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辐射致大鼠平滑肌细胞HPRT基因第7/8外显子突变分析
目的探讨辐射剂量与平滑肌细胞HPRT基因变异的关系,提供放射预防血管再狭窄的基础实验依据.方法不同剂量的放射性核素188Re内辐射平滑肌细胞后,应用6-TG筛选分离HPRT变异细胞,采用PCR-SSCP技术进行HPRT基因7/8外显子的变异分析.结果辐射后平滑肌细胞HPRT基因突变率为(5.5～13)×10-6;91株HPRT突变细胞克隆中,14.3%呈现7/8外显子缺失,16.5%呈现点突变,7/8外显子总变异率为30.8%;辐射剂量与HPRT基因突变率、第7/8外显子的总变异率及外显子缺失率呈正相关.结论辐射所致DNA分子的损伤,包括基因片段的缺失、断裂及点突变与辐射剂量呈正相关.
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丙烯酰胺诱导人白血病HL-60和NB4细胞hprt基因的分子突变谱
为了研究丙烯酰胺的遗传毒理作用，采用单细胞克隆培养，双向筛选计数，多重PCR扩增与电泳分析，研究了诱导HL-60和NB4两种细胞hprt基因突变率及分子突变谱. 发现只有丙烯酰胺高剂量组（700 mg*L-1）才对两种细胞有明确的致hprt基因突变作用；丙烯酰胺诱发突变主要由点突变和缺失两部分组成（40.0%～66.7%，33.3%～60.0%），而自发突变几乎全是点突变（90.0%以上），两种细胞均无全基因缺失型；缺失突变可以发生于hprt基因上的每个外显子（除外显子7/8以外），较集中于基因的3′末端，且诱发突变中绝大多数是点突变与单个外显子缺失（93.3%，86.1%），两种细胞情况类似. 结果提示，丙烯酰胺具有较弱的诱导hprt基因突变的作用，且诱发突变与自发突变的分子图谱不一样，这可能与其作用机理有关.
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汞作业所致工人的遗传效应
目的 探讨汞作业所致工人的遗传效应.方法 选择荧光灯生产厂汞作业工人20名为接触组,无汞接触的其他从业人员20名为对照组,取外周血淋巴细胞,通过微核试验、彗星试验、hprt和TCR基因突变试验进行检测.结果 接触组平均微核率(MNR)、平均微核细胞率(MCR)分别为(5.90±0.91)‰和(5.30±0.81)‰,对照组的MNR和MCR分别为(1.50±0.47)‰和(1.30±0.31)‰,两组差异有统计学意义(P＜0.01).接触组和对照组的平均尾长(MTL)分别为(3.16±0.31)和(0.99±0.07) μm,两组平均尾相(MTM)分别为1.63±0.22和0.39±0.03,差异有统计学意义(P＜0.01).接触组的hprt和TCR平均突变率与对照组比较,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 汞作业可致工人不良的遗传效应.
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基于Cre重组酶体系的小鼠HPRT定点整合打靶载体的构建及其应用
目的：构建带有Cre重组酶识别位点变异体lox66的针对小鼠HPRT基因的基因打靶载体，并用于小鼠胚胎干细胞基因打靶研究。方法：利用含HPRT基因组DNA片段的质粒pMP8和人工合成含lox66序列的寡核苷酸，构建含Cr e重组酶识别位点变异体lox66的置换型打靶载体，经过限制性内切酶酶切鉴定其结构正确后，用电穿孔法对小鼠胚胎干细胞R1株进行基因转染，经G418/6-TG（6-thioguanine）分组药物筛选，进行pSP-HPRT-lox66-Neo载体的应用研究。结果：得到了与设计一致的置换型打靶载体pSP-HPRT-lox66-Neo；将线性化的打靶载体导入ES细胞后，能与靶位点有效地发生同源重组，获得了20个靶基因被灭活了的ES细胞克隆。结论：此研究成功构建了含Cre重组酶识别位点变异体lox66针对小鼠HPRT 基因位点的置换型打靶载体，在胚胎干细胞基因打靶中得到有效的应用。
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烹调油烟冷凝物诱发支气管上皮细胞HPRT 基因位点突变的研究
目的 研究烹调油烟冷凝物致人支气管上皮细胞HPRT 基因位点突变的影响及二甲基亚砜的拮抗作用,以探讨烹调油烟的致突变性及其防护.方法 采用体外多核细胞法研究烹调油烟冷凝物对人支气管上皮细胞HPRT 基因位点的影响及二甲基亚砜的防护作用.结果 烹调油烟冷凝物诱发人支气管上皮细胞HPRT 基因位点突变, 且突变频率随着染毒浓度的增加而升高, 突变频率与烹调油烟冷凝物浓度之间存在一定的剂量- 效应关系,二甲基亚砜对HPRT 基因位点突变有显著的拮抗作用.结论 烹调油烟冷凝物能诱发人支气管上皮细胞HPRT 基因位点突变,二甲基亚砜能抑制烹调油烟冷凝物的诱变作用.HPRT 基因突变频率可望成为接触环境致突变物人群检测的敏感指标.
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小鼠淋巴细胞hprt基因突变检测的研究进展
肿瘤的发生、发展与突变事件密切相关.人类在环境中接触的突变剂的检出依赖于致突变试验.以次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖基转移酶 (hypoxanthine-guanine phosphoribosyl transferase, hprt)基因为报告基因的 hprt突变试验是几个重要的致突变试验之一,其优点在于不仅能检测出突变剂的致突变能力大小,还可以对突变体进行突变谱分析,并且能为多种与 hprt基因突变相关的人类疾病提供研究资料.以小鼠啮齿动物为试验模型的淋巴细胞 hprt基因突变试验近年来得到广泛应用,本文对其研究进展作一综述.
