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Sirt3介导的SOD2在电离辐射中的作用研究
目的 观察293T细胞经不同剂量137Cs γ射线照射后,细胞中沉默信息调节因子3(sirt3)及相关抗氧化因子的变化,研究sirt3基因在辐射防护中的抗氧化活性机理.方法 采用137Cs对293T细胞分别进行2、4、8和16 Gy照射,采用Real-Time PCR的方法,检测照后6、12、24和48 h,细胞中sirt3和超氧化物歧化酶2(SOD2) mRNA的表达水平变化;采用免疫印迹法,检测细胞中sirt3和SOD2蛋白水平随时间的变化;采用siRNA干扰和抑制剂处理的方法,检测sirt3与SOD2的作用关系;采用SOD Assay Kit-WST试剂盒检测细胞中SOD2酶活力的变化;流式细胞术检测细胞中活性氧(ROS)随时间的变化.结果 各组细胞中sirt3和SOD2的mRNA水平和蛋白质水平均表现出不同程度的上升,与0 Gy组比较,分别在12 h(t =6.75、13.59、6.59、10.13,P＜0.05)和24 h(t=6.80、8.73、11.09,P＜0.05)达到大值;sirt3 siRNA干扰和抑制剂处理结果显示sirt3是SOD2的上游调控因子;照射24 h后细胞中SOD2的活性显著增加,与0 Gy组比较,差异有统计学意义(t =46.04、23.19、26.28、14.70,P＜0.05),细胞中ROS水平也发生相应变化.结论 sirt3可能通过对细胞中SOD2的表达量及活性的调控加强抗氧化保护系统,为临床辐射防护和治疗提供实验依据.
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白藜芦醇激活超氧化物歧化酶2减轻失血性休克大鼠的肠屏障损伤
目的 探讨白藜芦醇改善失血性休克肠损伤的作用机制.方法 SPF级雄性SD大鼠64只,按随机数字表法分为假手术组(Sham组,麻醉后仅行动静脉置管术)、失血性休克模型组(模型组,大鼠麻醉后行动静脉置管术,休克后给予0.3 mL溶剂)、白藜芦醇组(大鼠麻醉后行动静脉置管术,休克后给予白藜芦醇15 mg/kg)、超氧化物歧化酶2(SOD2)特异性抑制剂(2-ME)组(在白藜芦醇组基础上加用2-ME,浓度为0.1 mmol/L).采用股动脉放血的方法复制大鼠失血性休克模型.大鼠给药后分成两批,一批用以观察各组24 h存活率和存活时间;另一批在休克2h后取血测定血清D-乳酸含量,取小肠组织观察病理学改变和Chiu评分,并比较小肠组织紧密连接蛋白Occludin、Claudin、ZO-1的蛋白表达水平和氧化应激相关指标SOD2活性及还原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、丙二醛(MDA)含量的差异.结果 与Sham组比较,模型组大鼠存活率、SOD2活性、GSH、GSH/GSSG均降低,生存时间缩短,D-乳酸、Chiu评分和MDA含量均明显升高,小肠组织紧密连接蛋白表达减少.与模型组比较,白藜芦醇组大鼠存活率明显升高[75.0％ (6/8)比37.5％(3/8)],生存时间显著延长(h:21.0±4.3比10.4±5.8,P＜0.05),血D-乳酸含量、小肠组织病理评分明显降低[D-乳酸(μg/L):380.18±70.59比500.88±97.53,Chiu评分(分):1.75±0.71比4.00±0.53,均P＜0.05],紧密连接蛋白表达、SOD2活性、GSH和GSH/GSSG明显升高[Occludin蛋白(灰度值):0.89±0.10比0.43±0.07,Claudin蛋白(灰度值):0.78±0.06比0.33±0.05,ZO-1蛋白(灰度值):0.83±0.06比0.34±0.07,SOD2 (kU/L):0.85±0.12比0.51±0.11,GSH(μmol/L):7.25±1.01比3.86±0.54,GSH/GSSG:6.39±1.14比1.56±0.25,均P＜0.05],MDA显著降低(ng/g:5.00±1.31比8.63±0.92,P＜ 0.05).与白藜芦醇组比较,2-ME组大鼠存活率明显降低[50.0％ (4/8)比75.0％(6/8)],生存时间再度缩短(h:12.2±5.7比21.0±4.3,P＜ 0.05),D-乳酸含量增加(μg/L:463.88±60.16比380.18±70.59)和Chiu评分评分升高(分:3.13±0.99比1.75±0.71,P＜0.05),紧密蛋白表达降低[Occludin蛋白(灰度值):0.55±0.04比0.89±0.10,Claudin蛋白(灰度值):0.38±0.05比0.78±0.06,ZO-1蛋白(灰度值):0.41±0.04比0.83±0.06,均P＜0.05],SOD2活性、GSH、GSH/GSSG下降[SOD2活性(kU/L):0.58±0.13比0.85±0.12,GSH (pμmol/L):4.49±0.52比7.25±1.01,GSH/GSSG:1.57±0.39比6.39±1.14],MDA含量增加(ng/g:6.25±1.04比5.00±1.31,P＜ 0.05).Sham组小肠组织基本正常未见明显病理学改变;模型组小肠上皮绒毛倒塌,黏膜屏障破坏明显;白藜芦醇组小肠绒毛和小肠屏障的破坏明显减轻;2-ME组病理学改变较白藜芦醇组明显.结论 白藜芦醇能改善失血性休克大鼠的肠屏障损伤,其机制可能与激活SOD2有关.
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Lactobacillus casei Zhang对扑热息痛诱导的小鼠急性肝损伤的保护作用
目的:研究益生菌Lactobacillus casei Zhang(Lcz)对扑热息痛(APAP)所致小鼠急性肝损伤的保护作用及其机制.方法:C57BL/6小鼠被随机分为空白组(Ctrl)、APAP诱导急性肝损伤模型组(Acetaminophen,APAP)、阳性药物组(N-Acetylcysteine,NAC)、Lcz预防组(Lcz/APAP)和Lcz对照组(Lcz).Lcz(1×109 CFU/ml)连续灌胃30 d后,NAC组在APAP处理前1 h腹腔注射NAC(150 mg/kg).APAP、NAC以及Lcz/APAP组均腹腔注射APAP(300 mg/kg).APAP作用18 h后,采集血液和收集肝脏组织,检测血清中谷丙转氨酶(ALT)和谷草转氨酶(AST)的水平.通过Western blot检测肝脏组织中血红素氧化酶(HO-1)、超氧化物歧化酶2(SOD2)、Bcl-2以及TLR4的表达水平.结果:Lcz能抑制APAP诱导的急性肝损伤血清中ALT和AST水平.Lcz提高了HO-1、SOD2和Bcl-2的蛋白表达水平,而降低了APAP诱导的TLR4的表达.结论:益生菌Lcz对APAP诱导的小鼠急性肝损伤有保护作用,其保肝作用机制可能与其抗氧化和抗炎活性有关.
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白藜芦醇减轻神经元氧化应激损伤的作用机制研究
目的:观察白藜芦醇(RSV)对过氧化氢(H2O2)所致的海马神经元HT22细胞损伤的保护作用,并探讨超氧化物歧化酶2(Mn-SOD)在其中的作用.方法:采用体外培养HT22小鼠海马神经元细胞系,H2O2作为损伤因素模拟氧化应激损伤.将细胞分为5组,分别为正常培养组(Control)、150 μM H2O2损伤组(H2O2)、25μM白藜芦醇保护组(RSV+H2O2)、SOD2-siRNA干扰组(SOD2-siRNA+RSV+H2O2)和乱序RNA组(SC-siRNA+RSV+H2O2),药物暴露24 h后,应用MTT法检测HT22细胞活力、比色法检测乳酸脱氢酶(Lactate Dehydrogenase,LDH)释放量、相差显微镜观测细胞形态.结果:与对照组相比,H2O2组的活力显著下降(P＜0.05),LDH释放量明显增加(P＜0.05),细胞形态明显破坏;25 μM的RSV显著恢复了HT22细胞的活力、减少了LDH释放、改善了细胞形态,而SOD2-siRNA显著逆转了RSV引起的上述保护作用,乱序RNA(SC-siRNA)未对上述保护作用产生明显影响.结论:白藜芦醇可能通过上调SOD2减轻H2O2对HT22细胞的氧化应激损伤.
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超氧化物歧化酶2基因rs4880位点单核苷酸多态性与男性不育发病风险的相关性研究
目的:探讨超氧化物歧化酶2(SOD2)基因rs4880位点单核苷酸多态性与男性不育发病风险的相关性. 方法:采用病例-对照研究的方法,选取519例特发性男性不育患者作为病例组,年龄19 ～ 40(28.92±4.37)岁,并按精子浓度和前向运动(PR)精子百分率分为无精子症组(n=143)、严重少精子症组(n=175)、少精子症组(n=89)和弱精子症组(n=112)4个亚组;以338例正常生育的男性作为对照组,年龄19～40(28.40±4.25)岁,进行临床数据的采集.用Sequenom MassArray技术对SOD2 rs4880位点进行基因分型,用Logistic回归模型分析SOD2 rs4880位点不同基因型与男性不育之间的关系. 结果:病例组与正常对照组FSH、PR精子百分率、精子浓度存在显著差异(P＜0.01).与野生型纯合TT比较,杂合突变型TC(OR=0.90,95％ CI:0.65 ～ 1.25,P=0.516)与纯合突变型CC(OR=1.49,95％ CI:0.38 ～5.81,P=0.566)均显示与男性不育无相关性;亚组分析中均显示该基因位点与男性不育不存在相关性:无精子症组中,TC/TT(OR=0.99.95％ CI:0.62 ～ 1.58,P=0.967),CC/TT(OR=1.58,95％ CI:0.26 ～ 9.59,P=0.619;严重少精子症组中,TC/TT(OR=1.07.95％ CI:0.70 ～ 1.64,P=0.750),CC/TT(OR=1.31,95％ CI:0.22 ～ 7.96,P=0.767;少精子症组中,TC/TT(OR=0.83.95％ CI:0.47 ～ 1.48,P=0.535),CC/TT(OR=1.22,95％ CI:0.13～ 11.90,P=0.865);弱精子症组中,TC/TT(OR=0.59.95％ CI:0.33～1.05,P=0.074),CC/TT(OR=1.84,95％ CI:0.30 ～ 11.16,P=0.510). 结论:SOD2 rs4880位点基因多态性与男性不育不存在相关性,但是由于实验样本条件的限制,需要更大的样本量以及样本选取范围来进一步研究验证.
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超氧化物歧化酶2基因在胃癌组织中的表达及其对胃癌细胞生物学行为的影响
目的 观察超氧化物歧化酶2(SOD2)在胃癌组织的表达以及沉默SOD2基因对胃癌细胞增殖生长和活性氧产生的影响.方法 免疫组织化学染色法检测66例胃癌组织及配对癌旁组织中SOD2蛋白表达;Western blot检测6株胃癌细胞和正常胃黏膜上皮细胞中SOD2蛋白表达及转染小分子干扰RNA siSOD2后胃癌细胞株MKN1、NUGC4中的SOD2表达;用细胞计数试剂盒(CCK-8)实验和细胞活性氧(ROS)检测实验分别检测沉默SOD2基因的两株胃癌细胞株增殖以及ROS产生.结果 胃癌组织和配对癌旁组织中SOD2表达阳性率分别为72.7％ (48/66)和40.9％(27/66),两者差异有统计学意义(x2=13.617,P=0.000).6株胃癌细胞株的SOD2蛋白表达水平明显高于正常胃黏膜上皮细胞GES1,差异有统计学意义(tMKN1=23.062,PMKN1=0.002;tMKN45=5.648,PMKN45=0.030;tNUGc3=26.613,PNUGC3=0.001;tNUGC4=17.103,PNUGC4=0.003;tAGs=39.475,PAGS =0.001;tN87=37.677,PN87=0.001).MKN1、NUGC4胃癌细胞沉默SOD2基因72 h和96 h后,增殖能力明显低于阴性对照组(MKN1,t72h=6.329,P72h=0.001;t96h=10.487,P96h=0.000)、(NUGC4,t72h =5.551,P72 h=0.003;t96h=6.304,P96h=0.001).同时MKN1、NUGC4胃癌细胞沉默SOD2基因后的ROS水平均显著高于阴性对照组,分别为195.341±10.71、99.439±9.311(t=11.295,P=0.001)和181.561±14.502、97.876±12.867(t =23.476,P=0.000).结论 SOD2在胃癌中高表达,同时沉默SOD2基因表达可以抑制胃癌细胞增殖并且产生过量ROS.
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原发性开角型青光眼与SOD2基因多态性相关性分析
目的:本实验拟研究锰超氧化物歧化酶(SOD2)变异在原发性开角型青光眼(POAG)中的作用.方法:以750例散发青光眼患者和1500例正常对照者,对rs6917589、rs2842980、rs5746136、rs4880的SOD2单核苷酸多态性(SNP)位点用SNaPshot法进行基因分型.采用χ2检验对等位基因频率进行分析.结果:等位基因关联分析表明,rs6917589和rs5746136与POAG有相关性(P=0.023和P=0.026).rs2842980和rs4880与POAG无相关性(P=0.064和P=0.703).由这4个SNP组成的单倍体型ATGT有POAG的趋势(P=0.0032).结论:我们的结果显示SOD2与POAG的发生存在相关性,表明SOD2可能在POAG发展过程中发挥重要作用.
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基于MT3、SOD2mRNA表达调控的醒脑再造胶囊抗脑缺血再灌注损伤作用
目的 观察醒脑再造胶囊的抗脑缺血再灌注损伤作用并探讨其作用机制.方法 灌胃给药醒脑再造胶囊1周后,建立SD大鼠大脑中动脉缺血2h再灌注24 h模型,进行大鼠神经功能评分,2,3,5-三苯基氯化四氮唑(TTC)染色法观察脑组织梗死范围,实时荧光定量PCR检测脑组织缺血半暗带区域金属硫蛋白3(MT3)和超氧化物歧化酶2(SOD2) mRNA的表达.结果 醒脑再造胶囊预处理可明显降低大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能评分,缩小脑组织梗死范围,并使脑组织缺血半暗带区域MT3和SOD2 mRNA的表达显著增加.结论 醒脑再造胶囊抗大鼠脑缺血再灌注损伤作用与上调脑组织抗氧化损伤基因MT3和SOD2m RNA的表达有关.
