05)；IVH组和对照组早产儿血清Caspase-1和IL-18比较差异无统计学意义(P＞0.05)；PVL组早产儿血清Caspase-1和IL-18呈正相关(r=0.965,P=0.000).结论 Caspase-1和IL-18参与了早产儿PVL的发病机制,联合测定Caspase-1和IL-18可作为早期诊断早产儿PVL的方法之一.
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缺氧缺血对新生大鼠脑组织半胱氨酸蛋白酶-1的影响
目的 探讨缺氧缺血对新生大鼠脑组织半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的影响.方法 新生7日龄SD大鼠112只,结扎左侧颈总动脉后,吸入含8%氧气的氧氮混合气体,制成缺氧缺血性脑损伤(HIBD)模型,于HIBD后12、24 h,3、6、14 d取左侧大脑组织制成匀浆,用Western-blot方法测定Caspase-1蛋白表达量,比较不同时间组间蛋白表达的差异.同时光镜下观察脑组织病理变化.结果 缺氧缺血新生大鼠Caspase-1蛋白水平在24 h～6 d逐渐增高,并于6 d达到高峰(0.2839±0.0212),与其时间点前各组相比有显著性差异(P均＜0.01),14 d组Caspase-1仍保持较高水平,但与6 d组相比无显著性差异(P＞0.05).结论 Caspase-1参与HIBD的形成过程.
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新生儿缺氧缺血性脑病血清半胱氨酸蛋白酶-1、白细胞介素-1β、-18测定的意义
目的探讨新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)血清半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、IL-1β、IL-18的变化及其与脑组织损伤程度的关系.方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测HIE患儿70例(分轻、中、重3组)及正常对照组22例新生儿d3血清caspase-1、IL-1β和IL-18的水平.结果 1.与对照组比较,HIE各组血清caspase-1水平均显著增高(P分别<0.05,<0.01,<0.01);HIE组间两两比较,中度与轻度组比较有显著差异(P<0.01);重度组与其他两组比较血清caspase-1水平均显著升高(P<0.01).2.HIE组血清IL-1β、IL-18与对照组比较,中、重度HIE组均显著增高(P<0.01);轻度HIE组与对照组无显著差异(P＞0.05).HIE组间血清IL-1β、IL-18两两比较,中度与轻度组比较有显著差异(P<0.05);重度组与其他两组比较均显著升高(P均<0.01).3.血清caspase-1与IL-1β及IL-18均呈显著正相关(γ=0.7934 P<0.0001;γ=0.6677,P<0.01).结论血清caspase-1、IL-1β和IL-18测定有助于HIE的早期诊断及临床分度.
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新生儿缺氧缺血性脑病血清caspase-1和IL-18水平变化的研究
目的研究新生儿缺氧缺血性脑病(HIE)时血清半胱氨酸-1(caspase-1)和白细胞介素-18(IL-18)的变化及其临床意义.方法采用酶联免疫吸附法(ELISA)检测70例HIE患儿及22例正常足月新生儿第3天血清caspase-1和IL-18的水平.结果①新生儿HIE组血清caspase-1和IL-18明显高于对照组,两组比较差异均有显著性(P＜0.05);②与对照组比较,轻、中、重度HIE组血清caspase-1水平明显增高(P＜0.05,＜0.01,＜0.01).HIE组间两两比较,中度与轻度组比较差异有显著性(P＜0.01);重度组与其他两组比较血清caspase-1水平均明显升高(P＜0.01);③轻、中、重度HIE组血清IL-18与对照组比较,中、重度HIE组血清IL-18水平明显增高(P＜0.01);HIE组间血清IL-18两两比较,中度与轻度组比较差异有显著性(P＜0.05);重度组与其他两组比较均明显升高(P＜0.01);④血清caspase-1与IL-18呈正相关(γ=0.6677,P=0.0013).结论血清caspase-1水平与HIE临床分度基本一致,可作为辅助诊断HIE及协助其临床分度的可靠指标;急性期HIE血清IL-18水平的测定是早期辅助诊断HIE及判断病情严重程度的重要指标.
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Caspase-1抑制剂对重症急性胰腺炎大鼠肺IL-18表达的影响
目的 观察Caspase-1抑制剂对重症急性胰腺炎(SAP)大鼠肺组织及肺内IL-18表达的影响.方法 将42只SD大鼠随机分为对照组(n=6)、SAP-S组(n=18)和SAP造模+Caspase-1抑制剂组(SAP-ICE-Ⅰ组)(n=18).SAP-S组与SAP-ICE-Ⅰ组于造模后6、12、18h心脏穿刺抽血,动态监测血清淀粉酶、肺湿干重比率,光镜下观察胰腺及肺组织病理学改变,采用免疫组化和Western blotting方法检测肺内IL-18的表达情况.结果 SAP-ICE-Ⅰ各组血清淀粉酶、肺湿干重比率较SAP-S组有显著下降(P＜0.01).光镜下,SAP-ICE-Ⅰ组对应时间点胰腺和肺组织病理损害程度较SAP-S组明显减轻.免疫组化和Western blotting结果显示,SAP-ICE-Ⅰ组各时间点IL-18较SAP-S组显著减少(P＜0.01),但均显著高于对照组(P＜0.01).结论 Caspase-1抑制剂可以抑制成熟的IL-18蛋白表达,有效改善SAP时的肺损伤.
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NLRP3在矽肺肺纤维化发生发展中的作用及MCC950应用研究
目的 观察核苷酸结合寡聚化结构域样受体家族含热蛋白结构域蛋白3(NLRP3)炎症小体在矽肺肺纤维化发生发展的作用机制,探讨NLRP3抑制剂MCC950对矽肺肺纤维化的影响.方法 无特定病原体级Wistar雄性大鼠随机分为对照组、模型组和抑制剂组,每组20只.采用非暴露式气管插管法,模型组和抑制剂组大鼠一次性予质量浓度为50 g/L的游离二氧化硅混悬液1.0 mL造模,对照组予等体积灭菌0.9％氯化钠溶液;造模的同时,抑制剂组大鼠予剂量为10 mg/kg体质量的MCC950灌胃,模型组和对照组予等体积灭菌0.9％氯化钠溶液灌胃,每隔1天灌胃1次.各组分别于造模后7、14、28、56 d随机处死5只大鼠,称量大鼠体质量,观察肺组织肺泡炎及肺纤维化程度,采用酶联免疫吸附试验检测肺组织中白细胞介素(IL)-1β、IL-18、转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,蛋白免疫印迹法检测肺组织中NLRP3和半胱氨酸蛋白酶-1(Caspase-1)的相对表达水平.结果 大鼠体质量随观察时间的延长而增加(P<0.01).大鼠肺纤维化评分及肺组织中IL-1β、IL-18、TGF-β1水平均在染尘处理主效应上有统计学意义(P<0.01),从高到低依次为模型组、抑制剂组、对照组(P<0.01).在造模后7、14、28、56 d时间点上,抑制组大鼠肺泡炎评分和肺组织NLRP3、Caspase-1蛋白的相对表达水平均低于同时间点模型组(P<0.01),但高于同时间点对照组(P<0.01).结论 NLRP3/IL-1β/TGF-β1信号通路在矽肺肺纤维化发生发展中发挥重要作用;MCC950可能通过抑制NLRP3炎症小体的活化而抑制矽肺肺纤维化的发生发展.
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MRI联合血清caspase-1、IL-6检测在早产儿脑白质损伤诊断中的应用
目的 探究磁共振成像(MRI)联合血清半胱氨酸蛋白酶-1(caspase-1)、白细胞介素-6(IL-6)检测在早产儿脑白质损伤中的诊断价值.方法 选取该院2015年3月至2016年6月新生儿ICU病房57例脑白质损伤早产儿作为研究对象,另选取39例该院同期出生无脑损伤早产儿作为对照组,采用脑部MRI仪对所有早产儿进行检测,观察所有早产儿MRI及弥散加权成像(DWI)信号变化,对早产儿出生1、3、7 d血清中caspase-1、IL-6水平进行测定;创建受试者工作特征曲线(ROC),计算MRI、caspase-1、IL-6单独检测及联合检测的曲线下面积(AUC)值.结果 对照组常规MRI信号显示正常,T1加权信号加强.观察组中有10例DWI显示高信号,MRI信号正常;32例DWI显示信号增强,MRI显示T1加权信号增强,偶伴有T2低信号;15例DWI信号正常,MRI检测显示为T1加权信号增强,偶伴有T2信号减弱;线状损伤6例,簇状损伤14例,点状损伤37例.观察组血清中caspase-1、IL-6在1、3、7 d水平均显著高于对照组,差异有统计学意义(P<0.05).MRI、血清caspase-1、IL-6单独检测时三者灵敏度、特异度、准确度、AUC值差异无统计学意义(P>0.05);三者联合检测后AUC值明显升高,明显高于两两联合检测AUC值(P<0.05).结论 MRI联合血清caspase-1、IL-6检测对早产儿脑白质损伤诊断有较好的临床应用价值.
