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BHLHB2参与人胰腺癌细胞的迁徙、凋亡及EMT
目的 进一步研究前期实验结果证明的人胰腺癌新颖的独立预后因子BHLHB2在人胰腺癌细胞中的相关分子生物学功能.方法 应用siRNA干扰技术,在人胰腺癌细胞株SU86.86中使BHLHB2表达沉寂,应用迁徙实验研究BHLHB2与细胞迁徙的关系；应用更生霉素(ACT-D)诱导细胞凋亡,研究BHLHB2与细胞凋亡的关系；应用Western blot方法研究BHLHB2与EMT的相关性.结果 人胰腺癌细胞BHLHB2表达沉寂后,细胞的迁徙明显增快.应用ACT-D进行凋亡诱导,BHLHB2表达沉寂后与对照组相比,发生凋亡的细胞数目显著增加(10μg/L,P ＜0.05;100 μg/L,P＜0.05).Western blot结果表明,BHLHB2表达沉寂后可显著降低E-cadherin的表达(P＜0.01).结论 BHLHB2与人胰腺癌细胞的迁徙、细胞凋亡及EMT密切相关.
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AMP-18,一种新发现的胃黏膜保护因子
AMP-18是一种新发现的由胃腺体上皮细胞合成的小分子蛋白质,独特表达于胃黏膜,机体其他部位少见,胃癌组织中表达缺失.AMP-18由185个氨基酸组成,除去N端信号肽(20个氨基酸)后大小约18 ku,第54-150个氨基酸组成高度保守的结构域(BRICHOS区域)承担主要的生理功能.AMP-18由胃腺体上皮细胞以胞吐的方式分泌到胃黏液中,他的合成和分泌与个体生长发育有关,并受福斯高林、吲哚美辛、地塞米松等药物的影响.目前发现AMP-18的生理功能主要有促进胃黏膜上皮细胞的有丝分裂,促进细胞的迁徙,促胃肠黏膜损伤的修复,保持胃肠黏膜的完整等.
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ezrin和细胞骨架在子宫内膜异位症中的表达与定位
目的 通过检测子宫内膜异位症中的ezrin、微丝及微管的表达及定位,探讨子宫内膜异位症中ezrin与细胞骨架的改变及关系.方法 利用免疫荧光染色和激光共聚焦显微镜检测13例非子宫内膜异位症中正常子宫内膜、11例子宫内膜异位症中在位及异位内膜组织中ezrin、微丝及微管的表达及定位;用荧光强度代表表达强度,通过对荧光强度的半定量测定,比较各组间ezrin、微丝及微管的表达.其中,荧光强度分析采用SPSS11.5 for windows软件进行统计分析,配对的2组之间的均数分析采用t检验.结果 ezrin在异位子宫内膜间质内呈弥散分布,失去正常细胞极性,ezrin蛋白在异位子宫内膜间质中的表达(47.88±6.75)显著高于正常子宫内膜间质(8.64±1.61)及在位子宫内膜间质(7.97±0.93)的表达水平(P＜0.05);微丝在异位子宫内膜间质及腺上皮组织中表达极性均不明显,微丝在异位子宫内膜间质(71.36±4.27)中的表达显著高于在位子宫内膜间质(35.98±5.76)及正常子宫内膜间质(40.68±6.12)的表达水平(P＜0.05),而在腺上皮组织中的表达(上述3组中表达分别为21.74±2.28,37.99±6.60,41.54±2.14)则相反(P＜0.05);各组间微管表达差异无统计学意义(P＞0.05).结论 子宫内膜异位症的细胞迁徙、种植过程中伴随了细胞骨架的重构;ezrin与子宫内膜异位症的形成及细胞骨架重构有关;间质细胞在子宫内膜异位症中细胞迁徙与侵袭过程中扮演了主要角色.
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Rho相关的卷曲蛋白激酶在多重细胞行为中的作用
Rho相关的卷曲蛋白激酶(ROCK)是一种属于AGC家族的蛋白激酶,主要通过诱导应力纤维形成、重构细胞骨架等方式参与细胞收缩、迁徙、分裂、形态变化等生物学行为,对调节细胞的多种功能发挥重要的作用.
关键词： Rho相关的卷曲蛋白激酶 细胞骨架 细胞收缩 细胞迁徙 -
下调HER2降低自噬活性抑制人肺癌细胞增殖转移作用的体外研究
目的：探讨下调HER2表达是否抑制细胞自噬活性，从而影响人肺癌细胞的增殖、迁徙和侵袭。方法采用浓度5μmol/L自噬抑制剂3-MA、10μmol/L HER2抑制剂Neratinib分别作用人肺癌细胞A549。Western blot检测肺癌细胞A549中HER2、Beclin-1及LC3B（Ⅱ/Ⅰ）蛋白表达水平；Wound healing和Transwell invasion实验检测细胞迁徙、侵袭能力；四甲基偶氮唑盐（MTT）检测细胞的增殖能力。结果 Neratinib和自噬抑制剂（3-MA）作用24 h后，细胞HER2、Beclin-1及LC3B（Ⅱ/Ⅰ）蛋白表达水平显著低于阴性对照组；Neratinib、自噬抑制剂（3-MA）处理组的细胞增殖、迁徙和侵袭能力显著低于阴性对照细胞。结论下调HER2能降低人肺癌细胞A549的自噬活性并抑制其增殖、迁徙和侵袭。
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S100A2转染SGC-7901细胞后对其增殖、凋亡和迁徙能力的影响
目的 克隆胃粘膜上皮细胞GES-1细胞中S100钙结合蛋白A2 cDNA,构建pSMPUW-Neo-S100A2重组表达载体,转染胃癌细胞SGC-7901后,研究S100A2蛋白的表达变化,及其对胃癌细胞增殖、凋亡和迁徙能力的影响.方法 应用重组技术构建pSMPUW-Neo-S100A2融合蛋白表达载体,质粒经测序正确后,western-blot检测S100A2蛋白表达水平变化,MTT检测细胞增殖能力、流式细胞仪检测细胞凋亡、划痕实验检测细胞迁徙能力的改变.结果 构建的pSMPUW-Neo-S100A2表达质粒,转染SGC-7901细胞后,发现S100A2蛋白表达水平升高,胃癌细胞出现增殖能力下降、凋亡升高和迁徙能力下降的现象.在细胞增殖能力检测中,表达质粒转染细胞后第1天和第2天的细胞增长率分别为18％和32％,而对照组对应为27％和56％,差距有统计学意义(P＜0.05).结论 S100 A2转染胃癌SGC-7901细胞后使该细胞的增殖能力下降、细胞凋亡程度升高和迁徙能力下降,可以作为一个生物标记物对其进行筛选.
关键词： S100钙结合蛋白A2 胃粘膜上皮细胞GES-1 细胞增殖 细胞凋亡 细胞迁徙 -
uPA合成抑制剂阿米洛利对卵巢癌细胞迁徙、侵袭能力的影响
目的 探索urokinase-type plasminogen activator(uPA)合成抑制剂阿米洛利(氨氯吡咪,Amiloride)在卵巢癌细胞迁徙、侵袭过程中的作用.方法 检测阿米洛利处理后卵巢癌细胞OVCAR3的迁徙及侵袭能力变化,RT-RCR及Western Blotting检测uPA表达水平变化.结果 卵巢癌细胞OVCAR3经阿米洛利处理后uPA mRNA及蛋白表达水平及细胞迁徙、侵袭能力显著下降,且呈浓度依赖性.结论 uPA合成抑制剂阿米洛利可能通过下调uPA表达水平抑制卵巢癌细胞迁徙及侵袭,是一种潜在的抑制卵巢癌发展的药物.
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脐带间充质干细胞在颅脑损伤模型鼠体内的迁徙与定位
背景：选择有效的手段，标记和追踪细胞在体内的分布、分化及转归，才能深入探讨细胞发挥治疗效果的具体机制。目的：了解BrdU标记脐带间充质干细胞在颅脑损伤大鼠体内的迁徙和定位情况。方法：分离培养人脐带间充质干细胞并进行细胞表面标志物鉴定，取第3代人脐带间充质干细胞采用 BrdU进行标记，MTT法检测细胞增殖能力。将BrdU标记的人脐带间充质干细胞经尾静脉注射到颅脑损伤模型大鼠体内，移植后14 d取损伤处脑组织制备组织切片，倒置荧光显微镜下观察人脐带间充质干细胞的迁徙和定位情况。结果与结论：经流式细胞仪检测，细胞表达CD29、CD44、CD105，不表达造血细胞表面特异性标志CD34和CD45。通过生长曲线可以发现，细胞在接种1-3 d处于调整期，第3-5天进入对数生长期。移植后14 d在脑损伤部位可以观察到BrdU染色阳性细胞，表明移植的人脐带间充质干细胞在大鼠体内发生迁徙，经过大鼠的外周血液循环迁徙达到颅脑损伤部位，实现对损伤部位的有效修复。
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磁共振成像观察SPIO标记脂肪干细胞在脑梗死大鼠脑内的迁徙和分布
背景：采用无创伤性影像技术跟踪移植后干细胞的存活状态及与宿主组织整合情况，是近几年国内外学者关注的问题。目的：观察超顺磁性氧化铁标记脂肪干细胞移植后在脑梗死大鼠脑内的分布和迁徙情况。方法：建立大鼠脑梗死模型，随机分为超顺磁性氧化铁记组和未标记组，造模后1 d，脑内分别注射超顺磁性氧化铁标记的脂肪干细胞悬液10μL和未经超顺磁性氧化铁标记的脂肪干细胞悬液10μL。在移植后1，7，14 d进行NSS评分，并用磁共振成像方法观察超顺磁性氧化铁标记的脂肪干细胞的分布情况。结果与结论：移植后7，14 d两组大鼠NSS评分显著低于移植后1 d，差异有显著性意义(P <0.05)。各时间点两组之间进行比较，差异无显著性意义(P >0.05)。移植后14 d，磁共振检测发现移植区域存在低信号区，细胞在大鼠脑内发生迁徙，从胼胝体迁徙至病变区。实验结果提示脂肪干细胞脑内移植可以有效促进脑梗死大鼠神经功能恢复，磁共振成像可以评估超顺磁性氧化铁标记脂肪干细胞移植后在脑内的分布以及迁徙情况。
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子宫内膜异位症在位和异位内膜水通道蛋白的表达
目的:研究水通道蛋白2 (AQP2)和水通道蛋白8(AQP8)在子宫内膜异位症(EMs)患者在位和异位内膜中的表达,阐明AQP2和AQP8与EMs发生和发展的关系.方法:选取本院住院患者53例,其中38例为EMs患者,每例均取其在位内膜和异位内膜,分别为EMs在位内膜组(Eu-Em组)和EMs异位内膜组(Ec-Em组)；另外15例对照组患者正常子宫内膜为对照组(Co-Em组).通过Real time RT-PCR和Western blotting分别检测Co-Em组、Eu-Em组和Ec-Em组子宫内膜中AQP2和AQP8的mRNA水平和蛋白表达水平.结果:与Co-Em组比较,Eu-Em组AQP2和AQP8 mRNA水平差异无统计学意义(P＞0.05)；Ec-Em组的AQP2 mRNA水平显著高于其他2组(P＜0.05),Ec-Em组的AQP8 mRNA水平显著低于其他2组(P＜0.05).与Co- Em组比较,Eu-Em组AQP2和AQP8蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),而Ec-Em组AQP2和AQP8蛋白表达水平与其他2组比较均明显下降(P＜0.05).结论:水通道蛋白(AQP2和AQP8)在EMs患者在位和异位内膜中表达不同,AQPs可能是EMs病理发生和发展的一个重要环节.
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沉默MAD2基因对结肠癌细胞的影响
目的:研究沉默MAD2基因对结肠癌细胞的影响.方法:采用RT-PCR和Western印迹法筛选MAD2基因在7种结肠癌细胞中的高表达细胞株,并用siRNA瞬时转染以降低MAD2表达,随后采用CCK-8法检测结肠癌细胞增殖能力.流式细胞仪检测细胞凋亡和周期,transwell实验评估转染后结肠癌细胞迁移能力的改变.结果:SW1116细胞在mRNA和蛋白水平均呈现高表达MAD2,转染靶向MAD2的siRNA可显著降低MAD2在SW1116细胞中的表达.下调MAD2后,SW1116细胞的增殖能力较对照组有明显下降(P＜0.05).干扰siRNA组细胞凋亡比例较对照组增加,而细胞周期未见统计学差异.transwell实验中,siRNA干扰组穿膜细胞数为(45±2)个,显著低于阴性对照组[(1 85±5)个]和空白对照组[(195±5)个](P＜0.01).结论:SW1116高表达MAD2基因,沉默MAD2基因显著降低肠癌细胞增殖,诱导凋亡,并抑制细胞迁移.MAD2基因很可能成为新的预防结肠癌转移的目的基因.
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核糖核苷酸还原酶M2在结肠直肠癌组织的表达及对癌细胞增殖和迁徙的影响
目的:研究核糖核苷酸还原酶M2( RRM2)在结肠直肠癌组织的表达及对癌细胞增殖和迁徙的作用.方法:应用组织芯片免疫组化技术测组织中RRM2的表达.用siRNA转染RRM2高表达的细胞株HCT116以验证干扰效果,CCK-8法检测细胞增殖能力,Transwell实验评估转染后癌细胞迁移能力.结果:结肠直肠癌组织中RRM2的表达明显高于癌旁正常组织(P＜0.05),且与浸润深度、分化程度、TNM分期均有相关性;在结直肠细胞株中,HCT116细胞RRM2在mRNA和蛋白水平表达量高,用干扰效率高的siRNA下调RRM2表达可以明显抑制HCT116细胞的增殖能力.在Transwell迁徙实验中,RRM2干扰组穿膜细胞数为(11±2)个,显著低于阴性对照组[(29±4)个]和空白对照组[(23±3)个](p＜0.01).结论:数据显示RRM2在结肠直肠癌组织中呈过表达,且在结肠直肠癌进展和预后发挥重要作用,其有望成为评估结肠直肠癌进展及预后的潜在指标.
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上调miR-101对结肠癌细胞株的增殖、侵袭、迁移及化疗敏感性的作用
目的 研究miR-101在结肠癌组织和癌旁正常组织中的表达水平及其对HT-29和RKO结肠癌细胞株增殖、侵袭和迁移的作用.方法 采用聚合酶链式反应(PCR)检测42对结肠癌组织与癌旁正常组织中miR-101的表达情况;利用重组miR-101腺病毒上调结肠癌细胞株HT-29和RKO中miR-101的表达,克隆形成试验检测其对细胞增殖的影响,迁徙试验检测其对细胞迁移能力的影响,侵袭实验检测其对细胞侵袭能力的影响,并用噻唑蓝(MTT)检测相对增值率以及对5-氟尿嘧啶(5-FU)和顺铂(DDP)的化疗效果影响.结果 miR-101在结肠癌组织中表达降低,上调miR-101的表达能够抑制结肠癌细胞株HT-29和RKO的增殖,降低其迁徙和侵袭能力,上调miR-101的表达能够增强5-FU和DDP对结肠癌细胞株HT-29的杀伤作用.结论 miR-101在结肠癌组织中表达降低,上调miR-101的表达对结肠癌细胞具有抑制增殖和降低侵袭能力的作用,miR-101可能对结肠癌化疗效果有协同作用.
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沉默FoxM1对甲状腺乳头状癌细胞增殖、迁徙及侵袭的影响
目的 探讨沉默叉头框转录因子M1(FoxM1)对人甲状腺乳头状癌细胞株K1增殖、迁徙及侵袭的影响.方法 用脂质体LipofectamineTM 2000分别将FoxM1-siRNA及control siRNA转入人甲状腺癌K1细胞株中,作为转染组及无意义序列组,另取一株K1细胞添加PBS溶液作为空白对照组;免疫印迹试验检测FoxM1蛋白表达;MTT法检测各组细胞增殖能力;单层细胞划痕实验检测各组细胞迁徙能力;Transwell实验检测各组细胞侵袭能力.结果 空白对照组、无意义序列组、转染组FoxM1蛋白相对表达量分别为0.96 ±0.01、0.95 ±0.01、0.27±0.03,转染组与空白对照组、无意义序列组比较,P均＜0.05;空白对照组与无意义序列组比较,P＞0.05.转染组细胞生长受到抑制,与无意义序列组、空白对照组比较,P均＜0.05;无意义序列组与空白对照组比较,P＞0.05.24 h后,空白对照组、无意义序列组、转染组划痕面积相对比值分别为0.83±0.01、0.82 ±0.01、0.93±0.01,转染组与空白对照组、无意义序列组比较,P均＜0.05,空白对照组与无意义序列组比较,P＞0.05.空白对照组、无意义序列组、转染组穿过上小室背面的细胞数分别为(92.40 ±3.05)、(85.40 ±5.13)、(37.20±3.96)个/视野,转染组与空白对照组、无意义序列组比较,P均＜0.05,空白对照组与无意义序列组比较,P＞0.05.结论 沉默FoxM1可抑制人甲状腺乳头状癌K1细胞增殖,降低细胞迁徙及侵袭能力.
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尿嘧啶脱氧核苷及超顺磁性氧化铁双标记的神经干细胞活体移植后细胞迁徙及功能性分化的实验研究
目的 观察尿嘧啶脱氧核苷(Brdu)及超顺磁性氧化铁(SPIO)双标记的神经干细胞活体移植后存活细胞的迁徙及分化.方法 SPIO和Brdu对神经干细胞进行双标记,移植至大脑中动脉梗死模型的对侧脑组织,术后采用MRI监测.第6周MRI检查后取组织切片行免疫组织化学染色,观察神经干细胞的迁徙及分化.结果 双标神经干细胞活体移植后第3周MRI开始显示细胞沿胼胝体迁徙,第6周脑组织免疫组织化学染色亦显示干细胞沿胼胝体向对侧迁徙,免疫组织化学荧光双标染色显示移植的神经干细胞可以分化为星形胶质细胞及神经元.结论 移植存活的神经干细胞在迁徙过程中能够进行功能性分化.
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清道夫受体CD36在CML抑制泡沫细胞迁徙中的作用
目的 探讨清道夫受体CD36在羧甲基赖氨酸(CML)抑制泡沫细胞迁徙中的作用.方法 (1)首先观察CML对RAW264.7巨噬细胞脂质蓄积和细胞迁移的影响,继之观察泡沫细胞中CML与CD36的相互作用,实验分为:对照组、氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)组(40 mg/L ox-LDL)、CML组(40 mg/L ox-LDL+10 μmol/L CML);(2)观察CD36在CML抑制泡沫细胞迁移中的作用.实验分两部分:首先观察CD36抑制剂SSO对RAW264.7泡沫细胞迁移的影响,分对照组(40 mg/L ox-LDL+ 10 μmol/L CML)和SSO组(40 mg/L ox-LDL+ 10μmol/L CML+25μmol/L SSO);其次观察不同受体阻断对CML抑制泡沫细胞迁移的影响,分对照组(40 mg/L ox-LDL+10 μmol/L CML),anti-CD36组(40 mg/L ox-LDL+10 μmol/L CML+2μmol/L anti-CD36),anti-RAGE组(40 mg/Lox-LDL+ 10 μmol/L CML+2μmol/L anti-RAGE),malBSA组(40 mg/L ox-LDL+ 10 μmol/L CML+ 400 nmol/LmalBSA).连续24 h 1％BSA的培养基培养干预后进行相关检测(油红0染色、Transwell细胞迁移实验、免疫共沉淀实验、CD36免疫荧光染色等).结果 胆固醇氧化酶法定量及油红0染色定性显示CML可以有效促进RAW264.7巨噬细胞脂滴的蓄积并形成动脉粥样硬化斑块的关键组分泡沫细胞.Transwell细胞迁移实验和定量分析结果显示:与对照组相比,ox-LDL组中迁移泡沫细胞数减少43.5％(P＜0.05);与ox-LDL组相比,CML使泡沫细胞迁移数目减少49.2％ (0.287±0.031比0.565±0.061,P＜0.05),表明CML抑制RAW264.7源性泡沫细胞迁移.免疫共沉淀实验及免疫荧光染色结果显示泡沫细胞中CML-CD36存在显著的相互作用.进一步的,用SSO或中和性抗体anti-CD36阻断CD36和清道夫受体抑制剂malBSA阻断所有清道夫受体情况下,迁移的细胞数均较对照组显著增加(P＜0.05).统计学分析显示,anti-CD36组细胞迁移指数为malBSA组的81.3％(2.35±0.39比2.89±0.41,P＜0.05).结论 清道夫受体CD36是CML抑制RAW264.7泡沫细胞迁移的关键受体.
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D-丙2,D-亮5脑啡肽对人肝癌细胞生长、迁移能力的影响及机制研究
目的:探讨δ阿片受体激动剂D-丙2,D-亮5脑啡肽(DADLE)对人肝癌细胞生长及迁移能力的影响及机制.方法:分别以不同浓度的DADLE(0.01、0.1、1.0和10 μmol/L)处理对数生长期的HepG2细胞,MTT法检测细胞增殖活力的变化,划痕实验观察细胞迁徙能力的变化,RT-PCR和Western blot法检测PKC(蛋白激酶C)、IQGAP1(含IQ结构的GTP酶活化蛋白1)的mRNA和蛋白表达变化.结果:与对照组相比,加入不同浓度的DADLE后,MTT法显示肝癌细胞的增殖能力明显增加,并且具有浓度依赖性.划痕实验显示加入DADLE可明显增强肝癌细胞的迁徙能力;RT-PCR和Western blot显示加入DADLE可显著增加肝癌细胞内PKC和IQGAP1的mRNA和蛋白表达水平.结论:DADLE激活δ阿片受体对人肝癌细胞的生长及迁徙具有促进作用,其机制可能与增加PKC和IQGAP1表达实现的.
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重组人表皮生长因子与碱性成纤维细胞生长因子对人角膜上皮细胞迁徙的影响
目的:比较bFGF与rhEGF对人角膜上皮细胞迁移的影响.方法:培养人角膜上皮细胞,取同一代细胞进行实验,随机分为3组,bFGF组、rhEGF组和对照组,采用20 *9滋L枪头划痕进行细胞迁徙实验,分别在0、4、9 h拍照观察,应用Image J软件进行处理分析结果.结果:4 h和9 h时,rhEGF组与bFGF组较对照组促进角膜上皮细胞未愈合面积百分比小(P ＜ 0.01); 4 h时,rhEGF组 (18.78 ± 0.116)% 较bFGF组(26.19 ± 0.232)% 未愈合面积百分比小(P ＜ 0.01); 9 h时,rhEGF组(8.49 ± 0.340)% 较bFGF组(19.24± 0.135)%未愈合面积百分比小(P ＜ 0.01).结论:bFGF与rhEGF都能促进人角膜上皮细胞增殖和细胞迁徙,但rhEGF促进人角膜上皮细胞迁徙能力较bFGF强,更有利于眼表创伤愈合.
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重组人5型腺病毒在体外对A549细胞的影响
目的 探讨重组人5型腺病毒对A549细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响.方法 采用MTT法、细胞迁徙试验、流式细胞术、TUNEL法等方法检测重组人5型腺病毒对A549细胞生物学特性的影响.结果 重组人5型腺病毒在体外对A549细胞有显著的生长抑制作用,且具有时间和浓度依赖性;一定质量浓度的重组人5型腺病能显著降低A549细胞迁徙活性,诱导细胞凋亡,阻滞A549细胞于G0/S期.结论 重组人5型腺病在肿瘤的临床治疗中有着重要的作用和广阔的前景.
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Endostar对肿瘤血管内皮细胞生长及功能的抑制作用
目的 探讨Endostar对肿瘤血管内皮细胞生长和功能的抑制作用及其相关的抗血管形成机制.方法 采用A549细胞上清诱导人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)成为肿瘤血管内皮细胞(tumor-derived endothelial cells,Td-EC),通过MTT法、细胞迁徙试验、流式细胞术、TUNEL法等检测Endostar对Td-EC细胞生物学特性的影响.结果 Endostar在体外对于Td-EC有显著的生长抑制作用,并具有时间和浓度依赖性,但对于HUVEC的生长抑制作用并不显著;一定浓度的Endostar能显著降低Td-EC细胞迁徙活性,促使细胞凋亡数目增加、细胞形态学发生改变,并能显著增加Td-EC S期细胞比例(P<0.01),而同样条件下,Endostar影响细胞迁徙活性及促进细胞凋亡的作用对于HUVEC并不显著(P>0.05).结论 Endostar可以特异性地抑制肿瘤血管内皮细胞的生长及功能.
