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同型半胱氨酸对血管平滑肌细胞增殖和细胞周期素A表达的影响
目的：探讨同型半胱氨酸（Hcy）对血管平滑肌细胞增殖和细胞周期素A表达的影响。方法采用组织贴块法在正常脐动脉中获得血管平滑肌细胞（VSMCs），然后将其放置于5% CO2、37℃环境温度、胎牛血清含量为20%的DMEM/F-12培养基中进行培养，培养时间控制在15 d左右，可从组织块边缘爬出细胞，消化传代用0.25%胰蛋白酶，实验时采用生长良好的第2～5代细胞。结果 VSMCs被不同浓度的Hcy干预72 h后，细胞增殖性随着Hcy的浓度增加而日益明显，与空白对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。Western blotting 检测结果显示，VSMCs 被不同浓度的Hcy干预72 h后，随Hcy浓度的增加，细胞周期素A基因蛋白表达会大幅度增加，与空白对照组比较差异有统计学意义（P＜0.01）。结论 Hcy可以增殖VSMC，增加细胞周期素AmRNA的表达，诱导VSMCs增殖。
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细胞周期素A与肿瘤的发生及预后
细胞周期素A基因定位在染色体4q27上,为S期的特征性细胞周期蛋白,并且是一种具有癌基因性质的细胞周期蛋白,是G1期向S期转移的限速因素.细胞周期素A含有一个周期素盒,还含有一个降解盒.参与调节细胞DNA合成和有丝分裂的作用,在人类多种肿瘤中都过度表达,其过度表达与肝脏、颅脑、血液系统、子宫、软组织等肿瘤预后呈负相关.
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E2F4对CDK2和CyclinA在肝癌细胞系中的转录调控特异性研究
目的 研究E2F4对细胞周期素依赖性激酶2(CDK2)和细胞周期素A(Cyclin A)在肝癌细胞系中的转录调控活性.方法 扩增并克隆不同片段长度的CDK2和CyclinA启动子序列,E2F4表达质粒序列,转染肝癌细胞系(HepG2、QGY1007),双荧光报告系统检测荧光素酶表达活性,实时定量反转录.聚合酶链反应检测肝癌细胞系中CDK2和Cyclin A mRNA的表达水平.结果 双荧光报告系统、卖时定量反转录-聚合酶链反应显示,在肝癌细胞系中转染E2F4表达质粒组CDK2和CyclinA启动子活性明显低于未转染E2F4表达质粒组,CDK2和CyclinA mRNA的表达水平降低.结论 E2F4在肝癌细胞系中可以抑制CDK2和CyclinA的转录活性.
关键词： E2F4 细胞周期素依赖性激酶2 细胞周期素A 启动子 转录调控 -
细胞周期素A的特异反义脱氧寡核苷酸对白血病细胞增殖的调控作用
目的:探讨细胞周期素A(cyclin A)的特异反义脱氧寡核苷酸(ASON)对HL60细胞及原代白血病细胞增殖的调控作用.方法:采用反义技术将cyclinA特异的ASON与HL60细胞及原代白血病细胞共同培养,用流式细胞术及RT-PCR等方法检测cyclin A蛋白及mRNA表达水平,用苔盼蓝拒染法检测细胞生长曲线、软琼脂培养法检测CFU-HL60的集落形成情况.结果:在HL60及原代白血病细胞中,cyclin A的ASON能特异地抑制其mRNA的表达及其蛋白合成,与cyclin A的正义脱氧寡核苷酸(SON)组及对照组相比,有显著性差异(P＜0.01);而且当ASON的浓度达到一定程度时,白血病细胞的增殖及其CFU-L的集落形成率均明显受抑制(P＜0.01).结论:cyclin A的ASON通过封闭cyclin A的mRNA水平,使cyclin A蛋白合成减少,能抑制白血病细胞增殖,即cyclin A是调控白血病细胞增殖的关键因子.
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细胞周期素A在肾癌细胞增殖中的作用
目的:研究细胞周期素A在肾癌组织中的表达及其在肾癌细胞增殖中的作用.方法:应用免疫组化SABC法检测肾癌及正常肾组织中细胞周期素A及Ki--67基因的表达,运用统计学方法分析其差异,并通过Ki-67表达指数评价细胞周期素A在肾癌细胞增殖中的作用.结果:细胞周期素A在肾癌及正常肾组织中的阳性表达率分别为12.12%和5.09%(P＜0.01).在肾癌组织中,病理分级较高、术后生存时间＜5年者呈高表达(P＜0.01),不同临床分期及有(无)局部淋巴结转移的肿瘤之间表达无显著差异(P＞0.05).Ki-67指数较高者,细胞周期素A呈高表达(P＜0.01),细胞周期素A阳性表达率与Ki-67指数显著相关(r=0.757,P＜0.01).结论:细胞周期素A可能参与肾癌的恶性转化,但与肿瘤的临床进展过程无关.检测细胞周期素A的水平可反映肾癌细胞的增殖活性,并可作为肾癌预后估计的参考指标.
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细胞周期素A在口腔鳞癌中的表达及临床病理意义
目的 探讨细胞周期素A(Cyclin A)在口腔鳞癌及癌前病变中的的表达及其意义.方法 应用免疫组化SP法检测Cyclin A在65例口腔鳞癌、25例上皮异常增生及20例正常粘膜的表达.结果 Cyclin A在口腔鳞癌组织中阳性表达率为55.4%(36/65),在上皮异常增生组织有少量表达,在正常口腔粘膜组织未见表达.Cyclin A在低分化鳞癌组较高中分化组表达增高(P＜0.01).Cyclin A表达与颈淋巴结转移及临床病理分期有关(P＜0.05).Cyclin A表达与患者的年龄、性别及病灶大小无关(P＞0.05 ).结论 Cyclin A表达可能与口腔鳞癌的发生、分化及侵袭转移有关.
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食管鳞癌中细胞周期素A的表达对紫杉醇疗效的影响
目的 观察化疗前食管鳞癌组织中细胞周期素A的表达对紫杉醇化疗疗效的影响.方法 采用免疫组化法检查48例初治食管鳞癌组织中细胞周期素A的表达.患者接受含紫杉醇为主的方案化疗两周期后评价近期疗效,随访3年生存期.结果 细胞周期素A表达阳性患者化疗有效率54.8%.高于表达阴性患者的23.5%(P<0.05).肿瘤分期、分化程度、细胞周期素A的表达是影响食管鳞癌预后的独立因素.结论 细胞周期素A表达阳性的食管鳞癌患者对紫杉醇有较高的敏感性,可以作为预测紫杉醇疗效的参考指标.
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Cyclin A、CDK2基因在非小细胞肺癌中的表达及其意义
目的研究细胞周期素A(Cyclin A)和细胞周期素依赖性激酶2(cyclin-dependent kinases,CDK2)基因在非小细胞肺癌(non-small-cell lung cancer,NSCLC)组织中的表达及其相互关系,探讨其对NSCLC发生、发展、淋巴结转移及预后的影响.方法采用免疫组织化学二步法检测40例NSCLC(伴淋巴结转移21例,不伴淋巴结转移19例),11例支气管黏膜上皮增生或不典型增生,9例淋巴结转移癌组织中Cyclin A、CDK2蛋白的表达,并随访40例NSCLC患者3年生存期.结果在支气管黏膜上皮增生或不典型增生,不伴淋巴结转移的NSCLC,伴淋巴结转移的NSCLC,淋巴结转移癌组织中,Cyclin A蛋白的阳性表达率分别为9.09%(1/11),31.58%(6/19),80.95%(17/21),66.67%(6/9);CDK2蛋白的阳性表达率分别为9.09%(1/11),36.84%(7/19),76.19%(16/21),77.78%(7/9);不伴淋巴结转移的NSCLC组织中的Cyclin A、CDK2蛋白阳性表达率分别与伴淋巴结转移NSCLC组织、淋巴结转移癌组织的Cyclin A、CDK2蛋白阳性表达率比较,差异均有显著性(P均＜0.05).23例Cyclin A蛋白表达阳性患者3年生存率为21.74%(5/23),17例表达阴性患者3年生存率为58.82%(10/17),两者比较有显著性差异(P＜0.05);23例CDK2蛋白表达阳性患者3年生存率为17.39%(4/23),17例表达阴性患者3年生存率为64.71%(11/17),两者比较有显著性差异(P＜0.05).NSCLC中Cyclin A与CDK2蛋白表达呈正相关(x2=19.22,P＜0.001,列联系数Pearson=0.570).结论在NSCLC发生、演进、浸润、淋巴结转移过程中CyclinA、CDK2起正调控作用,NSCLC组织中CyclinA、CDK2表达上调可作为判断NSCLC预后不良的参考指标.
关键词： 非小细胞肺癌 细胞周期素A 细胞周期素依赖性激酶2 免疫组织化学 -
胃肠道肿瘤细胞周期素A的表达及其与化疗药物敏感性的关系
目的 探讨胃肠道肿瘤细胞细胞周期素A(Cyclin A)的表达及其与肿瘤化疗敏感性之间的相关性.方法 用流式细胞术双参数标记法对45例临床胃肠道肿瘤标本Cyclin A的表达进行检测,同时用四甲基偶氮唑盐显色法(MTT法)检测该肿瘤标本对几种常用化疗药物单药和联合用药方案的敏感程度.结果 Cyclin A阳性表达的肿瘤细胞中对5-氟尿嘧啶(5-FU)、顺铂(DDP)、5-FU+丝裂霉素(MMC)敏感的标本比例分别为76.9%、73.1%和84.6%;Cyclin A阴性表达的肿瘤细胞中相应的比例分别为15.8%、15.8%和10.5%,Cyclin A的表达与5-FU、DDP、5-FU+MMC的药物敏感性之间具有相关性(均P《0.01).Cyclin A的表达与泰素(Taxol)、替尼泊苷(VM-26)、MMC、5-FU+Taxol、5-FU+DDP药物敏感性未发现有相关性(均P》0.05).结论 Cyclin A的表达与某些肿瘤术后化疗方案的敏感程度显著相关,检测该指标对术后化疗药物和联合化疗方案选择可起到一定指导作用.
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细胞周期素A的特异反义脱氧寡核苷酸对K562细胞增殖的调控作用
目的探讨细胞周期素A(Cyclin A)的特异反义脱氧寡核苷酸(ASON)对K562细胞增殖的调控作用.方法采用反义技术将Cyclin A特异的ASON与K562细胞共培养后,用台盼蓝拒染法绘制生长曲线、并做CFU-K562克隆培养,流式细胞术进行A蛋白检测.结果Cyclin A特异的ASON组与正义脱氧寡核苷酸(SON)组及空白对照组相比,能特异地抑制Cyclin A蛋白水平的表达(P＜0.01);而且当ASON的浓度达到一定程度时,K562细胞的增殖及集落形成率均明显受抑制(P＜0.01).结论ASON能特异封闭Cyclin A蛋白水平,并能抑制K562细胞的增殖,但有明显的浓度依赖性.
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EGFR、Her-2和细胞周期素A在食管鳞癌中的表达
目的:探讨食管鳞癌中EGFR信号传导通路相关分子(EGFR、Her -2)及细胞周期素A的表达情况及三者之间的相互关系.方法:随机选取食管鳞癌根治术后的切除标本76例和21例癌旁正常鳞状上皮组织,应用免疫组化法检测EGFR、Her -2和细胞周期素A的表达.结果:EGFR、细胞周期素A在食管鳞癌的表达明显高于癌旁正常鳞状上皮(63.2％ vs 33.3％、61.8％ vs 23.8％,P＜0.05),Her -2在食管鳞癌低表达(3.9％),正常鳞状上皮不表达；EGFR、Her -2和细胞周期素A均与脉管累犯、淋巴结转移正相关,此外,Her -2和细胞周期素A还与肿瘤浸润深度正相关；EGFR与细胞周期素A的表达成正相关(P＜0.01),而Her2与EGFR及细胞周期素A表达未发现相关关系.结论:EGFR和细胞周期素A在食管鳞癌中高表达可能与食管鳞癌的发生发展有关,并有可能成为靶向治疗的靶点,而Her -2在食管鳞癌由于表达很低,有可能不是该肿瘤分子治疗的靶点.
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CyclinA及细胞凋亡在子宫肌瘤的表达及意义
目的:探讨CyclinA及细胞凋亡在子宫肌瘤及邻近正常肌组织中的表达及意义.方法:采用免疫组织化学法测定子宫肌瘤组织和邻近正常肌组织中CyclinA的表达情况.采用TUNEL法观察子宫肌瘤组织和邻近正常肌组织中的凋亡情况.结果:CyclinA在子宫肌瘤及正常肌组织中均有表达,但在子宫肌瘤组织中的表达明显强于正常肌组织中(P＜0.01);子宫肌瘤组织中未检测到凋亡细胞,而邻近正常肌组织中偶尔可见凋亡染色阳性细胞.结论:子宫肌瘤细胞增生的增强,凋亡的抑制是子宫肌瘤生长的重要机制.
