首页 > 文献资料
-
重组腺病毒介导的肌浆网钙ATP酶在大鼠心肌细胞的过表达
目的:为研究和评估 SERCA2a 在充血性心力衰竭的基因治疗中的价值和 SERCA2a 转基因对心力衰竭病生理的影响.方法:采用重组腺病毒 AdEasy 系统,构建了含SERCA2a cDNA的重组病毒载体 rAd-trSERCA2a.感染培养的乳鼠心肌细胞,以 RTPCR 和Western Blotting检测 SERCA2a在心肌细胞中的表达.结果:经 PCR 法和 Southern 确定目的基因SERCA2a存在于rAd-trSERCA2a基因组中,且连续传代保持其遗传稳定性.感染组心肌细胞SERCA2a蛋白mRNA和蛋白含量分别为对照的4.6倍和1.5倍.结论:我们成功地构建了含 SERCA2a 的重组腺病毒 rAd-trSERCA2a,该病毒可有效介导 SERCA2a 在心肌细胞中的表达.
-
下调心肌CPT1b的表达对肥胖小鼠心肌细胞钙调控的影响
目的 研究干扰心肌组织中肉毒碱脂酰转移酶-1b(CPT1b)的表达对高脂饮食诱导的肥胖小鼠心肌细胞钙调控的影响.方法 4周龄的雄性C57小鼠,随机分为正常对照组(N-mock)、肥胖对照组(O-mock)及肥胖干预组(O-CPT1b),采用高脂饮食诱导肥胖.6周龄时,经心肌分别注射靶向CPT1b(O-CPT1b)或靶向无关基因(N-mock、O-mock)的重组慢病毒,以下调目标基因的表达.10周后,取小鼠左心室组织检测RNA干扰的效率;采用Western blot法检测左心室组织中肌浆网钙泵(SERCA2a)的蛋白表达;并分离单个心室肌细胞,使用活细胞工作站检测心肌细胞钙瞬变.结果 肥胖小鼠心肌组织中CPT1b的表达增加,慢病毒介导的RNA干扰显著下调其表达.肥胖引起心肌细胞SERCA2a的蛋白表达降低及肌质网钙处理能力的下降,下调CPT1b的表达增加了SERCA2a的含量,并改善了钙调控异常.结论 下调心肌组织中CPT1b的表达可改善肥胖所导致的心肌细胞钙调控异常.
-
促红细胞生成素保护糖尿病大鼠心功能的机制研究
目的:探讨促红细胞生成素(erythropoietin,EPO)保护糖尿病大鼠心功能的相关机制.方法:雄性SD大鼠40只,随机分为正常对照组、正常+EPO干预组、糖尿病组、糖尿病+EPO干预组,每组10只.采用链脲佐菌素腹腔注射建立糖尿病动物模型,建模成功后,给予正常+EPO干预组和糖尿病+EPO干预组大鼠皮下注射EPO 1 000 IU/Kg,正常对照组和糖尿病组皮下注射等量生理盐水,每周1次,共12周.建模前及末次给药后7d,尾静脉采血,检测血糖、血脂和血常规,超声心动图检测心功能,RT-PCR法分析内质网应激蛋白葡萄糖调节蛋白78(glucose regulated protein78,GRP78)、肌浆网Ca2+-ATP酶(SERCA2a)和EPO受体(EPOR) mRNA表达水平,Western blot技术检测GRP78、SERCA2a和EPOR蛋白表达.结果:正常对照组和正常+EPO干预组之间,心功能、血糖、血脂、血常规、GRP78、SERCA2a和EPOR蛋白表达水平均无明显差别(P＞0.05).与正常对照组和正常+EPO干预组相比,糖尿病组大鼠射血分数及左心室短轴缩短率明显下降(P＜0.01),血糖和血脂明显升高(P＜0.01),左心室心肌组织GRP78 mRNA及蛋白表达明显增加(P＜0.01),SERCA2a和EPOR mRNA及蛋白表达明显减少(P＜0.01).与糖尿病组相比,糖尿病+EPO干预组大鼠射血分数及左心室短轴缩短率明显增加(P＜0.01),左心室舒张末期内径明显减小(P＜0.05),左心室收缩末期内径明显减小(P＜0.01),左心室组织GRP78mRNA及蛋白表达明显下降(P＜0.01),SERCA2a和EPOR mRNA及蛋白表达明显增加(P＜0.01).结论:EPO具有保护糖尿病大鼠心功能的作用,其机制可能是减轻心肌内质网应激,增加糖尿病大鼠心肌SERCA2a和EPOR蛋白表达.
-
CPU0213对内皮素-NADPH氧化酶介导H2O2损伤心肌细胞的改善作用
心肌细胞中NADPH氧化酶活性增强和内皮素系统过度激活,是造成心肌细胞损伤的重要机制.本文旨在探讨内皮素受体拮抗剂CPU0213能否通过抑制ET-NADPH氧化酶的过表达,减轻心肌细胞氧化损伤.将SD乳大鼠心肌细胞分成7组:对照组、H2O2组、PKA/PKC阻断剂H89/Bis干预组、,NADPH氧化酶阻断剂APO/DPI组和CPU0213治疗组.结果表明,H2 O2组钙调蛋白FKBP12.6,SERCA2a和CASQ2表达明显下调,pPKCε/PKCε,NADPH氧化酶亚基及ETA R/ETBR明显上调,提示:H2O2激活NADPH氧化酶须依赖PKC活性,CPU0213通过抑制ET-pPKC-NADPH氧化酶通路逆转FKBP12.6,SERCA2a和CASQ2的下调.
-
黄芪多糖对异丙肾上腺素诱发的SERCA2 a表达及活性降低的影响
目的：探讨黄芪多糖对异丙肾上腺素( isopreterenol, ISO)刺激下心肌细胞 SERCA2a表达的影响。方法采用Real-time PCR法检测SERCA2a mRNA的表达；利用蛋白质免疫印迹法检测SERCA2a蛋白的表达。以4-硝基酚磷酸二钠(p-NPP)法检测 SERCA2a 的活性。结果与对照组相比,ISO组心肌细胞SERCA2a mRNA及蛋白的表达均明显降低,而黄芪多糖剂量依赖性地逆转上述降低。此外,黄芪多糖还可明显提高SERCA2a的活性。结论黄芪多糖可缓解ISO引起的SERCA2a表达及活性的下调。该作用可能是黄芪多糖缓解心肌细胞内Ca2+超载,进而发挥其心血管保护作用的重要机制。
-
PLN蛋白复合物调控心脏泵功能研究概论及前景展望
肌浆网(SR)钙转运功能障碍为目前公认的人和动物实验性心力衰竭的主要病理特征,SR钙转运受多个蛋白复合物的调控,包括:蛋白激酶及蛋白磷酸化酶以及一些与之相互结合的蛋白和调控亚基,这些蛋白共同作用精细调节肌浆网的钙转运.其中,SR钙摄入受SR Ca-ATPase (SERCA2a)及其磷酸化调控蛋白phospholamban(PLN)的调控,近年来研究显示:除SERCA2a和PLN之外机体内还存在其它与PLN相关的调控SR钙转运的因子,主要包括:蛋白磷酸化酶1抑制因子、热休克蛋白20(HSP20)和HS相关蛋白X-1(HAX-1)等,这些蛋白质与PLN之间存在直接或间接的相互作用通过蛋白复合物的形式精细调控SR的钙摄入、贮存和释放.值得一提的是,PLN/SERCA2a及其相关复合物不仅可调控心肌收缩功能,还可调控动物生存率及心肌重塑;人体研究发现上述SR相关蛋白的基因突变及活性改变也可导致心肌收缩功能抑制以及心室重塑,预期这些遗传学方面的改变可作为心脏病理生理的预后和诊断标志物.
-
表没食子儿茶素没食子酸酯参与老年小鼠心脏SERCA2a的调控及其机制
目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯[(-)-epigallo-catechin-3-gallate,EGCG]能否通过抑制组蛋白去乙酰化酶1 (histone deacetylase 1,HDAC1)参与老年小鼠心脏SERCA2a的表达.方法 24只16月龄雄性C57 BL/6老年小鼠随机数字表法分为EGCG+老年组[腹腔注射50 mg/(lg·d)的EGCG]、DMSO+老年组(腹腔注射与溶解EGCG同剂量的二甲基亚砜)以及未处理老年组,每组8只;3月龄雄性C57 BL/6成年小鼠作为青年组(n=8).干预8周,收集心脏组织.RT-PCR检测Atp2a2及HDAC1的mRNA表达量,Western blot检测SERCA2a的表达量.ChIP-Q-PCR检测Atp2a2启动子区组蛋白AcH3K9水平及HDAC1、GATA4、Mef2c的结合量.结果 RT-PCR及Western blot结果表明,老年小鼠心脏SERCA2a在mRNA及蛋白水平的表达降低(P＜0.05),HDAC1在mRNA水平表达升高(P＜0.05).ChIP-Q-PCR结果表明,老年小鼠心脏Atp2a2启动子区HDAC1结合量升高,组蛋白AcH3K9水平降低,GATA4、Mef2c的结合量降低(P＜0.05).EGCG干预8周后,老年小鼠心脏HDAC1的表达量及其在Atp2a2启动子区的结合量降低,组蛋白AcH3 K9水平升高,GATA4、Mef2c的结合量增加(P＜0.05),EGCG在mRNA及蛋白水平升高了老年小鼠心脏SERCA2a的表达(P＜0.05).结论 由HDAC1介导的组蛋白H3K9低乙酰化可能是老年小鼠心脏SERCA2a表达降低的关键机制之一,EGCG通过抑制这一过程升高老年小鼠心脏SERCA2a的表达.
