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电喷雾离子阱质谱法研究蛋白与小分子配体间非共价结合的方法学探讨
以小檗碱与α1-酸性糖蛋白间的非共价结合作用为例,提出了一种新的质谱滴定法.其主要假定条件是:当蛋白与小分子配体间有一定亲合力、且作用配体的摩尔量大于作用蛋白的摩尔量时,蛋白复合物总浓度与作用蛋白总浓度近似相等.通过不同摩尔量比的小檗碱对α1-酸性糖蛋白的电喷雾离子阱质谱(ESI-IT/MS)滴定实验,分析小檗碱与α1-酸性糖蛋白复合物的结合特点,并应用荧光法进行验证.结果表明应用质谱滴定法与荧光法得到的小檗碱与α1-酸性糖蛋白复合物的结合特性常数(如稳定常数、结合位点数、作用力类型)基本相同.与传统质谱滴定法相比,本文提出的ESI-IT/MS滴定法用于蛋白与小分子配体间非共价结合特性研究,所用仪器相对便宜,方法简单且适应强,在一些研究体系中可得到更准确的实验结果.
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葛根素与血浆蛋白非共价结合的电喷雾离子阱质谱研究
目的 研究葛根素与人血清白蛋白和α1-酸性糖蛋白之间的非共价结合特性.方法 应用电喷雾离子阱质谱分别测定葛根素、人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白及其所形成复合物的相对分子质量,通过结合前后的相对分子质量变化计算复合物化学计量比;通过Scatchard方程拟合计算复合物结合常数(K);根据热力学常数△H、△S推测复合物间的作用力类型.结果 葛根素与人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白形成的复合物的结合常数分别为7.59 × 104和8.01×104 mol·L-1,大表观化学结合计量比分别为1∶5和1∶8.葛根素与人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白间的作用力主要为静电引力.结论 电喷雾离子阱质谱是一种研究药物与蛋白间非共价结合的灵敏快速和准确的方法.
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酮洛芬与血浆蛋白非共价结合的电喷雾质谱研究
目的应用电喷雾离子阱质谱(ESI-MS)研究酮洛芬与人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白的非共价结合.方法应用ESI-MS分别测定酮洛芬、人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白以及酮洛芬与该两种蛋白形成的复合物的相对分子质量,通过结合前后的相对分子质量变化计算复合物化学计量比.考察了反应体系pH值以及质谱仪毛细管温度、锥孔电压等对药物与蛋白非共价结合的影响.结果酮洛芬(ketoprofen,KP)与人血清白蛋白(human serum albumin,HSA)和α1-酸性糖蛋白(α1-acid glycoprotein,AAG)形成非共价结合复合物的表观化学计量比分别为5:1和4:1.结论 ESI-MS是研究药物与蛋白间非共价结合的一种新方法,具有灵敏、快速和准确的特点.
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HPLC-ELSD和HPLC-MSn分析硫酸西索米星及其注射液
目的 建立高效液相色谱-蒸发光散射检测器(HPLC-ELSD)法测定硫酸西索米星及注射液的含量和有关物质,并采用高效液相色谱-电喷雾离子阱质谱(HPLC-MSn)联用,鉴定硫酸西索米星及其有关物质.方法 采用Agilent SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm)色谱柱,流动相为0.05 mol·L-1三氟乙酸溶液-甲醇(90:10),流速为1.0 mL·min-1,漂移管温度为50℃,雾化气体压力为3.5×105 Pa,在正离子检测方式下,用电喷雾离子阱质谱法对西索米星和有关物质进行多级质谱分析.结果 西索米星和有关物质分离良好.西索米星在14～1 100 mg·L-1内呈较好的线性关系(r=0.999 5),重复性实验RSD=1.0%,回收率为99.8%,检测限为5.5 mg·L-1,结合多级质谱裂解初步推断西索米星中主要一个未知有关物质是西索米星分子中发生B环与C环之间的糖苷键断裂,生成的脱去C环(氨基葡萄糖)的降解产物.结论 本方法快速、简便,结果准确可靠,重现性好.
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电喷雾离子阱质谱法研究射干苷与血浆蛋白的非共价结合
目的 研究射干苷与血浆蛋白的非共价结合特性.方法 采用电喷雾离子阱质谱分别测定射干苷、人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白及其所形成复合物的相对分子质量.通过结合前后的相对分子质量的变化计算复合物大化学计量比;通过Scatchard方程拟合计算复合物结合常数K;根据反应温度和热力学常数△H、△S推测复合物间的作用力类型.结果 射干苷与人血清白蛋白、α1-酸性糖蛋白形成的非共价复合物K分别为1.914×104 mol/L和5.893×104 mol/L,结合倍数分别为7.8和3.3复合物间的作用力主要为静电引力.结论 电喷雾离子阱质谱法应用于射干苷与蛋白质结合的研究具有灵敏度高、特异性强、分析迅速等优点.
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运用量子化学方法解析大黄酚ESI-ITMSn中质谱行为
目的:研究大黄酚及其主要碎片离子在电喷雾—离子阱多级质谱(ESI-ITMSn)中的质谱行为.方法:获取大黄酚分子的一级质谱和多级质谱碰撞诱导解离下的碎片离子,运用量子化学方法计算质谱碎片离子的几何参数、键断裂能、电荷变化以及自旋密度,探讨碎片离子的断裂位点.结果:获得m/z:252.9、237.9、224.9、209.9、196.9、181.9、180.9、168.9、153.1离子的稳定构型,推断出大黄酚质谱裂解途径.结论:计算结果与CIDMS所推断的裂解规律相吻合,成功地解释了大黄酚分子在ESI-ITMSn中裂解现象.
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黄酮醇糖苷及其结构类似物的质谱裂解规律研究
目的:研究创新药物3',4'-二甲氧基黄酮醇-D-葡萄糖苷(GDH)及其结构类似物的质谱裂解规律.方法:在正、负离子检测模式下,对GDH及其结构类似物进行电喷雾离子阱质谱(ESI-MSn)分析,并用Mass Frontier 6.0软件辅助解析其中主要的特征碎片离子,以及可能的裂解途径.结果:在正离子模式下,从3-羟基-3',4'-二甲氧基黄酮醇(NDH21)获得m/z 299、284、266、239、238、165、137等特征离子;从GDH获得m/z 483、461、321、299等特征离子;从3-乙酰氧基-3',4'-二甲氧基黄酮(NDH01)获得m/z 363、321、306等特征离子;从3-丙酰氧基-3',4'-二甲氧基黄酮(NDH02)获得m/z 377、321、306等特征离子;从3,3',4'-三甲氧基黄酮(甲基化NDH21)获得m/z 335、320、305等特征离子.在负离子模式下,从NDH21、GDH、NDH01、NDH02和甲基化NDH21均获得m/z 297、282、267等特征离子.结论:在正离子模式下,除了NDH21显示较强的[M+H]+外,GDH及其他结构类似物均显示较强的[M+Na]+加合离子峰,主要产生丢失C环3-OH上取代基的碎片信息;除GDH外,其他黄酮醇糖苷类似物进一步产生丢失B环甲基的裂解途径.在负离子模式下,NDH21生成[M-H]-,GDH及其他结构类似物主要通过丢失C环3-OH上取代基发生裂解,并且同样出现丢失B环甲基的裂解途径.
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高喜树碱衍生物10-羟基-7-甲基-高喜树碱的电喷雾离子阱质谱分析
目的 应用电喷雾离子阱质谱对高喜树碱类衍生物10-羟基-7-甲基-高喜树碱(TOP-01)进行质谱裂解分析,通过主要特征碎片离子研究其裂解规律.方法 样品溶液通过仪器自带的蠕动泵进样系统直接进样分析,采用离子阱质谱的多级离子碰撞裂解方式,寻找TOP-01的特征碎片离子.结果 TOP-01在软电离模式下,主要产生的正离子碎片分别为m/z333、305、277、290等,负离子碎片分别为m/z 347、319、317、289、301等.结论 TOP-01在软电离模式下、正负离子模式下质谱裂解方式存在差异,其中主要产生的正负离子碎片分别为333和347,本研究为高喜树碱及其衍生物的结构修饰及代谢研究等提供了参考依据.
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淡豆豉异黄酮苷及其苷元的电喷雾离子阱质谱分析
目的 应用电喷雾离子阱质谱(ESI-MS)技术对3种淡豆豉异黄酮苷及其苷元进行质谱裂解分析,通过主要特征碎片离子研究其裂解规律.方法 在正负离子检测模式下,分别对3种淡豆豉异黄酮苷及其苷元采用离子阱质谱的多级离子(ESI-MSn)碰撞裂解方式,分析异黄酮苷和苷元的特征碎片离子.结果 正离子模式下从大豆苷和大豆素中获得了m/z417、255、227、199、137、119等特征质谱峰,从黄豆苷和黄豆素中获得了m/z 447、285、270、229等特征质谱峰,从染料木素苷和染料木素中获得了m/z 433、271、253、243、215、153等特征质谱峰.负离子模式下从大豆苷和大豆素中获得了m/z 461、415、253、225、209、197等特征质谱峰,从黄豆苷和黄豆素中获得了m/z 491、445、283、268等特征质谱峰,从染料木素苷和染料木素中获得了m/z 477、269、268、225等特征质谱峰.结论 在正离子模式下,大豆苷和大豆素主要通过丢失-Glu、-CO裂解和Retro Diels-Alder(RDA)裂解;黄豆苷和黄豆素主要通过丢失-Glu、-CO、-CH3而发生裂解;染料木素苷和染料木素主要通过丢失-Glu、-CO、-H20裂解和RDA裂解.在负离子模式下,异黄酮苷生成加HCOO-的加合离子峰,大豆苷和大豆素主要通过丢失-Glu、-CO、-2CO、-CO2裂解;黄豆苷和黄豆素主要通过丢失-Glu、-H、-CH3发生裂解;染料木素苷和染料木素主要通过丢失-Glu、-H、-CO2裂解.
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电喷雾离子阱质谱检测隐丹参酮的正离子裂解途径
目的 采用电喷雾离子阱(ESI-IT/MS)质谱技术对隐丹参酮的结构和裂解途径进行研究.方法 采用蠕动注射泵直接进样,ESI-IT/MS正离子模式检查,流速0.3 ml/h,毛细管电压为4 500V,雾化器压力,干燥器流速和干燥器温度分别为10 psi,5 L/min和350℃,质量扫描范围m/z 100～500,采集ESI-MS1 ～3质谱图.结果 采用ESI-MS获得了m/z 297[M+H]+,m/z 319[M+Na]+和m/z 335 [M+K]+准分子离子峰,采用ESI-MS2获得了m/z 279、268、251、237、227和209碎片离子,而采用ESI-MS3主要获得了m/z 264、253、223、209、181和167等特征碎片离子,归属主要特征碎片离子,分析和讨论了该化合物的结构和质谱特征.结论 ESI-IT/MS正离子模式下适用于检测隐丹参酮各级碎片裂解,归属了主要的碎片裂解途径,其方法快速,简便,为进一步研究隐丹参酮的体内代谢过程与结构修饰提供实验依据.
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羟基喜树碱的负离子ESI-IT-MS裂解途径的研究
目的 采用电喷雾离子阱质谱(ESI-IT-MS)技术,对羟基喜树碱的裂解途径和裂解碎片进行研究.方法 采用ESI-IT-MS一级质谱获得了[M-H]-m/z 363,二级质谱获得了m/z 319碎片离子,三级质谱主要获得了m/z 304、291、275、262、246和234等碎片离子.结果 羟基喜树碱主要裂解途径是在吡喃环上的酯键,其中二级碎片离子m/z 319是分子离子峰失去一分子CO2形成,且离子强度较大,三级碎片离子主要是失去烷基片段的而形成的裂解.结论 在负离子裂解条件下,可以选择m/z 363→319为定量离子测定羟基喜树碱,为进一步定性研究羟基喜树碱奠定了理论基础.
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亮菌甲素琥珀酸单酯的正离子电喷雾离子阱质谱裂解途径的研究
目的 采用电喷雾离子阱质谱(ESI-MS)技术对亮菌甲素琥珀酸单酯(ArAAE)的结构和裂解途径进行研究,归属其主要特征碎片离子,分析和讨论该化合物的结构和质谱特征.方法 ArAAE采用注射泵直接进样,ESIMS检测,流速为300 μL h-1,分别获得ESI-MS1-3各个主要碎片离子.结果 ESI-MS获得了m/z 335[ M1+ H]+,采用ESI-MS2获得了m/z 217碎片离子,而采用ESI-MS3主要获得了m/z 189、175和161等碎片离子.ESI-MS和ESIMS2主要有1种裂解途径,而ESI-MS3主要有3种裂解途径,主要是酯键的裂解,并对m/z 189、175和161特征碎片离子进行ESI-MS4质谱研究,推断出ArAAE有3种主要的裂解途径.结论 采用ESI-MS技术对进一步研究ArAAE的体内代谢过程与结构修饰提供了实验依据.
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电喷雾离子阱质谱检测升麻素苷的正离子裂解途径
目的:采用电喷雾离子阱(ESI-MS)质谱技术对升麻素苷的结构和裂解途径进行研究.方法:采用蠕动注射泵直接进样,ESI-MS正离子模式检查,流速0.3 mL/h,毛细管电压为4500 V,雾化器压力,干燥器流速和干燥器温度分别为10 psi,5 L/min和350℃,质量扫描范围m/z100～800.结果:采用ESI-MS获得了m/z 469[M+H]+,采用ESI-MS2获得了m/z397和307碎片离子,而采用ESI-MS3主要获得了m/z365,289,259,235,211,219,205和177等碎片离子.ESI-MS产生分子离子峰稳定,主要碎片离子m/z307为二氢呋喃色原酮碎片离子,归属了其主要特征碎片离子,分析和讨论了该化合物的结构和质谱特征.结论:ESI-MS正离子模式下适用于检测升麻素苷各级碎片裂解,归属了主要的碎片裂解途径,其方法快速,简便,可为进一步研究升麻素苷的体内代谢过程与结构修饰提供实验依据.
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育亨宾碱的正离子电喷雾离子阱质谱研究
目的:采用电喷雾离子阱(ESI-MS)质谱技术对育亨宾碱的结构和裂解途径进行研究.方法:采用ESI-MS获得了m/z 355[M+H]+,采用ESI-MS2获得了m/z 212和m/z 144等碎片离子.结果:ESI-MS2主要有两种裂解途径,主要在吡啶环裂解,并对m/z 212和m/z 144特征碎片离子进行ESI-MS3质谱研究,归属了其主要特征碎片离子,分析和讨论了该化合物的结构和质谱特征.结论:为进一步研究育亨宾碱化合物的体内代谢过程与结构修饰提供实验依据.
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电喷雾离子阱质谱检测亮菌甲素琥珀酸单酯的负离子裂解途径
目的 采用电喷雾离子阱(ESI-MS)质谱技术研究亮菌甲素琥珀酸单酯(ArAAE)的结构和裂解途径.方法 采用蠕动注射泵直接进样,ESI-MS负离子模式检查,流速为0.3 mL/h,毛细管电压为4 500 V,雾化器压力、干燥器流速和干燥器温度分别为10 psi、5 L/min和350℃,质量扫描范围m/z 100 ～ 500.结果 采用ESI-MS获得了m/z 333[M-H]-,采用ESI-MS2获得了m/z233碎片离子,而采用ESI-MS3主要获得了m/z215,203,189,177,171,163,147和135等碎片离子.ESI-MS和ESI-MS2主要有一种裂解途径,而ESI-MS3主要有3种裂解途径,主要是酯键的裂解,并对m/z 203,189和163特征碎片离子进行ESI-MS4质谱研究,归属了其主要特征碎片离子,分析和讨论了该化合物的结构和质谱特征.结论 ESI-MS负离子模式下适用于检测亮菌甲素琥珀酸单酯各级碎片裂解,归属了主要的碎片裂解途径,其方法快速、简便,为进一步研究ArAAE的体内代谢过程与结构修饰提供试验依据.
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吴茱萸碱和吴茱萸次碱电喷雾一离子阱质谱裂解途径研究
目的:对吴茱萸碱和吴茱萸次碱的电喷雾质谱裂解机制进行研究.方法:在电喷雾离子源,正、负离子模式下,分析吴茱萸碱和吴茱萸次碱的一级和多级质谱图.结果:解析了吴茱萸碱和吴茱萸次碱多级质谱碎片,在正负离子模式下,主要发生Rretro - Diels - Aider(RDA)裂解.结论:吴茱萸碱和吴茱萸次碱的ESI - MS质谱裂解途径可为吲哚类生物碱的成分研究提供数据参考.
