首页 > 文献资料
-
含饱和氢气HC-A肾保存液减轻大鼠肾脏冷缺血再灌注损伤的研究
目的:研究含饱和氢气的HC-A肾保存液对大鼠肾脏冷缺血再灌注损伤的影响.方法:健康雄性Wistar大鼠24只随机分为3组(n=8).H1组大鼠仅接受右肾切除；H2组大鼠为冷缺血再灌注模型,以腹主动脉插管和下腔静脉缺口作为灌注和流出通路,用4℃普通HC-A肾保存液对左肾行原位冷灌注,灌注完成后阻断左肾动、静脉,缝合腹主动脉和下腔静脉缺口.阻断45min后移除血管夹,冲洗腹腔后关腹；H3组仅灌注液换用自制的4℃含饱和氢气的HC-A肾保存液,其它处理同H2组.3组大鼠均于24h后再次手术,取血标本,测定BUN和Cr浓度,评估肾功能.切取左肾,检测肾组织中MDA的水平和SOD、caspase-3的活性,并在光镜下观察肾组织形态学的改变.结果:与H2组相比,H3组BUN、Cr、MDA的水平和caspase-3活性降低(P＜0.05),SOD活性升高(P＜0.05).光镜下,H3组肾组织病理损伤较H2组减轻.结论:含饱和氢气的肾保存液能减轻大鼠肾脏冷缺血再灌注损伤.
-
PI3K/Akt信号通路介导莱菔硫烷预处理对大鼠供心冷缺血再灌注损伤的影响
目的:探讨脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt)信号通路介导莱菔硫烷(SFN)预处理对大鼠心肌冷缺血再灌注损伤(IRI)的作用,阐明其作用机制.方法:64只健康雄性SD大鼠随机分为冷IRI组、SFN组、LY(PI3K抑制剂)+冷IRI组和LY+ SFN组,每组供、受体各8只.将冷藏于组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液(HTK液)9h供心移植到受体大鼠的腹腔,建立同种大鼠异体异位心脏移植模型,术后24 h取供心心肌组织,采用苏木精-伊红(HE)染色观察心肌组织形态表现,免疫组织化学法和Western blotting法检测心肌组织中丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶,即蛋白激酶B (Akt)、磷酸化Akt (p-Akt)、Bax、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)的蛋白表达水平.结果:心肌组织形态表现,冷IRI组和LY+冷IRI组大鼠心肌组织损伤严重,SFN组心肌组织损伤轻,LY+ SFN组心肌组织损伤介于冷IRI组和SFN组之间.免疫组织化学法和Westernblotting法,与冷IRI组比较,SFN组p-Akt蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),Bcl-2蛋白表达水平升高(P＜0.05),而Bax蛋白表达水平降低(P＜0.05);应用阻滞剂LY294002后,与LY+冷IRI组比较,LY+ SFN组p-Akt蛋白表达水平差异无统计学意义(P＞0.05),但Bcl-2蛋白表达水平仍升高(P＜0.05),Bax蛋白表达水平仍降低(P＜0.05),Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.05).结论:SFN可能通过PI3K/Akt信号通路减轻心脏移植心肌冷IRI.
关键词： PI3K/Akt通路 莱菔硫烷 心脏移植 冷缺血再灌注损伤 细胞凋亡 -
一氧化氮合酶在N-乙酰半胱氨酸调控大鼠心肌冷缺血-再灌注损伤中的变化
目的:观察一氧化氮合酶(NOS)在N-乙酰半胱氨酸(NAC)调控大鼠心肌冷缺血-再灌注损伤中的变化. 方法:将健康雄性Lewis大鼠60只随机分为3组.(1)对照组:摘取供心前30 min,经供体大鼠下腔静脉注射生理盐水0.5 mL;(2)供体预处理组:摘取供心前30 min,经供体大鼠下腔静脉注射NAC 300 mg/kg,受体大鼠不作预处理;(3)受体预处理组:移植前30 min,经受体大鼠下腔静脉注射NAC 300 mg/kg,供体大鼠不作预处理.将冷藏于4℃HTK液18h的供心移植至受体大鼠腹腔,建立同种异体心脏移植模型.于再灌注24 h后取供心采用免疫组化方法检测诱导型一氧化氮合酶/内皮型一氧化氮合酶(iNOS/eNOS)蛋白表达水平,以免疫组化评分(IHS)表示.采用Real time-PCR法检测iNOS/eNOS mRNA表达. 结果:与对照组相比,供、受体预处理组的iNOS蛋白表达降低,IHS评分分别为3.00±0.15、1.50±0.22、1.63±0.26,P＜0.05;而eNOS蛋白表达升高,IHS评分分别为2.00±0.21,3.60±0.16,3.40±0.26,P＜0.05.与对照组相比,受体预处理组iNOS mRNA表达降低(0.43±0.17对1.00±0.41,P＜0.05),供体预处理组eNOS mRNA表达升高(3.06±1.47对1.00±0.65,P＜0.05). 结论:NOS参与了NAC预处理减轻移植大鼠心肌缺血-再灌注损伤的过程.
-
高压干燥保存对小鼠供心冷缺血再灌注损伤中自噬及凋亡作用的影响
目的：心脏移植是治疗终末期心脏病的有效手段，延长供心保存时间有助于解决供心紧缺的问题，文中旨在通过观察一氧化碳和氧气的高压干燥保存是否能够延长供心保存时间及其作用机制。方法选取SPF级C57BL／6雄性小鼠共84只，将4～6周龄48只供鼠随机分成4组（ n＝12）：对照组（仅取供体心，不做移植）、即刻移植供体组（供心不经保存取下后即刻移植）、组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液（ histidine-tryptophan-ketoglutarate solution， HTK）保存供体组（供心浸泡于HTK液中24 h）及高压干燥保存供体组[供心悬挂并置于高压气体罐中（氧分压：3200 hPa，一氧化碳分压：800 hPa），保存24 h]。将6～8周龄36只受鼠随机分为3组（n＝12）：即刻移植受体组、HTK保存受体组及高压干燥保存受体组。将各供体组的供心分别对应移植于各受体组，移植后2 h，对比观察各受体组复跳情况及供心功能。取对照组及各移植受体组供心组织， HE染色观察供心病理学改变，Tunnel染色观察心肌细胞凋亡情况，Western blot检测自噬标志性蛋白LC3-Ⅱ及Bcl-2蛋白表达情况。结果即刻移植受体组与高压干燥保存受体组复跳率高于HTK保存受体组（P＜0．05）。高压干燥保存受体组、HTK保存受体组、即刻移植受体组移植后2h供心功能评分分别为[2．5（2．0～2．9）、0．8（0．5～1．0）、4．5（4．0～4．5）分]，组间两两比较差异均有统计学意义（P＜0．05）。高压干燥保存受体组LC3-Ⅱ蛋白及Bcl-2蛋白表达量为（2．06±0．29、0．87±0．18）、即刻移植受体组为（1．24±0．20、2．07±0．32），均高于对照组（0．13±0．03、0．19±0．02）与HTK保存受体组（0．16±0．06、0．26±0．08），差异有统计学意义（P＜0．05）。 HTK保存受体组Bcl-2蛋白表达量高于对照组（P＜0．05）。高压干燥保存受体组LC 3-Ⅱ蛋白低于即刻移植受体组（P＜0．05）。 HE染色结果显示：高压干燥保存受体组供心心肌细胞水肿、炎症细胞浸润等组织变化情况较对照组、即刻移植受体组明显，但较HTK保存受体组轻。与对照组、即刻移植受体组凋亡细胞指数[（1．08±05．6）、（2．13±1．71）％]比较，高压干燥保存受体组、HTK保存受体组[（5．04±1．77）、（26．72±5．23）％]升高（P＜0．01），而高压干燥保存受体组凋亡指数较HTK保存受体组降低（P＜0．01）。结论一氧化碳和氧气的高压干燥环境中可减轻小鼠供心冷缺血再灌注损伤，其机制可能与促进自噬，为细胞提供能量，抑制心肌细胞凋亡有关。
-
自体脂肪间充质干细胞对大鼠肾冷缺血再灌注损伤的保护作用
目的 观察大鼠自体脂肪间充质干细胞(ADSCs)移植对肾冷缺血再灌注损伤(IRI)的保护作用.方法 将24只成年雄性Wistar大鼠随机分为3组:A组(假手术组)、B组(肾冷IRI组)、C组(肾冷IRI +ADSCs组):冷IRI即刻肾内注射剂量为2×106个的自体ADSCs,冷IRI后6h经阴茎静脉注射相同剂量自体ADSCs.再灌注24h处死大鼠观察.结果 C组再灌注24 h血清肌酐水平[(112.1±14.1)μmol/L]与B组[(169.5 ±17.5) μmol/L]比较显著降低,差异有统计学意义(P=0.001);光镜下观察C组的肾脏组织病理学改变较B组明显减轻;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分析显示C组肾组织Fas mRNA表达水平(0.93±0.05)较B组(1.04±0.08)显著降低,差异有统计学意义(P =0.012),C组肾组织血红素氧合酶-1(HO-1) mRNA表达水平(0.35±0.03)较B组(0.24±0.05)显著增高,差异有统计学意义(P =0.001).结论 自体ADSCs移植通过抑制肾细胞凋亡及减轻氧化应激来保护大鼠肾冷IRI.
-
Akt/GSK-3β通路介导调控莱菔硫烷减轻心脏移植缺血再灌注损伤的研究
目的 探讨蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶-3β(GSK-3β)信号通路对莱菔硫烷(SFN)预处理减轻大鼠心肌冷缺血再灌注损伤(IRI)的作用机制.方法 64例健康雄性SD大鼠随机分为4组:IRI组、SFN组、阻滞剂LY294002+IRI(LY+IRI)组、阻滞剂LY294002+SFN预处理(LY+SFN)组,将冷藏于心肌保护液(组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐液)9h的供体心脏移植到受体大鼠的腹腔,复制同种大鼠异体异位心脏移植模型,术后24 h取供体心脏心肌组织,采用免疫组织化学法(IHC)和Western blot检测Akt、磷酸化Akt(p-Akt)、GSK-3β、磷酸化GSK-3β(p-GSK-3β)蛋白的表达.结果 IHC法和Western bolt检测各种蛋白结果显示,与IRI组比较,SFN组p-Akt和p-GSK-3β蛋白表达升高(P<0.05).应用阻滞剂LY294002后,SFN+LY组与LY+IRI组的p-Akt和p-GSK-3β蛋白表达比较,差异无统计学意义(P>0.05).结论 SFN能通过Akt/GSK-3β信号通路减轻心脏移植心肌冷缺血再灌注损伤.
-
高压干燥保存对小鼠供心冷缺血再灌注损伤的影响
目的 观察氧气(oxygen,O2)及一氧化碳(carbon monoxide,CO)混合高压气体干燥保存方法对小鼠离体供心冷缺血再灌注损伤的影响.方法 采用C57BL/6雄性小鼠,建立同系小鼠心脏颈部异位移植模型.4～6周龄供体鼠48只,数字表法随机分为4组(n=12):空白对照组(A组)、即刻移植组(B组)、组氨酸-色氨酸-酮戊二酸盐(histidine-tryptophan-ketoglutarate solution,HTK)液保存组(C组)及高压干燥保存组(D组).6～8周龄小鼠36只,数字表法随机分为3组,即刻移植受体组、HTK受体组及高压干燥受体组(n=12).供心处理如下:A组仅取供体心,不做移植;B组供心不经保存取下后即刻移植;C组供心浸泡于HTK液中;D组供心悬挂并置于高压气体罐中(PO2:3.2× 101.3 kPa+PCO:0.8× 101.3 kPa=4×101.3 kPa).C、D两组供心均于4℃冰箱中保存24 h后,分别移植于受体组小鼠颈部.移植后2h,对比观察B、C、D三组复跳情况及供心功能.移植后24 h,检测受体鼠血清心功酶变化;取各组供心组织,分别采用苏木素-伊红(HE)染色、Tunnel染色及行蛋白免疫印迹(Western-blot,WB)检测,对比观察供心病理学改变、心肌细胞凋亡及B细胞淋巴瘤/白血病-2 (B cell lymphoma/leukemia-2,bcl-2)蛋白表达情况.结果 B组10只供心复跳,C组2只供心复跳,D组9只供心复跳,3组间复跳率比较,差异有统计学意义[83.3％(10/12)vs.16.7％(2/12)vs.75.0％(9/12),P=0.0015];其中D组复跳率低于B组,但明显高于C组,差异有统计学意义(P＜0.0125).移植2h后B、C、D组间供心功能评分比较,差异有统计学意义(5vs.0 vs.3,P＜0.01),两两比较差异有统计学意义(P＜0.05).4组间血清肌钙蛋白Ⅰ (troponin Ⅰ,TnⅠ)浓度比较,差异有统计学意义(P＜0.001),D组高于A、B两组,但低于C组(P＜0.001).苏木素伊红染色结果显示D组细胞水肿、炎症细胞浸润等组织变化情况较A、B两组明显,但较C组轻.Tunnel染色结果显示D组心肌细胞凋亡较A、B两组明显,但少于C组,差异有统计学意义(P＜0.01).Western-blot结果显示D组bcl-2的表达上调,高于其余3组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 高压干燥保存可减轻离体供心冷缺血再灌注损伤,维持供心活力,有效延长供心保存时间.
关键词： 高压干燥 离体供心保存 冷缺血再灌注损伤 B细胞淋巴瘤/白血病-2 凋亡 -
莱菔硫烷预处理对大鼠移植心脏冷缺血再灌注损伤的影响
目的:观察莱菔硫烷(sulforaphane,SFN)对大鼠移植心脏冷缺血再灌注损伤的影响.方法:健康雄性Lewis大鼠60只随机分成3组,每组20只.对照组:受体大鼠于移植前24h经鼠尾静脉注射等量的生理盐水;NAC组:受体大鼠于移植前半小时经下腔静脉注射N-乙酰半胱氨酸(N-acetylcysteine,NAC) 300 mg/kg;SFN组:受体大鼠于移植前24 h经尾静脉注射SFN 2.5 mg/kg.其中供心冷藏于4℃HTK液18h,建立大鼠心脏移植模型.采用半定量法评价心脏功能,再灌注后6、24 h分别从受体鼠内眦静脉和下腔静脉取血,检测血清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、肌酸激酶同工酶(creatinekinase-MB,CK-MB)、肌钙蛋白(troponin T,TnT)的水平;移植后24h摘取供心,观察心肌组织学及超微结构的变化,检测心肌组织中超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性及脂质过氧化物(lipid hydroperoxide,LPO)含量.结果;心脏功能评分SFN组、NAC组较对照组均明显提高(P＜0.05);再灌注6h,与对照组相比,NAC组血清中LDH、CK-MB和TnT的活性均降低(P＜0.05).SFN组血清中LDH、CK-MB和TnT的活性均降低(P＜0.05);再灌注24 h,NAC组LDH和TnT的活性亦均降低(P＜0.05),CK-MB的活性未见明显变化,SFN组血清中CK-MB和TnT的活性亦均降低(P＜0.05);NAC组和SFN组心肌组织学及超微结构的损伤程度均较对照组明显减轻;与对照组相比,NAC组心肌组织SOD活性及SOD/LPO比值明显升高(P＜0.05),LPO含量未见明显变化(P＞0.05);SFN组供心心肌组织LPO含量显著降低(P＜0.05),SOD活性未见明显变化,SOD/LPO明显提高(P＜0.01).结论:SFN能保护移植心脏,其机制可能与其诱导Ⅱ期酶产生,提高心肌细胞对氧化应激的防御能力,减少自由基对心肌的氧化损伤有关.
