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IL-24抑制宫颈癌裸鼠移植瘤生长的初步研究
目的 探讨基因重组质粒pDC316-hIL-24对裸鼠人宫颈癌移植瘤生长和浸润转移的抑制作用,以及其与nm23H1表达变化的关系.方法 将18只造模成功的人宫颈癌Hela细胞裸鼠模型随机分为3组,每组6只:BPS缓冲液时照Ⅰ组,空质粒Ⅱ组,IL-24重组质粒Ⅲ组.观察各组裸鼠饮食、体重等一般状况,记录各组裸鼠移植瘤体积、绘制生长曲线.观察裸鼠肿瘤附近淋巴结转移情况,实验结束后根据瘤体重量计算肿瘤抑制率.应用RJ-PCR法检测移植瘤IL-24的表达,并用免疫组化法nm23H1蛋白表达变化.结果 基因重组质pDC316-hIL-24在裸鼠体内转染成功,且有明显的抑瘤效果,抑瘤率为42.9%,与对照组、空粒组差异有统计学意义(P<0.03).IL-24重组质粒组肿瘤淋巴结转移较其他组少,差异有显著(P<0.05).免疫组化结果显示,IL-24组的转移抑制基因nm23H1蛋白表达明显增多,与其余2组比较差异有统计学意义(P<0.001).结论 重组质粒pDC316-hIL-24能明显抑制宫颈癌裸鼠肿瘤模型的生长,并可能通过上调nm23H1的表达发挥抗肿瘤生长和浸润转移的作用.
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白细胞介素24对裸鼠人宫颈癌Hela细胞移植瘤抑制作用的探讨
目的:探讨基因重组质粒pDC316-hIL-24对裸鼠人宫颈癌模型的肿瘤生长及凋亡的作用.方法:于5周龄裸鼠腋窝外侧皮下注射1×107个/mL Hela细胞悬液100μL,将15只构建成功的人宫颈癌Hela细胞裸鼠模型随机分为3组,分别于瘤体内注射转染试剂Lipofectamine 2000与基因重组质粒pDC316-hIL-24(A组)、空质粒pDC316(B组)以及磷酸盐缓冲液(C组),比较干预后各组移植瘤的体积及抑瘤率.应用RT-PCR法测定移植瘤中hIL-24的表达,HE染色观察各组肿瘤组织形态学变化,免疫组化方法研究肿瘤细胞凋亡情况.结果:①IL-24基因成功转染入肿瘤细胞并在其中成功表达,至实验结束时,B组和C组移植瘤体积大于A组(F=63.395,P＜0.05);A组的平均抑瘤率高于B组(t=130.920,P＜0.01).②病理学观察见A组宫颈癌细胞有局灶性坏死,细胞变大,胞质疏松,核深染,可见核固缩、核溶解、核碎裂,染色质成团状.③免疫组化结果显示,A组BCL-2蛋白表达低于其他2组(F=6.164,P＜0.05),而其同源蛋白BAX表达高于其他2组(F=58.426,P＜0.05).结论:基因重组质粒pDC316-hIL-24对宫颈癌裸鼠模型肿瘤生长具有明显的抑制作用,其可能通过激活细胞凋亡通路而诱导肿瘤细胞凋亡.
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白细胞介素-18对荷卵巢癌裸鼠的肿瘤生长抑制作用
目的:研究白细胞介素-18(IL-18)对荷卵巢癌裸鼠的肿瘤生长抑制作用,并探讨治疗前后肿瘤的病理改变.方法:采用人卵巢癌细胞株HO-8910建立24只裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,种植后1周随机分4组,每组6只,分别用不同浓度的IL-18进行腹腔注射治疗,并于种植后第4周处死裸鼠,测量瘤重,计算抑瘤率,绘制肿瘤生长曲线,计算镜下肿瘤细胞平均坏死率.结果:IL-18剂量为0μg/100 μL、0.25μg/100 μL、0.5μg/100 μL和1μg/100 μL时,瘤体重量分别为:(0.600 8±0.189 5)g、(0.247 8±0.047 3)g、(0.223 0±0.112 0)g和(0.169 0±0.112 1)g,抑瘤率分别为58.76%、62.88%和71.87%,治疗后2周,平均相对体积分别为12.028 9±1.575 2、6.831 5±2.514 8、5.502 9±1.443 6和4.126 4±1.881 2,光镜下可见治疗组中肿瘤细胞呈片状、条带状坏死,肿瘤组织细胞核碎裂、溶解,部分坏死组织呈均质红染无结构区域,镜下肿瘤细胞的平均坏死率分别为0.120 0±0.059 8、0.385 3±0.137 1、0.435 6±0.121 1和0.554 8±0.117 8.与对照组相比,卵巢癌生长的抑制作用和肿瘤细胞坏死率有显著性差异(P＜0.01),且随着IL-18剂量的增加,抑制作用越明显.结论:细胞因子IL-18能通过引起更多卵巢癌肿瘤细胞的坏死,从而有效地抑制卵巢癌的生长.
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“莲必治”并用生物、化学疗法抑制体内肿瘤生长的实验研究
目的：研究“莲必治”(LBZ)并用生物、化学疗法对体内肿瘤生长的抑制效应。方法：制备实体瘤型S180瘤小鼠模型，以注射PBS溶液为对照，观察“莲必治”与生物、化学疗法并用对肿瘤生长抑制的各项指标变化。结果：实验组对肿瘤生长均有一定的抑制作用。而其中以LBZ＋LAK实验组抑瘤效果为佳。结论：莲必治并用生物、化学疗法对体内肿瘤生长抑制有显著增强效应。
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阿片生长因子Met-ENK对多种肿瘤细胞的生长抑制作用研究
目的:研究阿片生长因子Met-ENK(methionine enkephalin,Met-ENK)对多种肿瘤细胞的抑制作用,分析其对不同肿瘤细胞系的抑制作用差异性及特点.方法:采用CCK-8法考察不同浓度Met-ENK对SH-SY5Y细胞的增殖抑制活性;采用细胞计数法计数相同浓度Met-ENK作用下,SHSY5Y细胞随时间的生长曲线;采用CCK-8法检测不同浓度的Met-ENK对8种不同的肿瘤细胞系细胞的抑制作用.结果:不同浓度的Met-ENK对SH-SY5Y细胞具有不同的抑制作用,IC50为5.1×10-5 mol/L;Met-ENK作用后SH-SY5Y在48 h生长抑制明显(P＜0.01);不同浓度的Met1ENK对8种不同的肿瘤细胞系细胞均有抑制作用,其中对SMCC-7721抑制作用为明显.结论:Met-ENK具有广谱抗肿瘤作用,但抑制强度不同,具有时间依赖性,其对8种不同的肿瘤细胞系细胞均有不同强度的抑制作用.
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P53反义RNA抑制肝癌生长的研究
目的:研究P53反义RNA对肝癌细胞中突变型P53致癌性的抑制效应,为肝细胞癌基因治疗提供新的方法.方法:2.1的人全长cDNA用EcorRⅠ和XbaⅠ的双酶切得到 1694bp长cDNA片段,反向插入哺乳动物表达载体PCR3.1,得到P53反义表达载体PCR3.1-P53(AS),并将其导入人肝细胞株Bel-7402(内源性突变型P53),采用MTT法和FCM方法测定PCR3.1-P53(AS)表达的P53反义RNA对Bel-74 02细胞生长的影响.结果:带有PCR3.1-P53(AS)的Bel-7402细胞,与对照组 Bel-7402细胞和带PCR3.1空载体的Bel-7402细胞比,增殖速度下降,FCM的结果也证明实验组细胞大部分受阻于G0/G1期,与细胞对照组及载体对照组有显著的差异.结论:P53反义RN A可有效地抑制肝细胞癌中突变型P53的致癌性,可用于肝细胞癌实验性基因治疗研究.
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康莱特注射液与化疗药合用对裸鼠移植人肺癌A549抑瘤作用的研究
目的比较康莱特注射液与几种化疗药合用对裸鼠移植人体肺癌A549的抑瘤增效作用.方法96只裸鼠皮下接种人体肺癌A549,7 d后成型随机盲法分为16组(n=6),按文中方案给抗肿瘤药,另设正常对照组(n=12).康莱特注射液组给药剂量分别为1.25 g/kg,2.5 g/kg,5.0 g/kg,自接种后第7天起连续给药10次,iv;顺铂(1.5/kg,3 mg/kg)和健择(30 mg/kg,60 mg/kg)在接种后10日1次腹腔给药,顺铂给药后4 h再给予健择;泰素帝(25 mg/kg)在接种后7日1次腹腔给药.接种后19日脱颈处死动物,称体重,解剖取瘤块,称瘤重,计算抑瘤率.结果康莱特注射液1.25、2.5、5.0g/kg 3个剂量分别合并顺铂(3 mg/kg)和健择(60mg/kg)对人体肺癌A549的生长有很强的抑制作用,抑瘤率高于康莱特注射液、顺铂和健择单独给药;康莱特注射液3个剂量分别合并顺铂(1.5 mg/kg)和健择(30 mg/kg)对人体肺癌A549的生长也有很强的抑制作用,抑瘤率不仅高于康莱特注射液、顺铂和健择单独给药,且有一定的协同作用;康莱特注射液3个剂量分别合并泰素帝(25 mg/kg)对人体肺癌A549的生长有明显的抑制作用,抑瘤率高于康莱特注射液、泰素帝单独给药.结论康莱特注射液与顺铂和健择或泰素帝联合用药可明显缩小肿瘤体积,有抑瘤增效的协同作用.
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阿帕替尼联合放疗对HeLa细胞Ki-67表达的影响及与生长抑制相关性研究
目的 探讨阿帕替尼联合放射治疗(简称放疗)对宫颈癌HeLa细胞Ki-67表达的影响,以及与肿瘤生长抑制率的相关性.方法 将建立的BALB/c-nu荷瘤鼠随机分为对照组、单纯放疗组和阿帕替尼联合放疗组(联合组).免疫组织化SP法检测Ki-67表达.结果 联合放疗组和放疗组Ki-67阳性表达率分别为(14.40±2.72)％和(66.78±5.01)％,较对照组的(92.83±4.04)％,分别降低84.49％和28.06％(P<0.05).联合组比放疗组降低78.44％(P<0.05).联合组和放疗组肿瘤体积分别为(1156.38±110.75)mm3和(1641.60±153.15)mm3,较对照组的(2437.03±223.16)mm3,分别缩小52.55％和32.64％(P<0.05),联合放疗组比放疗组缩小29.56％(P<0.05).联合放疗组肿瘤生长抑制率(TGIR)为57.00％,显著高于放疗组的34.83％(P<0.05).结论 阿帕替尼联合放疗可明显抑制宫颈癌Ki-67阳性表达率,提高肿瘤生长抑制率.建议其可用于Ki-67高表达率的宫颈癌患者.
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HSP65-PSA融合蛋白的体内外抗肿瘤活性研究
目的:研究热休克蛋白65(HSP65)-前列腺特异性抗原融合蛋白在体外对人树突状细胞的活化作用以及在小鼠体内抑制PSA阳性肿瘤细胞生长的作用.方法:利用Westernblot方法对融合蛋白HSP65-PSA的特异性进行鉴定;利用共聚焦显微镜、流式细胞术(FCM)检测和斑点杂交的方法对PcDNA3-GFP-PSA稳定转染的B16细胞进行鉴定;用HSP65-PSA融合蛋白刺激来自于人外周血的未成熟树突状细胞,观察融合蛋白对树突状细胞的体外活化作用;用PcDNA3-GFP-PSA稳定转染的B16细胞种植C57BL/6小鼠,继而用HSP65-PSA融合蛋白来免疫小鼠以观察融合蛋白对PSA阳性B16肿瘤细胞生长的体内抑制作用.结果:Western blot检测显示融合蛋白HSP65-PSA具有PSA蛋白特异性.共聚焦显微镜、FCM检测和斑点杂交结果均显示PcDNA3-GFP-PSA转染的B16细胞转染情况良好.体外细胞实验显示,将HSP65-PSA融合蛋白作用于人外周血树突状细胞后可以明显促进树突状细胞表面分子CD86的表达,其上调率为52.93%.动物体内实验显示,HSP65-PSA融合蛋白可以明显抑制PSA阳性B16肿瘤细胞在小鼠体内的生长.10 μg蛋白免疫组的肿瘤体积(4.91±5.21)与对照组(10.56±6.10)相比差异有统计学意义(P<0.05).结论:HSP65-PSA融合蛋白可以在体外活化树突状细胞,在小鼠体内抑制PSA阳性B16肿瘤细胞的生长.HSP65-PSA融合蛋白可能具有应用于PSA阳性肿瘤的免疫治疗作用.
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人Smad3的shRNA表达载体构建和鉴定
目的:构建人Smad3的shRNA表达载体,运用RNAi下调Smad3基因在肿瘤细胞系中的表达,观察对肿瘤细胞生长的影响. 方法:化学合成针对人Smad3基因的dsRNA,瞬时转染入Hela细胞,检测RNA干扰效果,筛选有效干扰靶位点;设计并合成针对人Smad3基因的siRNA寡核苷酸链,经退火形成双链后克隆入质粒载体pSilencerTM3.1-H1 hygro,转染入Hela细胞,用hygromycin B筛选稳定单克隆细胞株,对细胞株行RT-PCR和Western Blot检测,观察siRNA对靶基因的抑制效果,进一步研究下调目的分子表达水平以后肿瘤细胞生长的变化. 结果:瞬时转染筛选到了有效的RNA干扰靶位点,构建载体后,建立稳定转染的单克隆细胞株,Smad3 mRNA和蛋白质水平均显著下调,导致肿瘤细胞生长抑制. 结论:成功构建了针对人Smad3高效、特异、作用持久的shRNA表达载体,转染细胞后可下调Smad3的表达,为进一步研究Smad3的功能和肿瘤的基因治疗奠定了基础.
