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矛头蝮蛇血凝酶工作标准品的协作标定
目的:标定我公司生产矛头蝮蛇血凝酶工作标准品。方法:以蛇毒血凝酶质量标准WS-349( X-317)-2001中效价测定为基础,改进测定方法,组织多名实验人员协作标定,并对数据进行统计分析。结果:本批矛头蝮蛇血凝酶工作标准品酶活性单位为103 U/支,加权均值标准差为0.8068,95%加权均值可信限的范围为101.0~105.1 U/支。结论:我公司生产的矛头蝮蛇血凝酶工作标准品标化科学、赋值准确,可以用于本公司产品的效价检测。
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乳酸环丙沙星注射液细菌内毒素检查研究
1.材料和仪器鲎试剂(TAL):批号000225,标示灵敏度(λ)0.06Eu/ml;批号000214,λ为0.125Eu/ml;批号000509,λ为0.25Eu/ml;批号000616,λ为0.5Eu/ml;上述试剂均为0.1ml/支.细菌内毒素工作标准品9903 10Eu/支,中国药品生物制品检定所.细菌内毒素检查用水(BET水):5ml/支.乳酸环丙沙星注射液:批号20000301(A);批号20000310(B);批号20000510(C);上述样品规格均为100ml:200mg.
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鲎试剂方法检测氟康唑氯化钠注射液中的细菌内毒素
氟康唑氯化钠注射液为抗真菌药物,文献[1]规定采用家兔法进行热原检查,而细菌内毒素检查法具有简便、快速、灵敏、重现性高等优点,通过实验,对其细菌内毒素检查法进行了可行性研究.1 材料与仪器细菌内毒素工作标准品(中国药品生物制品检定所,规格150 EU/支,批号2004-9),鲎试剂(TAL)(湛江安度斯生物有限公司,规格0.1 ml/支,灵敏度λ=0.25 EU/ml,批号0512300;福州新北生化工业有限公司,规格0.1 ml/支,λ=0.25EU/ml,批号05020912),细菌内毒素检查用水(BET水)(湛江安度斯生物有限公司,规格5 ml/支,批号0501270),氟康唑氯化钠注射液(扬子江药业集团有限公司,规格100 ml:氟康唑0.2 g与氯化钠0.9 g,批号04082801,05043001,05121601),旋涡混合器(天津市药典标准仪器厂),电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂).
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聚乙二醇化重组人白细胞介素-6工作标准品的制备
目的 制备重组人白细胞介素-6(Recombinant human interleukin-6,rhIL-6)和聚乙二醇化rhIL-6(PEG-rhIL-6)理化工作对照品和rhIL6冻干体外生物学活性工作标准品,用于PEG-rhIL-6制备过程中各步样品纯度、理化指标及体外生物学活性测定.方法 制备rhIL-6和PEG-rhIL-6,并对其进行全面检定,作为理化工作对照品.另取精确定量的rhIL-6,用含冻干保护剂的缓冲液稀释分装冻干,制成冻干制品后对其进行全面检定及稳定性考察,作为体外冻干生物学活性工作标准品.结果 两种理化工作对照品和冻干体外生物学活性工作标准品各项常规检测指标均符合暂定规程要求;两种理化工作对照品结构分析结果证实与理论值相符;冻干体外生物学活性工作标准品加速稳定性试验证明其体外活性稳定.结论 制备的两种理化工作对照品和冻干体外生物学活性工作标准品可用于PEG-rhIL-6中试工艺的研究和评价.
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人血管内皮生长因子的克隆表达及免疫学检测工作标准品的制备
目的:克隆表达人血管内皮生长因子165(human vascular endothelial growth factor 165,hVEGF165)基因,制备VEGF免疫学检测工作标准品.方法:用RT-PCR从肝癌组织扩增目的基因VEGF165,插入到pUCm-T质粒中并测序鉴定.构建原核表达重组质粒pET32a-hVEGF165,转化入大肠杆菌,经IPTG诱导,固化Ni2+吸收色谱纯化得到重组人VEGF165(recombinant human VEGF165,rhVEGF165).用Wstern Blot检测rhVEGF165免疫原性,并通过HUVEC增殖试验检测rhVEGF165生物学活性.按标准品的要求制备VEGF检测工作标准品,后用ELASA试剂盒标定.结果:PCR产物为600bp,测序结果表明其序列正确,人VEGF165可在大肠杆菌内可溶性表达,rhVEGF165蛋白相对分子质量为38kD,具有生物学活性.工作标准品浓度标定为5.05pmol/L.结论:成功地克隆了有生物学活性的VEGF165基因,并制备出VEGF免疫学检测工作标准品.
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细菌内毒素法检测甲硝唑注射液热原的考察
1实验材料鲎试剂(批号970502,0.5ml/支,灵敏度0.5EU/ml,湛江海洋生物制品厂),细菌内毒素工作标准品(10EU/支,批号960305,中国药品生物制品检定所),鲎试剂溶解水(2ml/支,内毒素含量<0.03EU/ml,厦门鲎试剂厂),细菌内毒素检查用水(10ml/支,内毒素含量<0.03EU/ml,中国药品生物制品检定所),0.2%甲硝唑注射液(批号:970422,970423,970424,970425,970426等,本院制剂室提供).重铬酸钾硫酸洗液、金属消毒液自制.电热恒温水浴锅(北京长安科学仪器厂),旋涡混合器(北京核仪器厂),电热恒温干燥箱等.
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用鲎试剂检测右旋糖酐40葡萄糖注射液细菌内毒素的方法研究
目前,右旋糖酐40葡萄糖注射液的热原检查,仍然采用家兔法进行.但是,家兔的个体差异性给实际的医药生产和药理实验所带来的麻烦日益突现出来.随着鲎试验法的发展和完善,用鲎试验法代替家兔法进行药品的热原检查已是必然趋势.本文采用凝胶法对其进行干扰实验,探讨鲎试验法的可行性.1.材料鲎试剂(TAL),批号:2000811,灵敏度λ=0.125EU/ml,0.1ml/支,由湛江海洋生物制品厂生产;内毒素工作标准品(CSE),效价100EU/支,中国药品生物制品检定所生产,批号:990405;细菌内毒素检查用水(BET),湛江海洋生物制品厂生产,批号:991217.右旋糖酐40葡萄糖注射液,浙江瑞安制药厂生产,批号:990510,20000105,20000314,三批样品热原检查均合格.
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人NT-proBNP的高效原核表达及免疫学检测标准品的研究
目的 构建人NT-proBNP(氨基末端脑钠肽,amino.terminal pro-brain natriuretic peptide)的高效原核表达载体,建立重组NT-proBNP纯化工艺,制备NT-proBNP免疫学检测工作标准品.方法 采用人工合成和套叠(GeneSOEing)PCR技术相结合的方式对NT-proBNP基因序列进行密码子进行偏嗜性改造后克隆入原核表达质粒pET32a和pET42a构建不同形式的NT-proBNP原核表达重组质粒;采用离子交换、HIS和GST亲和层析柱以及肠激酶(EK酶)酶切等方法建立NT-proBNP重组蛋白的纯化工艺;用Roche公司NT-proBNP检测试剂盒测定所制备的标准品的免疫活性和稳定性.结果 pET32a和pET42a构建的不同形式NT-proBNP原核表达质粒在BL21(DE3)均实现了高效可溶性表达,通过多种纯化方案制备了纯度达98.3%的NT-proBNP-83重组蛋白,经测定具有良好免疫活性和稳定性,适合用于免疫学检测工作标准品.结论 成功构建了人NT-proBN的高效原核表达载体,筛选出较适合用于免疫学检测工作标准品的NT-proBNP重组蛋白.
关键词: NT-proBNP高效 套叠PCR肠激酶 蛋白纯化 工作标准品 -
鲎试剂和热原检查氧氟沙星葡萄糖的对比
我们采用鲎试剂法检查氧氟沙星葡萄糖注射液 , 将结果报道如下 . 1 仪器与试剂 鲎试剂 (中国湛江海洋制品厂 , 0.5EU/ml, 批号 20010411); 内毒素工作标准品 (中国湛江海洋制品厂 , 10EU/ml, 批号 2000917);氧氟沙星葡萄糖注射液 (本院生产、批号 20010608、 20010619、 20010706、 20010728). 试验所用器皿 180℃干烤 2小时以上 , 净化工作台经紫外线消毒备用 .
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阿奇霉素细菌内毒素检测探讨
注射用阿奇霉素(azithromycin,AM)是具有15元的氮杂内酯环的半合成大环内酯类抗生素,对酸稳定,半衰期长,感染部位组织及细胞内浓度高,安全性及耐受性均好。本文参照中国药典2000年版细菌内毒素检查法,进行细菌内毒素检测试验。1 材料 鲎试剂(批号981230,灵敏度0.25EU/ml,福建省平潭县东方鲎试剂厂);鲎试剂溶解水(内毒素含量低于0.03EU/ml,以下简称水),细菌内毒素工作标准品(冻干,批号9901,50EU/支),均购自中国药品生物制品检定所;注射用阿奇霉素(0.125g,批号981121,981122,981123,990110,家兔法试验阴性)。
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环丙沙星注射液细菌内毒素检查
环丙沙星为新一代喹喏酮类抗菌药物,常用于治疗尿路感染、呼吸道感染。我们试用鲎试剂检查乳酸环丙沙星注射液细菌内毒素。1 试药 鲎试剂(批号971230,灵敏度0.5EU/ml),细菌内毒素检查用水(批号960928)均为厦门鲎试剂厂出品;细菌内毒素工作标准品(批号9701,中国药品生物制品检定所)。乳酸环丙沙星注射液(8批,连云港正大天睛制药有限公司,0.2g/100ml)。2 方法与结果2.1 细菌内毒素限值根据细菌内毒素限值L=K/M(K=5.0EU/kg,M=3ml/kg)计算出乳酸环丙沙星注射液的内毒素的理论限值为1.7EU/ml。2.2 供试品的干扰试验取鲎试剂,加鲎试剂溶解液0.1ml振摇溶解。将供试品液用细菌内毒素检查用水稀释成A(1∶4),B(1∶8),C(1∶16),D(1∶32),然后用此将内毒素工作标准品配制成系列稀释液;同时用细菌内毒素检查用水将细菌内毒素工作标准品同倍稀释;依法检查,求凝集终点几何平均值。结果表明:A,B,C有一定程度的抑制作用,D对鲎试剂无干扰作用,阳性对照(1EU/ml)均呈阳性,阴性对照均呈阴性。2.3 细菌内毒素检查取8批乳酸环丙沙星注射液以细菌内毒素检查用水1∶32稀释后,用λb=0.5EU/ml的鲎试剂进行试验,同时以原液进行热原检查。结果两法均为阴性。
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聚乙二醇化重组人白细胞介素-6生物学活性工作标准品的校准和稳定性研究
目的 对聚乙二醇化重组人白细胞介素-6生物学活性工作标准品进行校准和稳定性研究.方法 按《中国药典》三部(2010版)的要求,检测工作标准品的生物学活性,以IL-6国际标准品进行校准,并研究其在不同温度下放置的稳定性.结果 聚乙二醇化重组人白细胞介素-6工作标准品经8次试验,每次分别在3个96孔板上检测生物学活性,并以国际标准品进行校准,共获得24个校准活性结果.平均生物学活性的95%可信区间为2.0×106 ~ 3.8×106 AU/mL,单次测定范围为1.9×106~3.8×106 AU/mL,平均可信限率为3.771%.工作标准品分别在-20℃、4℃、25 ℃、37℃条件下放置12个月,其生物学活性保持稳定.结论 所制备的工作标准品可用于聚乙二醇化重组人白细胞介素-6中试工艺的研究和每批产品质量的评价.
关键词: 聚乙二醇化重组人白细胞介素-6 生物学活性 工作标准品 稳定性