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大麻素受体2在油酰乙醇胺抗动脉粥样硬化中的作用
观察PPAR-α激动剂油酰乙醇胺(N-oleoylethanolamine,OEA)对人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)抗炎相关受体大麻素受体2(cannabinoid receptor 2,CB2)的作用.从新生儿脐带中提取HUVECs,给予不同剂量OEA,RT-PCR及Western blotting检测CB2基因和蛋白表达.采用PPAR-α阻断剂MK886或CB2阻断剂AM630分别阻断PPAR-α或CB2信号通路,给药组和阻断剂组给予OEA,用TNF-α诱导模型组、给药组和阻断剂组炎症产生,Western blotting法测定各组VCAM-1蛋白表达或进行THP-1黏附实验.结果表明,OEA(10和50 μmol·L-1)组的CB2表达上升,100 μmol·L-1 OEA组较空白组无明显变化；OEA抑制VCAM-1蛋白表达及THP-1细胞黏附；分别给予PPAR-α、CB2阻断剂MK886/AM630后,OEA对VCAM-1及单核细胞黏附的抑制作用明显降低.结果提示,OEA可能通过激活CB2通路起到抗动脉硬化的作用.
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神经酰胺对肝纤维化治疗作用的初步研究
目的:探讨神经酰胺代谢酶抑制剂油酰乙醇胺(NOE)和丙咪嗪(Imi)对人源肝星状细胞(HSCs)LX-2中神经酰胺含量的影响,并探讨神经酰胺在肝纤维化治疗中的作用.方法:实验分为给药组(NOE组终浓度为50、75、100 μmol/L; Imi组终浓度为10、20、30 μmol/L),乙醇对照组(乙醇终浓度为1％),DMSO组(DMSO终浓度为1‰).高效液相法测定HSCs内神经酰胺的含量,四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测HSCs的增殖情况,比色法检测乳酸脱氢酶(LDH)的活性,酶消化法测定羟脯氨酸(Hyp)的含量.结果:与乙醇组比较,NOE各浓度组可显著提高HSCs内神经酰胺的含量(P＜0.05);对HSCs的抑制作用呈剂量-效应关系;各浓度组LDH活性与乙醇组比较,无显著性差异(P＞0.05);且各浓度组均可显著降低HSCs上清液中Hyp的含量(P＜0.05).30μmol/L Imi作用24 h后,与DMSO组比较,可降低HSCs内神经酰胺的含量,促进HSCs的增殖,并可升高HSCs上清液中Hyp的含量,且差异均具有统计学意义(P＜0.05).结论:神经酰胺代谢酶抑制剂对HSCs内神经酰胺的含量有显著影响,且神经酰胺可通过抑制HSCs细胞的增殖、减少胶原蛋白的合成来发挥抗肝纤维化作用.
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油酰乙醇胺对血管紧张素Ⅱ诱导的血管平滑肌细胞增殖的影响
目的 研究油酰乙醇胺(OEA)对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)刺激大鼠主动脉血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的抑制作用以及对p38信号通路的影响.方法 分离大鼠胸主动脉,组织贴块法培养VSMCs,AngⅡ刺激VSMCs 建立细胞增殖模型,不同浓度OEA(5,10,20 μmol/L)作用后,用溴脱氧核苷尿嘧啶(BrdU)掺入的方法检测细胞增殖活性;流式细胞术检测细胞周期变化;Western-bolt法检测对P-p38和p38蛋白表达的影响.结果 与AngⅡ组比较,随着OEA浓度升高,VSMCs的增殖受到抑制、G0/G1比例显著升高,G2/M比例显著降低,且P-p38和p38蛋白的表达量降低并呈浓度依赖关系.结论 OEA对VSMCs的增殖有抑制作用,其机制可能是抑制了p38MAPK信号通路.
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油酰乙醇胺在小鼠急性局灶性脑缺血再灌注损伤中的作用及机制
目的 研究油酰乙醇胺(OEA)在脑缺血再灌注损伤中的作用及机制.方法 线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞模型,缺血90 min后再灌注.应用HPLC-MS/MS方法测定脑组织内OEA的含量.给予OEA(5,10,40 mg/kg,ig)或OEA水解酶抑制剂URB597(1 mg/kg,ig),观察其对小鼠急性脑缺血再灌注损伤的影响.测定脑组织丙二醛(MDA)含量,超氧化物歧化酶(SOD)及过氧化氢酶(CAT)的活性.观察MK886对OEA抗脂质过氧化损伤的影响.结果 脑缺血再灌注后6h,损伤侧脑内OEA含量开始升高,再灌注后24 h升高明显.脑缺血再灌注后给予OEA(40 mg/kg)或URB597(1 mg/kg)可减少神经功能缺失评分,减小脑梗死体积,减轻脑水肿程度.OEA可减少脑内MDA含量,增加抗氧化酶SOD的活性.OEA这一抗氧化作用可被MK886所取消.结论 脑缺血再灌注可增加脑内OEA的含量,OEA通过激动PPARα,减轻脂质过氧化损伤发挥抗脑缺血再灌注损伤作用.
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油酰乙醇胺对脂多糖诱导的THP-1细胞炎症因子表达的影响
目的 探讨油酰乙醇胺( OEA)对细菌脂多糖(LPS)诱导的人急性白血病单核细胞(THP-1)中前炎症因子TNF-α、IL-1β、IL-6表达的影响,并初步探讨OEA作为过氧化物酶体增殖物激活受体-α( PPAR-α)激动剂参与对炎症调节的作用机制.方法 体外培养的THP-1细胞,分别加入不同浓度的OEA(10,20,40 μmoL/L)或非诺贝特(100 μmol/L)共同孵育1h后,用1μg/mL LPS分别诱导6或24h.采用RT-PCR、实时定量PCR和酶联免疫吸附检测测定细胞中TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达的变化,并使用实时定量PCR及Western blot方法检测PPAR-α及Toll样受体4(TLR4)的mRNA和蛋白的表达.结果 相对于正常THP-1细胞,LPS诱导后细胞中炎症因子(TNF-α、IL-1β、IL-6)表达明显增加.OEA对TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达有抑制作用,并呈现出一定的剂量依赖性.且OEA在激活PPAR-α表达的同时能够抑制TLR4的表达.结论 OEA对LPS诱导的炎症反应有抑制作用,其机制可能与激活PPAR-α,下调TLR4的表达有关.
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油酰乙醇胺对高脂血症大鼠降血脂及肝脏的保护作用
目的 观察油酰乙醇胺(OEA)对高脂血症模型大鼠降血脂及肝脏保护作用.方法 高脂饮食建立高脂血症大鼠模型,分别观察OEA(10,20,30 mg/kg)对高脂血症大鼠的血清胆固醇(TC)、甘油三酯 (TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)、谷丙转氨酶(ALT)、肝重和肝脏系数、肝脏丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)的影响.制作冰冻切片观察大鼠肝脏脂质变性程度.结果 与模型组相比,OEA(20,30mg/kg)具有降血脂作用,同时降低血清ALT,肝脏脂质、肝重和肝脏系数、肝脏MDA水平,升高肝脏GSH-Px活力.结论 OEA能降低高脂血症大鼠血脂、抑制肝脏脂肪沉积,并减轻脂质过氧化物对肝脏的损伤.
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油酰乙醇胺对人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子-1表达的影响
目的 探讨油酰乙醇胺(OEA )对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导的人脐静脉内皮细胞血管细胞黏附分子-1(VCAM-1 )表达的影响.方法 体外培养人脐静脉内皮细胞,分别加入3种不同浓度的OEA(10,50,100 μmol/L)或非诺贝特(10,50,100 μmol/L)共同孵育10 h,再加入TNF-α共同孵育6 h,采用实时定量逆转录聚合酶链式反应和酶联免疫吸附剂检测测定VCAM-1以及mRNA和蛋白的表达,并采用Western blot方法检测过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)的蛋白表达.结果 与非诺贝特相比,不同浓度的OEA更加显著地抑制人脐静脉内皮细胞VCAM-1 mRNA和蛋白的表达,随着浓度的增大,抑制作用逐渐增强.Western bolt结果显示OAE能明显增强PPAR-α蛋白的表达.结论 OEA对TNF-α引起的内皮细胞受损起到保护作用,其机理可能与上调过PPAR-α有关.
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油酰乙醇胺对小鼠局灶性脑缺血的保护作用
目的 观察新型PPARα激动剂油酰乙醇胺(oleoylethanolamide,OEA)对小鼠局灶性脑缺血损伤的保护作用及特点.方法 线栓法制备小鼠大脑中动脉栓塞模型诱导脑缺血.OEA(10、20、40 mg·kg-1)在术前3 d开始每天灌胃给药1次;或在缺血前0.5 h、1 h、再灌注同时、再灌后1 h,各单次灌胃给予OEA 40 mg·kg-1.脑缺血1.5 h,再灌注24 h后,测定小鼠神经功能缺失评分、脑梗死体积、脑水肿等评定脑缺血损伤的指标.结果 OEA(20、40 mg·kg-1)术前多次给药及OEA(40 mg·kg-1)缺血前0.5 h或再灌注同时单次给药可明显改善小鼠神经功能损伤,减小脑梗死体积和减轻脑水肿程度,且以再灌注同时单次给药效果为明显.结论 OEA剂量及时间依赖性的保护小鼠局灶性脑缺血急性损伤,有效剂量为20 mg·kg-1和40 mg·kg-1,佳治疗时间点为再灌注同时.
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油酰乙醇胺通过过氧化物酶体增殖物激活受体α途径抑制单核-内皮细胞的黏附作用
目的 探讨过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPARα)激动剂油酰乙醇胺(OEA)对单核-内皮细胞黏附作用的影响.方法 采用Western blot检测OEA对脂多糖诱导THP-1细胞中基质金属蛋白酶2(MMP-2)和MMP-9蛋白表达及对肿瘤坏死因子α(TNF-α)诱导人脐静脉内皮细胞中血管细胞黏附分子1(VCAM-1)和细胞间黏附分子1(ICAM-1)蛋白表达的影响.采用TNF-α诱导的单核-内皮细胞黏附模型,用PPARα阻断剂MK886阻断PPARα信号通路后,检测THP-1细胞的黏附和VCAM-1蛋白的表达.结果 40 μmol/L OEA显著抑制MMP-2、MMP-9、VCAM-1和ICAM-1蛋白表达.OEA对TNF-α诱导的单核-内皮细胞黏附具有直接的抑制作用.MK886部分逆转了OEA对单核-内皮细胞黏附的抑制作用及对VCAM-1蛋白表达的抑制作用.结论 OEA能够抑制单核-内皮细胞的黏附,其机制可能与PPARα途径相关.
