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大鼠μ阿片受体及人咪唑啉-1受体在CHO细胞中的共同稳定表达
目的:建立共同稳定表达大鼠μ阿片受体及人咪唑啉-1受体的哺乳动物细胞表达系统.方法:采用脂质体介导的方法,将编码大鼠μ阿片受体和人咪唑啉-1受体的基因导入CHO细胞中,以放射配体-受体结合试验分析受体的表达水平,用cAMP积累试验分析表达受体的功能.结果:在共同稳定表达大鼠μ阿片受体及人咪唑啉-1受体的CHO细胞中,表达的μ阿片受体对3H-二丙诺啡(diprenorphine)的Kd和Bmax值分别为(0.24 ± 0.02)nmol/L和(1.83±0.13)pmol/mg蛋白;表达的咪唑啉-1受体对3H-可乐定的Kd和Bmax值分别为(3.72±0.25)nmol/L和(43.59±6.83)fmol/106细胞.表达的μ阿片受体抑制福司科林(forskolin)刺激下cAMP的积累,表达的咪唑啉-1受体抑制吗啡慢性处理、纳洛酮催促引起的cAMP超射.结论:首次建立了共同稳定表达μ阿片受体和咪唑啉-1受体的细胞模型.
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强啡肽对大鼠行为学和脊髓组织学改变的影响及受体机制
目的探明强啡肽(Dyn)对脊髓的损伤效应及其受体机制.方法观测大鼠鞘内注射DynA(1-13)或联合注射Kappa阿片受体拮抗剂nor-BNI或兴奋性氨基酸(EAA)的NMDA受体拮抗剂MK-801后的运动功能和脊髓病理学变化.结果注射30nmolDyn组3 d时,Tarlov运动功能评分下降,脊髓前角神经元数目减少,GFAP阳性神经胶质细胞数轻度增生.14 d时,Tarlov运动功能评分未恢复,神经胶质细胞增生明显.而鞘内联合注射100nmol nor-BNI、100nmol MK-801后3d时与单纯Dyn组结果相似,14 d时Tarlov运动功能评分明显恢复,脊髓前角神经元数目较Dyn组多,GFAP阳性神经胶质细胞增生不明显,nor-BNI组与MK-801组间比较差异不显著.结论Dyn鞘内注射可使大鼠运动功能、脊髓组织损害,而nor-BNI或MK-801有对抗其损害作用.Dyn的病理作用是通过Kappa阿片受体和EAA的NMDA受体两种途径介导的.
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白细胞介素-2对大鼠心肌Ca2+ATPase和Na+ /K+ATPase的影响
为了探讨IL-2对心肌细胞内钙影响的可能机制, 用光学法检测心肌肌浆网Ca2+ATPase的活性, 以及细胞膜Ca2+ATPase和Na+/K+ATPase的活性.结果: (1)用IL-2 (10、 40、 200、 800 U/ml)灌流心脏后, 其肌浆网Ca2+ ATPase的活性随IL-2浓度的升高而增强; (2)在ATP浓度为0.1～4 mmol/L时, Ca2+ATPase的活性随ATP浓度的升高而增强, 由IL-2 (200 U/ml)灌流后的心脏获得肌浆网(SR), 其Ca2+ATPase的活性对ATP的反应强于对照组; (3)在[Ca2+]为1～40 μmol/L时, 心脏SR Ca2+ATPase的活性随[Ca2+]增加而增强, 而IL-2灌流心脏后分离的SR, 其Ca2+ATPase活性在[Ca2+]升高时没有明显改变; (4)用nor-BNI (10 nmol/L) 预处理5 min后, IL-2 (200 U/ml)灌流后不再使SR Ca2+ATPase的活性增强; (5)用PTX (5 mg/L)预处理后, IL-2对SR Ca2+ATPase的影响减弱; (6)用磷脂酶C (PLC)抑制剂U73122 (5 μmol/L)处理后, IL-2不再使SR Ca2+ATPase活性增高; (7) 用IL-2直接处理从正常大鼠分离的SR后, 对SR Ca2+ATPase活性无明显影响; (8)IL-2灌流后, 对心肌细胞膜Ca2+ATPase和Na+/K+ ATPase活性没有显著影响.上述结果表明, IL-2灌流心脏后使心肌肌浆网Ca2+ATPase的活性增加, 心肌细胞膜上的κ-阿片受体及其下游的G蛋白和PLC介导了IL-2的作用.尽管IL-2提高SR Ca2+ ATPase对ATP的反应性, 但却抑制SR Ca2+ ATPase对钙离子的敏感性.IL-2对心肌细胞膜Ca2+ATPase和Na+/K+ ATPase的活性无明显影响.
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孤啡肽的研究进展
1995年底,发现了一种新型的内源性阿片肽--孤啡肽,它是1994年底发现的阿片样受体的内源性配体,孤啡肽与受体结合后介导许多不同于经典阿片受体的生理活动.本文对孤啡肽分布、药理作用及其机制的研究进展作介绍.
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NO/cGMP信号通路在鞘内吗啡预处理减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用
目的：探讨NO/cGMP信号通路在鞘内吗啡预处理减轻大鼠心肌缺血/再灌注损伤中的作用。方法大鼠建立鞘内置管的模型。随机分为9组,每组6只：SHAM组(假手术组)、CON组(对照组,生理盐水)、ITMP组(鞘内吗啡预处理,3μg·kg-1)、L-NAME+ITMP组(一氧化氮合酶阻断剂+鞘内吗啡预处理)、ODQ+ITMP组(鸟苷酸环化酶阻断剂+鞘内吗啡预处理)、KT5823+ITMP组(蛋白激酶G阻断剂+鞘内吗啡预处理)、L-NAME组、ODQ 组、KT5823组。 IT-MP组于心脏缺血前,鞘内注射吗啡10μl 5 min,间断5 min,重复3次；CON组以相同的方式注射生理盐水；L-NAME+ITMP组、ODQ+ITMP组、KT5823+ITMP组分别于吗啡预处理前10 min 鞘内注射 L-NAME(30 nmol,10μl)、ODQ(11 nmol,10μl)、KT5823(20 pmol,10μl)；L-NAME组、ODQ组、KT5823组为阻断剂自身对照组。除SHAM组行假手术操作不做其他处理,其余各组大鼠均行左冠状动脉缺血30 min,再灌注120 min 诱导心肌缺血/再灌注损伤。观察指标包括：血流动力学指标；心肌缺血危险区( AAR )、梗死区( IS )的体积、心肌梗死面积以IS/AAR表示。结果与CON组相比,ITMP组的IS和IS/AAR均明显下降(P<0.01)；与ITMP组比较,L-NAME+ITMP组、ODQ+ITMP组、KT5823+ITMP组的IS和IS/AAR均升高( P<0.01)。与SHAM组比较各组MAP和 RPP在缺血30 min降低(P<0.05),与基础值比较,除SHAM组外,其余各组MAP和RPP在缺血30 min降低(P<0.05)。结论 NO/cGMP的信号通路可能参与介导鞘内吗啡预处理,对大鼠心肌缺血/再灌注损伤的保护作用。
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D-丙2,D-亮5脑啡肽对人肝癌细胞生长、迁移能力的影响及机制研究
目的:探讨δ阿片受体激动剂D-丙2,D-亮5脑啡肽(DADLE)对人肝癌细胞生长及迁移能力的影响及机制.方法:分别以不同浓度的DADLE(0.01、0.1、1.0和10 μmol/L)处理对数生长期的HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖活力的变化,划痕实验观察细胞迁徙能力的变化,RT-PCR和Western blot法检测PKC(蛋白激酶C)、IQGAP1(含IQ结构的GTP酶活化蛋白1)的mRNA和蛋白表达变化.结果:与对照组相比,加入不同浓度的DADLE后,MTT法显示肝癌细胞的增殖能力明显增加,并且具有浓度依赖性.划痕实验显示加入DADLE可明显增强肝癌细胞的迁徙能力;RT-PCR和Western blot显示加入DADLE可显著增加肝癌细胞内PKC和IQGAP1的mRNA和蛋白表达水平.结论:DADLE激活δ阿片受体对人肝癌细胞的生长及迁徙具有促进作用,其机制可能与增加PKC和IQGAP1表达实现的.
