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PAD4在抗中性粒细胞胞浆抗体相关性小血管炎中的作用及意义
目的:探讨肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(peptidylarginine deiminase type 4,PAD4)在抗中性粒细胞胞浆抗体(antineutrophil cytoplasmic antibody,ANCA)相关性小血管炎(ANCA-associated vasculitis,AAV)的发病机制及疾病活动中的临床意义,并对慢性支气管炎与AAV的发病关系做初步探讨.方法:收集13例AAV患者、13例慢性支气管炎和支气管扩张(chronic bronchitis and bronchiectasis,CB)患者、11例类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者的发作期与缓解期血清,11例原发性慢性肾病(chronic kidney disease,CKD)患者的血清,以及12例健康对照的血清.用ELISA法检测血清PAD4的水平,分别比较不同组别血清PAD4的表达差异,并进一步研究AAV患者中PAD4与伯明翰血管炎活动性评分(Birmingham Vasculitis Activity Score,BVAS)的相关性.结果:(1)在发作期与缓解期的AAV组、RA组以及发作期的CB组,PAD4水平明显高于正常对照组(P＜0.001,α'=0.007),而在CB组患者缓解期以及CKD组患者中,PAD4水平与正常对照相比差异无统计学意义(分别为P=0.02,P=0.085,α'=0.007).(2)在单纯AAV组、AAV伴CB组及单纯CB组患者的发作期中,PAD4水平差异无统计学意义,但在缓解期时,单纯CB患者的PAD4水平低.(3)部分CB组患者的PAD4在缓解期时仍维持较高水平.(4) AAV肾损害组患者发作期的PAD4水平与BVAS评分呈正相关(r=0.71,P=0.02).结论:PAD4参与了AAV的发生、发展,部分慢性支气管炎患者与AAV的发病有一定相关性.
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肽酰基精氨酸脱亚胺酶4单核苷酸多态性与河北汉族人群类风湿关节炎的相关性研究
目的 研究肽酰基精氨酸脱亚胺酶(PADI)4基因padi4_94位点及padi4_104位点的单核苷酸多态性(SNP)与河北汉族人群类风湿关节炎(RA)易感性的关系.方法 采用基于医院的病例-对照研究方法 ,收集河北地区汉族人群无血缘关系的115例RA患者和年龄、性别相当的106名健康体检者的外周血,用DNA测序法对PAD14基因第三内含子区域padi4_94位点及第四外显子区域padi4_104位点2个SNP进行检测.结果 在两组人群中,padi4_94及padi4_104的基因型分布均符合Hardy-weinberg平衡.两个SNP位点构建单倍型,得到3个单倍型,分别为AA、AG和GG,没有GA型.两SNP的AA、AG、GG基因型和A、G等位基因分布在RA病例组与健康对照组相比差异均无统计学意义,经Logistic回归分析无一单倍型为影响RA患病的危险因素.结论 在河北汉族人群中,PAD14基因的pa-di4_94、padi4_104位点存在SNP,此多态性与RA的易感性可能不存在相关性,尚不足以构成RA的独立遗传因素.
关键词： 关节炎 类风湿 多态性 单核苷酸 肽酰基精氨酸脱亚胺酶4 -
4型肽酰基精氨酸脱亚胺酶单核苷酸多态性与河北汉族人群类风湿关节炎的相关性
目的 探讨4型肽酰基精氨酸脱亚胺酶( PADI4)单核苷酸多态性(SNP)与中国河北汉族人群类风湿关节炎(RA)易感性的关系.方法 采用病例-对照研究方法,用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性( PCR-RFLP)法检测该地区105例RA患者和96名健康者的PADI4 92基因型并与先前报道的PADI4其他位点进行连锁不平衡分析,构建单倍型,进行相关性分析.采用Pearson x2检验及Woolf方法计算并相对危险度及95％可信区间(95％CI).结果 3个位点的碱基均存在二态性,通过对padi4_92、padi4_ 94、padi4_104 3个位点的连锁不平衡分析,构建成5种主要功能单倍体,功能单倍体CCC和GTT所占频率达到了80％,并且均与RA的发病存在相关性.功能单倍体GCC虽然所占频率不到10％,但是却与RA的发病有着强烈的关联,分布明显趋向病例组.结论 PADI4基因SNP单核苷酸多态性以及基因功能单倍体表达多样性均与河北汉族人群RA易感性相关.
关键词： 关节炎 类风湿 多态性 单核苷酸 肽酰基精氨酸脱亚胺酶4 -
小干扰RNA沉默肽酰基精氨酸脱亚胺酶4基因对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞凋亡的影响
目的 研究小干扰RNA(siRNA)沉默肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)基因在滑膜成纤维细胞(FLS)凋亡调控中的作用,为进一步研究PADI4在RA发病机制中的作用奠定基础.方法 设计并合成2对针对PADI4基因编码区的干扰核苷酸链,通过脂质体介导将siRNA转入RA-FLS细胞中,作用48 h后收集FLS细胞,抽提RNA逆转为cDNA,并提取FLS细胞蛋白质,通过荧光定量PCR、蛋白印迹技术,确定siRNA成功干扰PADI4表达后,比较siRNA实验组FLS细胞和对照组FLS细胞凋亡率,细胞周期调控蛋白CyclinB1和P21的表达量.收集细胞培养液,ELISA法测定IL-1β.所有数据采用配对t检验进行分析.结果 所设计的针对PADI4的siRNA成功干扰PADI4在FLS中的表达,空白对照组(si-NC)中PADI4 mRNA水平为1.00±0.20,si-944和si-1225干扰组分别为0.38±0.20(t=9.607,P＜0.01)和0.39±0.23 (t=8.394,P＜0.01);FLS中与对照组细胞凋亡率(1.6±0.3)％相比,si-944和si-1225干扰组分别为(5.4±0.6)％(t=-19.223,P＜0.01),(6.1±0.6)％(t=-24.229,P＜0.01),细胞凋亡明显增加.siRNA转染组细胞周期蛋白CyclinB1表达下降,P21表达上升.与对照组IL-1β水平(23.9±0.7) ng/ml相比较,si-944和si-1225干扰组IL-1β分泌增多[分别为(26.8±0.7) ng/ml,(27.7±0.7) ng/ml;t=-10.747,-10.967,P均＜0.01).结论 PADI4在FLS细胞凋亡中起着重要的调控作用,可能在RA的发病中起着一定的作用.
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纤维连接蛋白瓜氨酸化后对聚蛋白多糖酶-1活性的影响
目的 通过观察聚蛋白多糖酶-1 (ADAMTS-4)与纤维连接蛋白(FN)以及瓜氨酸化的FN(cFN)的结合活性及结合后的酶解活性,探讨ADAMTS-4的活性调节机制.方法 应用肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)对纤维连接蛋白(FN)进行瓜氨酸化并采用蛋白印迹法进行验证；应用酶联免疫吸附法测定FN和cFN与2种不同相对分子质量的ADAMTS-4的结合活性；使用聚蛋白多糖酶活性分析试剂盒测定2种ADAMTS-4的活性和其与FN、cFN结合后酶活性的变化.统计分析采用单因素方差分析,LSD-t检验或t检验.结果 蛋白印迹法证实PADI4可以使FN瓜氨酸化为cFN; cFN与相对分子质量为93 000的ADAMTS-4的结合活性明显低于FN(分别为0.624±0.033,2.182±0.042;t=50.522,P＜0.01),而两者与缺失碳端的相对分子质量为53 000的ADAMTS-4的结合活性差异无统计学意义(分别为0.934±0.012,0.971±0.024; t=2.388,P＞0.05).相对分子质量为93 000的ADAMTS-4能够酶解聚蛋白多糖产生大量酶解产物[ARGxx肽段浓度:(0.908±0.088) nmol/L],与FN结合后降解聚蛋白多糖的能力明显下降[ARGxx肽段浓度:(0.573±0.000) nmol/L,P＜0.05],与cFN孵育后的ADAMTS-4降解聚蛋白多糖产生的ARGxx肽段浓度[(0.830±0.020) nmol/L]明显高于与FN孵育后产生的ARGxx肽段浓度[(0.573±0.000)nmol/L,P＜0.05].相对分子质量为53 000的ADAMTS-4的酶活性在与FN或cFN孵育前后酶活性无明显变化(P均＞0.05).结论 FN能结合ADAMTS-4并抑制它的活性,PADI4能将FN转化为cFN,cFN与ADAMTS-4的结合活性明显降低,从而对ADAMTS-4的活性抑制作用减弱.
关键词： 连接蛋白类 瓜氨酸 聚蛋白多糖酶1 肽酰基精氨酸脱亚胺酶4 -
抗鼠科肉瘤病毒癌基因同源物B1抗体和抗肽酰基精氨酸脱亚胺酶4抗体与类风湿关节炎相关性的研究进展
类风湿关节炎（RA）是以关节滑膜炎为主要特征的慢性、侵蚀性自身免疫病，其早期临床症状隐匿且多不典型，如不早期治疗，病情反复发作，终可导致关节的破坏，可致畸甚至丧失劳动能力，严重影响患者的生活质量。RA的发病机制尚不明确，目前认为抗原抗体反应在其发展过程中起着重要作用，因而寻找特异性及敏感性较高、在RA发病早期即可检测到的自身抗体对于RA的诊断是十分必要的，同时也可用于RA的预后及对RA病情活动度的监测，以便临床医生更好地掌握病情并指导治疗。
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PADI4-siRNA-MSN的构建及其在RA防治中的初步应用
目的:制备介孔二氧化硅纳米载体(MSN)并包载肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PADI4)小干扰RNA(PADI4-siRNA-MSN),阐明PADI4-siRNA-MSN对类风湿关节炎成纤维滑膜细胞(RA-FLS)凋亡的影响.方法:采用模板法合成MSN,包被阳离子聚合物聚乙烯亚胺(PEI)及荧光标记分子罗丹明B(RhB),检测其表征,包括粒径、Zeta电势、荧光和形貌.设计并合成2对FAM标记的针对PADI4基因编码区的干扰核苷酸链(si-944、si-1225)及阴性对照si-NC,制备PADI4-siRNA-MSN和si-NC-MSN,转染RA-FLS,流式细胞术(FCM)鉴定转染率.采用荧光定量PCR、蛋白印迹技术检测转染48 h后,干扰组和阴性对照组细胞PADI4表达量,FCM检测细胞凋亡率,激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察PADI4-siRNA-MSN胞内分布.所有数据采用配对t检验进行分析.结果:MSN经表征检测显示已成功制备并包被RhB、PEI,FCM结果显示转染率为93.3％(si-944)和91.9％(si-1225).si-NC组中的PADI4 mRNA水平为1.23±0.27;si-944、si-1225干扰组中分别为0.35±0.12、0.44±0.12,均显著低于阴性对照组(P<0.05).蛋白印迹结果与PCR结果一致.与si-NC组细胞凋亡率(8.83±0.15)相比,si-944和si-1225组细胞凋亡率(11.72±0.82,13.00±1.42)显著增加(P<0.05).CLSM结果显示PADI4-siRNA-MSN分布于核周.结论:PADI4-siRNA-MSN成功制备,并转染RA-FLS,有效沉默PADI4基因,显著增加RA-FLS的凋亡率.PADI4-siRNA-MSN在抑制RA-FLS增殖、促进凋亡中具有一定的应用前景.
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BMI-1和 PADI4在食管鳞状细胞癌中的表达及其临床意义
目的：检测食管鳞状细胞癌组织及对应癌旁组织中肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PADI4）和B 细胞特异莫洛尼鼠白血病病毒整合位点-1（BMI-1）的表达，探讨其在食管鳞状细胞癌发生中的作用及临床意义，并探索两者的相关性。方法采用免疫组织化学、Western blotting 及实时定量 PCR 法检测86例食管鳞状细胞癌及配对癌旁组织标本中 PADI4和 BMI-1的表达，并分析其在食管鳞状细胞癌中的表达情况与各临床病理因素的关系。结果免疫组织化学结果显示食管鳞状细胞癌中 PADI4、BMI-1的阳性表达率分别为68．6％和73．3％，明显高于癌旁组织中的37．2％和30．2％（χ2＝17．011，P ＝0．000；χ2＝31．876，P ＝0．000）；Western blotting 显示食管鳞状细胞癌中 PADI4、BMI-1的表达量显著高于癌旁组织（0．919±0．098∶0．718±0．103，t ＝2．462，P ＝0．021；0．975±0．074∶0．717±0．071，t ＝2．640，P ＝0．014）；实时定量 PCR 显示食管鳞状细胞癌中 BMI-1、PADI4 mRNA 相对表达量比对应癌旁组织增高，但差异无统计学意义（0．091±0．005∶0．038±0．002，t ＝1．701，P ＝0．101；0．114±0．075∶0．048±0．003，t ＝1．499，P ＝0．146）。食管鳞状细胞癌中 PADI4表达与肿瘤的淋巴结转移（χ2＝5．771，P ＝0．016）、浸润深度（χ2＝6．672，P ＝0．010）、临床分期（χ2＝5．771，P ＝0．016）密切相关；BMI-1表达与淋巴结转移（χ2＝7．176，P ＝0．007）、分化程度（χ2＝13．787，P ＝0．001）、临床分期（χ2＝7．176，P ＝0．007）密切相关。另外，通过免疫组织化学及实时定量 PCR 检测发现 PADI4和 BMI-1在食管鳞状细胞癌中的表达呈正相关（r ＝0．214，P ＝0．047；r ＝0．534，P ＝0．005）。结论 PADI4和 BMI-1在食管鳞状细胞癌中表达较癌旁组织均明显升高且呈正相关，其有望成为食管鳞状细胞癌诊断及判断预后的新指标。
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雌激素及顺铂对卵巢癌细胞A2780 PADI4的表达及其细胞增殖的影响
目的：探讨雌激素及顺铂对卵巢癌细胞A2780中肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PADI4）表达的作用及其对癌细胞增殖的影响。方法在培养的卵巢癌细胞系A2780细胞中加入不同浓度17β-雌激素作用96 h后（10－12、10－10、10－8、10－6、10－4 mmol／L），采用实时定量 PCR及Western Blotting检测PADI4表达，并用CCK-8试剂盒检测细胞增殖，选取PADI4的表达变化明显的雌激素浓度，将A2780细胞分为空白对照组、雌激素组、顺铂组、雌激素加顺铂组（联合组），采用上述方法检测各组PADI4的表达和细胞的增殖情况。结果①雌激素作用96 h后PADI4表达及细胞增殖随雌激素浓度升高而逐渐降低，但当雌激素浓度升至10－4 mmol／L 时PADI4表达及细胞增殖率开始升高。②与空白对照组比，联合组和顺铂组培养96 h后PADI4表达均明显降低，且联合组细胞增殖率较雌激素组低。结论雌激素可随浓度不同调控卵巢癌细胞A2780中PADI4的表达和细胞增殖；雌激素对卵巢癌细胞增殖的影响可能与PADI4表达有关。
关键词： 卵巢肿瘤 肽酰基精氨酸脱亚胺酶4 细胞增殖 17β-雌激素 顺铂 -
肽酰基精氨酸脱亚胺酶4在ANCA相关性小血管炎中的作用探讨
目的 通过检测肽酰基精氨酸脱亚胺酶4(PAD4)在ANCA相关性小血管炎(AAV)患者血清中的水平,探讨其在AAV发病中的作用及意义.方法 收集13例AAV患者发作期与缓解期血清,11例原发性慢性肾脏病患者的血清,12例健康对照的血清.用酶联免疫吸附法(ELISA)检测PAD4的水平,分析其与AAV患者BVAS评分的关系.结果 (1)在AAV组,PAD4在发作期与缓解期的水平明显高于健康对照组;而在慢性肾脏病患者组中,PAD4水平与健康对照相比无显著差异.(2)AAV组有肾损害的患者PAD4水平,无论发作期还是缓解期,均高于慢性肾脏病组患者的PAD4水平.(3)AAV肾损害组患者发作期的PAD4水平与BVAS评分呈显著正相关(r=0.71,P=0.02).结论 PAD4参与了AAV的发生和发展.
关键词： 血管炎 抗体 抗中性白细胞胞质 中性粒细胞细胞外诱捕网 肽酰基精氨酸脱亚胺酶4 -
类风湿性关节炎滑膜组织PADI4的表达
目的 研究类风湿关节炎(RA)、骨关节炎(OA)和强直性脊柱炎(AS)滑膜液中肽酰基精氧酸脱亚胺酶4(PADI4)的表达.方法 收集RA(n=73)、OA(n=96)和AS(n=32)滑膜液标本及RA(n=6)、OA(n=6)和AS(n=32)关节滑膜标本,应用酶联免疫吸附法(ELISA)和蛋白印迹分析的方法检测滑膜液中PADI4蛋白表达,应用实时定量PCR比较RA、OA和AS患者滑膜中PADI4的mRNA的表达,并研究抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体和类风湿因子(RF)、C反应蛋白(CRP)与PADI4的相关性.结果 RA患者滑膜液中PADI4、抗CCP抗体、RF含量较高,OA、AS患者滑膜液中PADI4、抗CCP抗体、RF含量无明显改变,RA患者与OA、AS患者比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 以上结果证实RA患者滑膜中PADI4表达较高,PADI4在RA发病过程中发挥作用,PADI4的表达水平可能与一些临床表现有关.
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血清抗肽酰基精氨酸脱亚氨酶4抗体检测在类风湿关节炎诊断中的意义
目的 比较类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者血清中抗肽酰基精氨酸脱亚氨酶4(PADI4)抗体水平和其它风湿病组及正常对照组间的差异,以评估其在RA诊断中的价值.方法 采用酶联免疫吸附法(enzvme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测患者血清中抗PADI4抗体水平,并研究其与RA患者DAS28评分、抗CCP抗体、抗角蛋白抗体(anti-keratin antibody,AKA)、类风湿因子(rheumatoidfactor,RF)等指标的相关性.结果 RA患者血清中抗PADI4抗体阳性率为47%,明显高于其它风湿性疾病患者和健康对照组(P<0.05).抗PADI4抗体对RA诊断的敏感性为43%,特异性为92%.相关性分析显示抗PADI4抗体水平与DAS28评分、抗CCP抗体无相关性(r=-0.025,P=0.82;r=-0.058,P=0.60).RF阴性患者PADI4抗体阳性50%;AKA阴性的患者PADi4抗体阳性43%;抗CCP抗体阴性的患者抗PADl4抗体阳性60%.结论 RA患者血清中抗PADI4抗体有较高的诊断价值,特别有助于RF、抗CCP抗体及AKA阴性RA的诊断.PADl4可能是RA的一个致病性抗原并在RA的发病和病理过程中起重要作用.
关键词： 自身抗体 关节炎 类风湿 肽酰基精氨酸脱亚胺酶4
