首页 > 文献资料
-
黄芪注射液对肺纤维化小鼠肺组织上皮-间质转分化的影响
目的 观察黄芪注射液对肺纤维化小鼠肺组织上皮-间质转分化(EMT)的影响,研究其对肺泡上皮细胞EMT过程的干预作用及可能机制.方法 将30只实验小鼠随机平均为纤维化组、黄芪组、PBS对照组.纤维化组小鼠气管内灌注博莱霉素3 mg/kg;PBS对照组小鼠于气管灌注等量PBS;黄芪组小鼠给予气管灌注博莱霉素3 mg/kg,并且于实验造模后10d腹腔注射黄芪注射液5 mL/kg,连续给药2周.实验第24天处死小鼠,肺组织切片行Masson染色观察肺组织病理改变,碱裂解法检测肺组织中羟脯氨酸(HYP)含量,ELISA法检测小鼠血清肿瘤坏死因子d (TNF-α)和转化生长因子-β1(TGF-β1)水平,Western blot法检测肺组织中上皮细胞标志物E-cadherin和间质细胞标志物α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达量.结果 与纤维化组比较,黄芪组小鼠肺组织肺纤维化病理损伤明显减轻,胶原沉积减少;黄芪组小鼠肺组织中HYP含量和α-SMA蛋白表达量均明显低于纤维化组(P均＜0.05),E-cadherin蛋白表达量明显高于纤维化组(P＜0.05);黄芪组血清TNF-α和TGF-β1水平均明显低于纤维化组(P均＜0.05).结论 黄芪注射液能下调TNF-α和TGF-β1表达,抑制肺泡上皮细胞EMT现象,从而改善博来霉素诱导的小鼠肺纤维化病理改变.
-
虫草素通过下调TGF-β抑制高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化
目的：探讨虫草素对高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响。方法：体外培养大鼠近端肾小管上皮细胞株(NRK52E细胞株),分为正常对照组(葡萄糖5.5 mmol/L,NG组)、高糖组(葡萄糖30 mmol/L,HG组)、高糖+虫草素组(葡萄糖30 mmol/L+虫草素10μg/ml,HG+C组)。分别于刺激12 h,24 h,48 h后收集细胞。应用定量RT-PCR测定NRK52E TGF-β,E-cadherin,α-SMA mRNA的表达；Western印迹方法检测TGF-β、E-cadherin、α-SMA蛋白的表达。结果：高糖刺激后NRK52E细胞的TGF-β和α-SMA mRNA及蛋白表达明显高于正常糖组(P<0.01),而虫草素组TGF-β和α-SMA mRNA及蛋白表达显著低于高糖组(P<0.05)；高糖诱导的NRK52E细胞E-cadherin mRNA及蛋白水平明显降低(P<0.01)；而虫草素组NRK52E细胞E-cadherin mRNA及蛋白水平显著高于高糖组(P<0.05)。结论：虫草素可以明显抑制高糖诱导的大鼠肾小管上皮细胞转分化,其机制可能是通过下调TGF-β实现。
-
STZ诱导的糖尿病模型小鼠肾脏的上皮-间质转分化研究
目的:探讨STZ诱导的糖尿病小鼠肾脏发生上皮-间质转分化(EMT)的情况.方法:将80只C57BL小鼠随机分为正常对照组(NC组)和糖尿病组(DM组),每组40只.DM组小鼠用1％STZ(streptozotocin,链脲佐菌素)溶液按60mg/kg体质量的剂量进行腹腔注射,每天1次,连续6天.NC组小鼠平行腹腔注射同等体积0.1mol/L的柠檬酸钠缓冲液.再将成模小鼠随机分为A、B批次,A批次用于动态观察生存率、小鼠体质量及随机血糖的监测;B批次用于在造模后第4、8、12周末观察肾组织的病理变化,并用Western blot、免疫荧光染色的方法观察肾组织中EMT标志蛋白α-SMA和E-cadherin的表达.结果:STZ诱导的糖尿病模型小鼠出现糖尿病典型症状如多饮、多尿等,血糖持续在高水平状态,体质量增长缓慢.在造模后12周末,DM组小鼠较NC组小鼠累积生存率显著降低,两组比较差异具有统计学意义(P＜0.001).在造模后的第8周末,DM组小鼠肾脏出现明显的病理改变,到第12周末时,绝大部分肾小管上皮细胞被梭形的肌成纤维细胞取代,肾小球空泡,基底膜增厚.造模后的第4、8、12周末时,DM组小鼠E-cadherin表达量均显著低于NC组小鼠(P=0.004,0.026,0.004);而在第8和12周末时,DM组α-SMA表达量显著升高(P=0.009,0.015).在第12周末,肾组织冰冻切片E-cadherin和α-SMA、免疫荧光染色结果与上述结果一致.结论:STZ诱导的糖尿病模型小鼠有较典型的糖尿病临床改变,且肾组织发生了EMT.
-
高浓度葡萄糖诱导人晶状体上皮细胞发生EMT
目的:观察高浓度葡萄糖诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT).方法:将人晶状体上皮细胞HLE-B3系分别培养在正常葡萄糖浓度(5.5 mmol/L)DMEM培养基和高浓度葡萄糖(35.5 mmol/L)的DMEM培养基中24小时,于培养的0h、3h、6h、12h、24h在倒置显微镜下观察细胞形态学变化,采用免疫荧光染色检测晶状体上皮细胞中EMT相关蛋白E-cadherin及α-SMA的表达变化.结果:与正常糖浓度组相比,随着时间的延长高糖组细胞逐渐丢失上皮细胞形态,细胞变细、变长,向纤维细胞的形态转变;同时随着时间的延长,高糖组晶状体上皮细胞中E-cadherin染色的荧光强度在各时间点均低于正常糖浓度组,而α-SMA的荧光强度却明显高于正常糖浓度组,在6h和12h时差异显著,有统计学意义(P＜0.01).结论:高浓度葡萄糖诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化.
-
转化生长因子β1对肠道上皮-间质转分化影响的体外研究
目的 通过体外实验探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对肠道上皮-间质转分化(EMT)的影响.方法 以浓度为10 ng/ml的TGF-β1刺激肠道上皮细胞株DLD 1,分别在24、48或72 h时,提取细胞总RNA和总蛋白;分别用real-time PCR和Western-blot法检测细胞E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(vimentin)、纤维连接蛋白(fibronectin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)在mRNA和蛋白水平的表达变化.结果 TGF-β1刺激后各个时间点E-cadherin表达显著下降,而N-cadherin、vimentin、fibronectin、α-SMA的表达则明显上调,差异均有统计学意义(P ＜ 0.05).结论 TGF-β1可促进肠上皮细胞EMT过程,可能参与肠道纤维化发病机制.
-
桑黄不同提取物对TGF-β1诱导的大鼠肾小管上皮细胞-间充质转分化的影响
目的 探讨桑黄不同提取物对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的大鼠肾小管上皮细胞(NRK-52E)表型转分化(EMT)的影响.方法 体外培养NRK-52E细胞,分别添加不同浓度(1.562、3.125、6.25、12.5、25、50、100、200和400μg/ml)的桑黄醇提物(PA)、水提物(PW)和多糖(PP)刺激,CCK-8法检测桑黄不同提取物对NRK-52E细胞活力的影响.随后将NRK-52E细胞随机分为正常组、TGF-β1诱导组(10ng/ml TGF-β1)、PA干预组(10ng/ml TGF-β1+100μg/ml PA)、PW干预组(10ng/ml TGF-β1+200μg/ml PW)和PP干预组(10ng/ml TGF-β1+200μg/ml PP).采用实时荧光定量聚合酶链反应(RT-PCR)法检测NRK-52E中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、α-平滑肌蛋白(α-SMA)和骨架蛋白desmin mRNA表达水平的变化.结果 与正常组相比,TGF-β1诱导组中E-cadherin的表达显著下调(P<0.01),α-SMA和desmin的表达显著上调(P<0.01).与TGF-β1组比较,PA、PW和PP干预组中E-cadherin的表达明显增强(P<0.01或P<0.05),而α-SMA和desmin的表达则明显减弱(P<0.01或P<0.05).结论 PA、PW和PP均可抑制TGF-β1诱导的EMT的发生,提示桑黄可能对肾小管上皮细胞起保护作用.
-
沙利度胺对肺泡上皮细胞上皮-间质转分化的作用
目的：探讨沙利度胺对A549上皮-间质转分化的作用,阐明其抗肺纤维化的机理。方法A549细胞分为3组,A：对照组；B：TGF-β1+DMSO组；C：TGF-β1+沙利度胺组。通过免疫印迹法检测A549细胞磷酸化p38 MAPK和JNK的蛋白,以及间质表型蛋白和上皮表型蛋白的表达；实时荧光定量PCR方法检测A549细胞p38 MAPK和JNK mRNA的表达。结果沙利度胺显著抑制( P<0．05) TGF-β1诱导的A549细胞间质表型蛋白表达增加,可阻止(P<0．05)A549细胞上皮表型蛋白表达的减少,显著减少活性MAPK蛋白及mRNA的表达(P<0．05)。结论沙利度胺可能通过p38MAPK 和 JNK信号通道,从而抑制肺泡上皮细胞的上皮-间质转分化过程而发挥抗纤维化作用。
-
红花黄色素对TGF-β1诱导的人肺泡上皮A549细胞转分化的抑制作用及其信号转导机制研究
目的:通过体外培养人肺泡上皮细胞A549,用TGF-β1刺激其发生上皮-间质转化,运用现代分子生物学和超微病理学实验技术,探讨红花黄色素在防治肺间质纤维化上皮间质转化中的干预作用及机制.方法:将正常培养的人肺泡上皮细胞A549分6组:正常对照组、TGF-β1诱导组(TGF-β1终浓度为5ng/ml,诱导24h)、地塞米松组(地塞米松2μg/mL)、红花黄色素低、中、高3个剂量干预组(红花黄色素25μg/mL+TGF-β1 5ng/mL、红花黄色素中剂量组红花黄色素50μg/mL+TGF-β1 5ng/mL、红花黄色素高剂量组红花黄色素75μg/mL+TGF-β1 5ng/mL).TGF-β1 5ng/L干预A549细胞生长24h,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测不同剂量红花黄色素作用于TGF-β1刺激A549细胞后其发生上皮-间质转化后各组的吸光值(OD值),计算其增殖活性,绘制细胞增殖曲线.采用倒置显微镜观察各组细胞的生长状态与形态变化.结果:(1)MTT检测结果显示:与正常对照组相比较,TGF-β1诱导组细胞活力略高,差异具有统计学意义(P<0.05);红花黄色素中药干预组细胞的增殖活力下降,与正常对照组和TGF-β1诱导组相比较,差异有统计学意义(P<0.05).(2)倒置显微镜观察显示:经过TGF-β1刺激后,A549细胞由正常的铺路石样贴壁生长呈现出间质细胞的特征,呈明显的拉长状态,由鹅卵石状转变为纺锤型或梭型,出现伪足样改变,藤索样生长,类似于成纤维细胞,且细胞之间间隙增大.结论:通过观察红花黄色素各剂量组发现,细胞的形态逐渐接近正常的A549细胞,视野内细胞的数目按一定的剂量效应关系减少.
-
转化生长因子-β2(TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达及意义
目的 探究转化生长因子-β2(transforming growth factor-β2,TGF-β2)诱导人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelial,RPE)层细胞上皮-间质转分化中miRNA-29b的表达变化及意义.方法 使用不同浓度TGF-β2刺激RPE细胞上皮-间质转分化后,倒置相差显微镜观察细胞形态变化,Western blot、RT-PCR检测成纤维化相关分子纤维连接蛋白(fibronection,FN)、神经钙粘连蛋白(nerve calcium adhesion protein,N-Cadherin)的表达.采用RT-PCR检测不同浓度TGF-β2及不同时间TGF-β2(5μg·L-1)刺激RPE细胞后miRNA-29b的表达.结果 TGF-β2刺激后的RPE细胞形态呈纤维化改变.在一定浓度范围内(1μg·L-1、5μg·L-1、10 μg· L-1),随着TGF-β2浓度的增加FN、N-Cadherin及相应mRNA随之增加,1μg·L-1、5μg·L-1、10μg · L-1组与对照组(0 μg· L-1)相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.01).TGF-β2在一定浓度范围内(0μg· L-1、1μg·L-1、5 μg· L-1)以剂量依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,1μg·L-1、5μg·L-1、10μg·L-1组与对照组(0μg·L-1)相比,差异均有统计学意义(均为P＜0.01),在TGF-β2浓度为5μg·L-1时miRNA-29b表达量低.TGF-β2在一定时间范围内(0h、3h、6h、12 h)以时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b表达的降低,3h、6h、12 h、24 h、48 h组与0h相比差异均有统计学意义(均为P＜0.05).结论 一定范围内TGF-β2以剂量和时间依赖的方式诱导RPE细胞miRNA-29b的表达,为进一步研究miRNA-29b与TGF-β2在RPE细胞上皮-间质转分化过程中的相互作用提供理论基础.
-
miRNA-184在TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化中的表达
目的 研究miRNA-184(miR-184)在转化生长因子β 2(transforming growth factor β2,TGF-β2)诱导人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化过程中的表达及意义.方法 应用不同浓度(0 μg·L-1、1 μg·L-1、5μg·L-1、10 μg·L-1、15μg·L-1)TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化,细胞免疫荧光和Western blot方法观察转分化相关分子波形蛋白(Vimentin)、钙黏附蛋白E(E-Cadherin)的表达;应用qRT-PCR检测miR-184在不同浓度(0 μg· L-1、1 μg·L-1、5 μg· L-1、10 μg·L-1、15 μg·L-1)TGF-β2、不同作用时间(0h、6h、12h、24 h、48 h) TGF-β2(10 μg·L-1)诱导人晶状体上皮细胞转分化中的表达变化.结果 随着TGF-β2浓度的增加,细胞胞浆中Vimentin荧光强度增强;E-Cadherin 蛋白表达逐渐减少,各组细胞间E-Cadherin表达量差异有统计学意义(F=87.617,P＜0.01);Vimentin蛋白表达逐渐增加,各组细胞间Vimentin表达量差异有统计学意义(F=68.923,P＜0.01).随着TGF-β2浓度的增加,细胞中miR-184相对表达量增多,在10 μg·L-1 TGF-β2诱导组达到峰值;随着TGF-β2诱导时间的延长,细胞中miR-184相对表达量增加,在24 h表达达到峰值.结论 TGF-β2诱导人晶状体上皮细胞发生上皮-间质转分化时细胞内miR-184表达增加,并与诱导浓度和时间有关,为进一步研究miR-184在人晶状体上皮细胞上皮-间质转分化中的作用及机制提供实验基础.
-
去整合素Echistatin对糖尿病兔后发性白内障模型中晶状体上皮细胞间质转分化及胶原合成的影响
目的 观察去整合素Echistatin对糖尿病兔晶状体摘出术后后囊膜混浊(posterior capsular opacification,PCO)的影响,探讨Echistatin对晶状体上皮细胞(lens epithelial cells,LEC)间质转分化及胶原合成的抑制作用.方法 应用四氧嘧啶耳缘静脉注射建立糖尿病兔模型,随机分组并行晶状体摘出术,术毕前房分别注入0.2 mL高压灭菌蒸馏水(对照组),7.5 mg·L-1Echistatin(7.5 mg·L-1组)、10.0 mg·L-1Echistatin(10.0 mg·L-1组),每组又分为10d和6周2个时间点(n=4).裂隙灯显微镜观察各组糖尿病兔术后10 d和6周PCO分级情况,同时摘取术眼应用RT-PCR法检测晶状体后囊膜上α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)和Ⅳ型胶原mRNA表达情况.结果 术后10 d,各组间α-SMA mRNA和Ⅳ型胶原mRNA表达差异均无统计学意义(均为P＞0.05).术后6周,Echistatin干预组PCO分级均明显低于对照组(P=0.024);7.5 mg·L-1Echistation组α-SMA mRNA表达为3.97±0.76,对照组为9.06±3.40,10.0 mg·L-1组为6.80±3.15,7.5 mg·L-1组明显低于其余两组(P =0.002、0.024);Ⅳ型胶原mRNA表达对照组为30.88±20.13,7.5 mg·L-1组为8.62±6.99,10.0 mg·L-1组为5.76±6.73,Echistatin干预组Ⅳ型胶原mRNA表达均低于对照组(P =0.005、0.002).结论 去整合素Echistatin对糖尿病兔晶状体摘出术后PCO的发生和发展有一定的抑制作用,可能与其抑制晶状体后囊膜上α-SMA和Ⅳ型胶原的mRNA表达有关.
-
长链非编码RNA-MIAT在转化生长因子β2诱导的晶状体上皮-间质转化中的作用
目的 探讨长链非编码RNA(LncRNA)-心肌梗死相关转录物(MIAT)在转化生长因子β2(TGF-β2)诱导的晶状体上皮细胞(LECs)纤维化过程中的作用及其对后发性白内障形成的影响. 方法 对LECs永生系SRA01/04细胞进行培养,将培养的细胞分为正常对照组和TGF-β2组,分别用DMEM培养液和含10 ng/ml TGF-β2DMEM培养液培养48 h,光学显微镜下观察TGF-β2诱导的各组细胞形态学变化,采用实时荧光定量PCR及Western blot法检测细胞中MIAT及上皮-间质转化(EMT)相关标志物E-钙黏素(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和胶原蛋白Ⅰ(Coll Ⅰ)蛋白及其mRNA相对表达量变化;分别用siRNA空载体和siRNA-MIAT转染DMEM培养的(siNRA空载体组、siRNA-MIAT转染组)或用含10 ng/ml TGF-β2 DMEM培养的(siNRA+TGF-β2组、siRNA-MIAT+TGF-β2组)SRA01/04细胞48 h,光学显微镜下观察各组细胞形态学变化,采用实时荧光定量PCR及Western blot法分别检测细胞中MIAT、E-cad、α-SMA、Coll I蛋白及其mRNA的表达变化.结果 正常对照组培养细胞呈圆形和多角形,TGF-β2诱导组细胞呈长梭形.与正常对照组比较,TGF-β2诱导组细胞中MIAT mRNA、α-SMA mRNA和CollⅠ mRNA相对表达量明显升高(2.497±0.644 vs.0.827±0.062;2.951 ±0.146 vs.1.085±0.517;2.115±0.090vs.1.002±0.088),而E-Cad mRNA相对表达量明显下降(0.102±0.027 vs.1.020±0.262),差异均有统计学意义(P=0.045、0.004、0.000、0.025),上述因子的蛋白水平表达趋势与mRNA相同.与siRNA空载体组比较,siRNA-MIAT转染组均能明显下降细胞内MIAT含量,差异均有统计学意义(均P＜0.05).与siRNA +TGF-β2组比较,siRNA-MIAT+TGF-β2组细胞中α-SMA、CollⅠ蛋白及其mRNA相对表达量均明显下降,差异均有统计学意义(均P＜0.01),E-cad蛋白及其mRNA相对表达量明显增加,差异有统计学意义(P=0.008、0.000). 结论 MIAT参与TGF-β2诱导的SRA01/04细胞EMT过程,下调MIAT可抑制晶状体上皮-间质转化的发生.
-
Src家族酪氨酸蛋白激酶对高糖环境中人LECs凋亡及EMT的影响
背景糖尿病性白内障是糖尿病的主要眼部并发症之一,包括皮质性、核性、囊膜下性及混合型白内障,其表型可能与晶状体上皮细胞(LECs)的不同病理改变有关,而糖尿病囊膜下性白内障是常见的表型之一.研究糖尿病囊膜下性白内障LECs的生物学行为对相关药物的研发和相关疾病的治疗有重要临床意义. 目的 探讨Src-家族酪氨酸蛋白激酶(SFKs)在高糖诱导的人LECs凋亡及上皮-间质转分化(EMT)中的作用. 方法 将人LECs系HLE-B3细胞分为正常对照组、高糖组和PP1组,分别在含5.5 mmol/L葡萄糖的DMEM、含35.5 mmol/L葡萄糖的DMEM及含35.5 mmol/L葡萄糖+10 μmol/L SFK特异性抑制剂PP1的DMEM中培养24 h.分别于细胞培养后3、6、12和24 h采用流式细胞术检测各组细胞的凋亡率;用倒置显微镜观察各组细胞的形态学变化;采用免疫荧光染色检测细胞中EMT标志物E-钙黏蛋白(E-cadherin)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的相对表达量;并用Western blot法检测p-Src418(活化的c-Src激酶)及凋亡相关蛋白bcl-xl、survivin、caspase-3,EMT相关蛋白E-cadherin、α-SMA的表达变化. 结果 高糖组人LECs中p-Src418的表达增高,并在培养6h时达峰值,正常对照组、高糖组和PP1组人LECs中p-Src418的相对表达量(相对灰度值)分别为0.042±0.011、0.125±0.036和0.035 ±0.018,正常对照组和PP1组人LECs中p-Src418的表达量明显低于高糖组,差异均有统计学意义(均P＜0.01).细胞培养后6、12和24 h,高糖组人LECs凋亡率稍高于正常对照组,但差异均无统计学意义(均P＞0.05),PP1组人LECs凋亡率分别为(6.433±2.084)％、(10.333±2.610)％和(8.033±2.967)％,明显高于高糖组的(3.233±1.320)％、(3.533±1.159)％、(5.733±0.230)％及正常对照组的(3.133±1.170)％、(2.833±0.751)％、(3.333±1.201)％,差异均有统计学意义(均P＜0.05),而高糖组与正常对照组间比较差异均无统计学意义(均P＞0.05).细胞培养后6h和12h,PP1组细胞中凋亡抑制蛋白bcl-xl、survivin的相对表达量(相对灰度值)明显低于高糖组和正常对照组,而凋亡促进蛋白caspase-3的相对表达量明显高于高糖组和正常对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05).高糖组培养后24 h,LECs呈梭形,发生纤维细胞样改变,PP1组纤维样细胞减少.Western blot法检测和免疫荧光染色均显示,培养后6h高糖组细胞中EMT标志物E-cadherin蛋白的相对表达量低于PP1组和正常对照组,而α-SMA的相对表达量高于PP1组和正常对照组,差异均有统计学意义(均P＜0.05). 结论 高糖环境可激活LECs中的c-Src激酶,进而诱导LECs发生EMT,同时LECs的凋亡减少;用PP1抑制c-Src激酶的异常激活有助于维持高糖环境中LECs的上皮特性.
-
JNK对TGF-β1诱导的人肺上皮-间质转分化的调控作用
目的：探讨c‐Jun氨基末端激酶（JNK）在转化生长因子‐β1（TGF‐β1）诱导的人肺上皮细胞A549转分化中的调控作用。方法将体外培养的人肺上皮细胞（A549）随机分成3组：正常对照组、TGF‐β1组（加入10 ng／mL TGF‐β1）及抑制剂组（加入10 ng／mL TGF‐β1和20μmol／L JNK的特异性抑制剂Sp600125），培养于3％的血清培养液中，光镜下观察3组细胞形态的变化，并通过RT‐PCT检测各组A549细胞的上皮标志物E‐钙黏蛋白（E‐cadherin ，E‐cad）及间充质标志物α‐平滑肌肌动蛋白（α‐smooth muscle actin ，α‐SMA）和胶原纤维Ⅰ（collagen fibersⅠ，ColⅠ）的表达的变化，West‐ern blot检测JNK磷酸化（p‐JNK）水平的变化。结果正常对照组体外培养的A549细胞光镜下为鹅卵石样紧密排列生长，有E‐cad表达及微量的α‐SMA、ColⅠ及p‐JNK表达。TGF‐β1组培养72 h后细胞基本长成梭形、纺锤形，E‐cad表达下调，α‐SMA、ColⅠ及p‐JNK表达上调。与 TGF‐β1组比较，抑制剂组培养72 h后细胞梭形有所逆转，E‐cad表达上调，α‐SM A、ColⅠ及p‐JNK表达明显抑制；与正常对照组比较，细胞形态较扁长，E‐cad、α‐SM A、ColⅠ及p‐JNK表达差异无统计学意义。结论 JNK信号通路参与 TGF‐β1介导的人肺上皮‐间质转分化过程，JNK的特异性抑制剂Sp600125可有效抑制该过程。
-
肾脏局部醛固酮对糖尿病肾病大鼠肾小管间质转分化的作用
目的 探讨醛固酮对糖尿病肾病(DN)大鼠肾小管间质转分化的影响.方法 采用Wistar大鼠腹腔注射链脲菌素(STZ,60 mg/kg)制备糖尿病模型,4周后尿蛋白＞30 mg/d为DN模型成功(n=16),随机分为DN组(n=8)和螺内酯组(SP组,n=8),以另8只正常大鼠作为对照组(N组).sP组给予螺内酯40 mg·kg-1·d-1,N组、DN组每日以等量清水灌胃.8周后处死大鼠,收集尿、血浆、肾组织检测24 h尿蛋白定量、血肌酐和肾脏病理变化;用放射免疫法检测血浆、肾组织醛固酮浓度;用免疫组化、Western印迹方法检测E钙黏蛋白(E-cadherin)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白的表达;用RT-PCR的方法检测E-cadherin、α-SMA mRNA的表达.结果 与对照组比较,DN组尿蛋白排泄量、血肌酐均显著增加(均P＜0.01),肾组织E-cadherin蛋白和mRNA表达显著下调(均P＜0.01),α-SMA蛋白和mRNA表达均显著上调(均P＜0.01).DN组大鼠肾组织醛固酮显著升高[(24.71±5.30)ng/g比(16.38±2.85)ng/g,P＜0.01],与尿蛋白排泄量、血肌酐、α-SMA蛋白表达呈正相关(r=0.737、0.574、0.688,均P＜0.05),与E-cadherin蛋白表达呈负相关(r=-0.659,P＜0.01).各组间血清醛固酮含量差异无统计学意义.与DN组比较,SP组大鼠尿蛋白排泄和血肌酐显著下降(均P＜0.01),E-cadherin蛋白和mRNA表达上调(均P＜0.05),而α-SMA蛋白和mRNA表达显著下调(均P＜0.01).结论 DN大鼠肾组织局部醛固酮参与了糖尿病肾病肾间质转分化,螺内酯可以阻断醛固酮与其受体结合,抑制肾小管间质转分化,从而起到肾脏保护作用.
-
结缔组织生长因子在肝细胞上皮-间充质转分化及肝纤维化形成中的作用研究进展
纤维化是器官(肝、肾、肺等)慢性功能衰竭的一个共同机制,目前尚无有效防治方法.对上皮-间充质转分化(epithelial-to-mesenchymal transition,EMT)的研究使人们对器官纤维化的传统认识受到挑战,逆转分化已被认为是未来抗肝纤维化治疗的重要策略之一[l].肝细胞EMT被认为是肝纤维化时肝内肌成纤维细胞(myofibroblast)即活化肝星状细胞(HSC)的一种新的重要来源,对肝纤维化形成具有决定性影响[2-3].日益增加的证据表明,结缔组织生长因子(connective tissure growth factor,CTGF)可能介导了肝细胞EMT及肝纤维化形成[4-5].现就近年来CTGF在肝细胞EMT及肝纤维化形成中的作用研究进展作一综述.
-
黄芪汤组分抑制胆汁淤积性肝纤维化大鼠胆管上皮细胞增殖及其转分化的效应
目的 探讨胆管上皮细胞增殖及其转分化在肝纤维化形成过程中的作用及黄芪汤组分抑制肝纤维化的效应和机制.方法 30只SD雄性大鼠采用胆总管结扎制备胆汁淤积性肝纤维化模型,假手术对照组仅对胆总管作分离,不结扎.胆管结扎术后l周随机分为模型对照组和药物干预组(经灌胃给予黄芪汤组分4周),5周后麻醉下处死大鼠,获取肝组织与血清标本.检测肝功能、肝组织学及羟脯氨酸(Hyp)含量;激光共聚焦显微镜观察肝组织角蛋白-7(CK7)与α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)共定位,Western blot检测CK7、α-SMA蛋白表达.计量资料比较采用单因素方差分析中的LSD法或非参数检验中的H检验进行统计学分析,计数资料采用Radit检验,CK7与α-SMA蛋白表达间关系采用直线回归与相关分析.结果 与假手术对照组比较,模型对照组大鼠病死率33.3%,腹水出现率90%,肝功能显著异常,肝组织肝细胞显著减少,胆管上皮细胞及纤维组织大量增生,肝组织Hyp含量、CK7及α-SMA蛋白表达显著增加(P值均<0.01),并有大量的CK7及α-SMA共定位阳性细胞表达.与模型对照组比较,药物干预组大鼠病死率、腹水出现率及脾脏质量均显著降低(P值均<0.05),肝功能显著改善,肝组织肝细胞减少及胆管上皮细胞与纤维增生程度轻,CK7与α-SMA共定位阳性细胞显著减少.药物干预组与模型对照组大鼠肝Hyp含量分别为(1026.8±132.47)μg/g和(887.4±95.56)μg/g,CK7表达量分别为0.812±0.298和0.318±0.143,α-SMA蛋白表达量分别为0.787±0.277和0.341±0.119,差异均有统计学意义(JD值均<0.01).结论 黄芪汤组分可有效抑制胆管结扎大鼠胆管上皮细胞增生及胆管上皮细胞向α-SMA阳性的肌成纤维细胞的转分化.
-
转录因子Snail调控肾脏上皮-间质转化的机制研究
上皮-间质转化 (Epithelial to mesenchymal Lransmon,EMT)发生于多种生理、病理过程,如胚胎发育、伤日愈合、细胞迁移、肿瘤转移级联反应的早期阶段[1].转录因子Snail 首先在果蝇中被发现,随后有报道Snail在其他非脊椎与脊椎动物的胚胎中胚叶存在表达.
-
Gli-1在缺氧诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮-间质转分化中的重要作用
目的 探讨Gli-1在缺氧诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞上皮-间质转分化(EMT)及侵袭中的重要作用.方法 通过缺氧培养乳腺癌MDA-MB-231细胞,以常氧培养作为对照.Transwell小室侵袭试验检测各组MDA-MB-231细胞的侵袭能力;Western blot检测HIF-1α、Gli-1、E-Cadherin和vimentin蛋白的表达水平.通过shRNA稳定转染乳腺癌细胞,再次通过Transwell小室侵袭试验检测缺氧对乳腺癌细胞侵袭能力的影响,Western blot检测HIF 1α、Gli-1、E-Cadherin和vimentin蛋白的表达水平.结果 缺氧可明显诱导乳腺癌MDA MB-231细胞侵袭,并上调HIF-1α、Gli-1和vimentin蛋白,下调E-cadherin蛋白.靶向沉默Gli-1基因后,缺氧失去了对乳腺癌细胞侵袭和EMT的诱导作用.结论 缺氧通过上调Gli-1表达活化Hedgehog通路,诱导乳腺癌细胞侵袭及EMT过程.
