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急性心肌梗死病人肌钙蛋白I含量与梗死面积和部位的关系
目的探讨急性心肌梗死(AMI)病人的肌钙蛋白I(cTnI)的含量与梗死面积和部位的关系, 以评估AMI的病情程度及预后.方法健康对照组60例,于09:00空腹抽静脉血3 ml,分离血清.AMI组58例,于胸痛发作后3 h、6 h、9 h、12 h时抽静脉血3 ml,分离血清.cTnI 采用化学发光免疫分析法(CLIA)定量检测.肌酸激酶同工酶(CK-MB)采用连续监测法定量检测.结果急性广泛前壁梗死病人的cTnI含量与对照组及急性前壁、间壁梗死、急性下壁、侧壁梗死组比较有统计学意义(P＜0.01),与急性非Q波性梗死组比较无统计学意义(P>0.05).cTnI含量与CK-MB有良好的相关性.结论用CK-MB计算梗死面积已得到病理和临床证实.cTnI含量与CK-MB有良好的相关性,说明cTnI含量越高AMI病人的梗死面积越大.实验结果表明,cTnI含量与AMI病人的梗死面积呈正相关,与梗死部位无明显相关性.
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Access全自动微粒子化学发光免疫分析仪常见问题及处理
Access全自动微粒子化学发光免疫分析仪具有高灵敏性、高精确性、高稳定性等方法学特点,我们在4年多的使用过程中,对一些常见问题及处理方法进行了总结,以便于更好地服务于临床.
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促甲状腺激素(TSH)测定的方法学对比研究
目的:目前促甲状腺激素(TSH)检测技术已经发展到第三代,对目前主流使用的两种方法:(ECLIA和IRMA)分别进行血清检测,对两种方法的检测结果进行对比,对其作精确性、重复性及相关性分析.结果:通过批量标本的实验结果统计(SPSS10.0),IRMA法批内CV为7.2%,3.5%,5.7%,批间CV为10.3%,9.6%.8.5%.回收率分别为91.2%,95.3%,97.8%,ECLIA法批内CV为2.6%.1.9%.2.6,批间CV为7.5%,6.4%,5.1%,回收率分别为105.4%,103.2%,99.1%.用两种方法学试剂分别对100份血清TSH含量进行了检测.相应结果进行了相关性分析,二者呈正相关,相关系数为0.982(P>0.001).结论:ECLIA法即酶促化学发光免疫分析更先进,灵敏度高,特异性好,检测速度快,随时检测,自动化程度高,同时也克服了放射性污染的问题,受到大中型医院用户的青睐.IRMA法即免疫放射分析技术成熟.成本低,项目蠢全,性能指标亦达到相应要求.不失为一种经济,便利的方法.目前仍是研究、特殊物质检测首选方法,也是中小型医院首选.因此,两种方法学各有优势,在未来一段时间内仍将是体外免疫诊断互相补充.
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化学发光免疫分析法检测血清C肽、胰岛素及其临床评价
目的:引进化学发光免疫分析技术,应用于糖尿病的临床诊断和治疗检测.方法:采用直接化学发光免疫分析技术,对年龄在18～60岁之间的Ⅱ型糖尿病患者295例和非糖尿病患者110例测定血清基础C肽(C-P)、胰岛素(Insulin)水平.结果:糖尿病组与健康组基础C-P水平分别为1.26±0.89和11.53±0.54,P＜0.01,有统计学意义,认为两组结果间有显著性差异;基础Insulin水平分别为10.69±5.81和15.65±6.55,P＜0.01,有统计学意义,认为两组结果间亦存在显著性差异.结论:化学发光免疫分析法检测血清C肽、胰岛素,操作简便、敏感度高、特异性强、重复性好、无放射污染,在糖尿病领域临床检验中有较大的应用价值.
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钩状效应对化学发光法测定甲胎蛋白的影响与解决方案探讨
目的:探讨钩状效应对化学发光法测定甲胎蛋白(AFP)的影响与解决方案.方法:将所有AFP仪器测定结果＞2 000 ng/ml标本都进行稀释重测.结果:39 484份标本中发现3例由于钩状效应而导致的错误结果.结论:当前的仪器和试剂无法对超高浓度AFP标本进行正确的测定或提示,必须对化学发光法测定AFP时可能存在钩状效应而导致错误结果的现象引起重视.
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C-肽化学发光免疫分析方法学研究
目的:建立人血清C-肽化学发光免疫分析法.方法:采用两株高特异的抗C-肽单克隆抗体,以一株包被微孔板制成固相抗体,另一株标记碱性磷酸酶,以金刚烷衍生物为底物,双抗体夹心法测定人血清C-肽浓度.结果:以5 μg/ml单克隆抗体包被微孔板,酶结合物以1: 5 000稀释,在C-肽浓度0.1～15 ng/ml范围内线性良好,线性方程为y=0.957 5x-0.086 9, 相关系数0.99;灵敏度为0.01 ng/ml,批内、批间变异系数分别为5.8%、8.4%;平均回收率98.4%, 范围91.5%～105.0%.结论:文中建立的人血清C-肽化学发光免疫分析法,首次建立小分子人血清C-肽双抗体夹心化学发光免疫法测定.线性好,灵敏度较常规高出一个数量级,准确度和精密性高,能够满足一般临床诊断和科研的应用.
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血管紧张素Ι化学发光免疫分析方法的建立
目的：建立人血管紧张素Ⅰ（ Ang Ⅰ)化学发光免疫分析方法，通过测定血浆中血管紧张素Ⅰ的含量计算肾素活性。方法：用生物素标记Ang Ⅰ抗原，荧光素标记AngⅠ抗体，将抗荧光素抗体包被于化学发光板，以链亲和素酶为催化剂，采用竞争法建立Ang Ⅰ化学发光免疫分析方法。结果：本方法的测量范围为100~7800 pg/ml，灵敏度为24．3 mU/ml，批内变异为5．6%~8．7%，批间变异为6．8%~10．4%，回收率为95．4%~105．3%，稀释实验测定值与理论值呈线性相关，相关系数为r=0．999。与放射免疫分析试剂盒的相关性方程分别为y=0．95x+235．70，相关系数r=0．973。包被板、生物素标记AngⅠ抗原以及荧光素标记AngⅠ抗体在37℃存放一周稳定性良好。结论：方法学鉴定结果符合免疫分析的基本要求。
关键词： 血管紧张素Ⅰ(AngⅠ) 生物素 荧光素 链亲和素酶 化学发光免疫分析 -
化学发光免疫分析和放射免疫分析测定血清CEA、CA-153结果的评价
乳腺癌是妇女常见的恶性肿瘤之一,CEA、CA-153这二种肿瘤标志物对乳腺癌的鉴别诊断、疗效评价、复发转移监测及预后评估等具有重要意义,本研究同时采用CLIA和RIA这二种免疫分析方法对4122份正常体检者,1261份门诊患者及1198住院患者血清,以及 CEA、 CA-153标准品、质控品分别进行CEA、CA-153含量测定,对CLIA和RIA二种测定方法及应用进行评价,报道如下.
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增强化学发光酶免疫分析法建立及测定血清中的胃泌素
自1977年Halman第一次把化学发光与免疫测定结合起来后,化学发光免疫分析(CLIA)成为一种重要的检测手段.比传统的RIA和ELISA具有更多的优越性,如与RIA相比,没有放射性传染,不会对人体产生损害,操作方便等,与ELISA相比,具有灵敏度高,能较好定量及达到检测要求,然而由于不断研究结果表明,一般的化学发光体系(Luminol-H2O2-HRP)在应用于免疫分析中由于大分子空间位阻作用,灵敏度还是不够理想[1].在加入某些特定酚类物质时,可提高化学发光免疫灵敏度.本文采用对羟基联苯[2]增强的Luminol-H2O2-HRP体系作为免疫分析的终检测手段,建立一种新的增中化学发光免疫分析法.
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增强化学发光免疫法测定人血清游离甲状腺素的研究
目的 建立测定血清游离甲状腺激素(FT4)的增强化学发光免疫法及临床应用.方法 采用辣根过氧化物酶标记抗体,将生物素-亲和素系统引入该体系,建立鲁米诺-四苯硼钠-H2O2化学发光体系,用增强的化学发光免疫法测定人血清中FT4.结果 该方法 的线性范围为4.8～79 ng/L,灵敏度为1.2 ng/L,血红蛋白≤2.0 g/L、甘油三酯≤2.0 g/L、胆红素≤10 mg/L对FT4测定无影响.与放射免疫分析法比较,有较好的相关(r=0.956).结论 用建立的增强化学发光免疫法测定血清FT4,能够满足临床需要.
关键词： 游离甲状腺激素(FT4) 化学发光免疫分析 -
肝炎病毒感染致甲状腺功能受损的临床分析
目的 探讨肝病患者血清甲状腺激素的变化和临床意义.方法 应用化学发光免疫分析技术检测肝病患者的血清甲状腺激素及抗体的含量.结果 肝硬化组和重型肝炎组患者血清中甲状腺原氨酸、游离甲状腺原氨酸、甲状腺素和游离甲状腺素下降,且肝脏功能损害程度越重,下降越明显.结论 肝炎病毒感染患者血清中甲状腺激素的检测对判断肝脏受损程度及预后有重要的临床意义.
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乙型肝炎病毒表面抗原化学发光免疫诊断试剂的研制
目的研制高敏感度、宽线性,且能定量的HBsAg化学发光免疫诊断试剂.方法将碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP)用改良过碘酸钠法标记抗-HBs单抗、山羊抗-HBs多抗,经亲和层析纯化用于制备固相包被板;国家标准品标定HBsAg校准品,优化反应条件,建立HBsAg双抗体夹心一步法检测试剂.结果试剂灵敏度adr＜0.2ng/ml,adw＜0.5 ng/ml,ay＜0.5ng/ml,23份HBsAg阴性Pannel符合率100%;批内CV 3%～4.04%,批间CV9.47%～12.5%;准确率91.9%～110.4%;检测限0.023 ng/ml;0.1～200ng/ml范围线性相关系数r=0.9991;与EIA试剂对比分析相对灵敏度100%,相对特异性99.03%;37℃放置12 d稳定性与2～8℃存放无异.结论该HBsAg化学发光免疫诊断试剂适合于临床诊断应用.
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化学发光免疫分析技术应用研究进展
本文介绍了化学发光免疫分析技术的基本原理、分类及其在兽医学、医学和食品分析上的应用研究进展.
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人β-hCG化学发光免疫分析方法的建立
目的 建立一种检测人血清hCG浓度的双抗体夹心化学发光免疫分析方法.方法 采用2种高特异性的抗β-hCG单克隆抗体,以一种包被微孔板制成固相抗体,另一种标记碱性磷酸酶,以金刚烷衍生物为底物,采用双抗体夹心法检测人血清hCG浓度,并与进口试剂进行比较.结果 以5μg/ml单克隆抗体包被微孔板,酶结合物以1:10 000稀释,在室温条件下检测,可测范围为5～540mIU/ml,灵敏度为0.143 mIU/ml,批内、批间平均变异系数分别为5.28%和7.05%,平均回收率为98.77%,范围为92.3%～108.6%,与TSH、FSH和LH的交叉反应率均小于0.01%.与国外同类试剂有良好的相关性.结论 该方法有较高的灵敏度、精密性和准确性.
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血管内皮生长因子化学发光免疫测定试剂盒的研制及验证
目的 研制血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)化学发光免疫测定试剂盒,并对该试剂盒进行验证.方法 以试剂盒的技术指标和血清检测结果为参考依据,建立检测方法,确定检测范围,并对包被抗体(1∶500、1∶1000和1∶2000倍稀释)及酶标抗体浓度(1∶3000、1∶5000、1∶6000和1∶8 000倍稀释)、包被温度(室温和4℃)、封闭液成分(1％小牛血清、1％和0.5％牛血清白蛋白)及干燥方法(超净台吹干和使用真空干燥机进行干燥)进行优化;同时对试剂盒的线性、检出限、精密性、准确度、特异性及热稳定性进行验证;采用本试剂盒对139例非肿瘤人群和100例肿瘤患者的血清样本进行初步检测.结果 方法的佳检测条件为:包被抗体浓度为1∶1000,酶标抗体浓度为1∶3000,对血清样本的检测范围为6.25～ 800 pg/ml,佳包被浓度为4℃,佳封闭液成分为0.5％牛血清白蛋白,佳干燥方法为真空干燥法.试剂盒线性相关系数r＞0.99,校准曲线各点偏差的绝对值＜10％,低检出限≤3.125 pg/ml,空白检出限≤3.125 pg/ml,批内差异＜5％,批间差异＜7％,回收率为85％ ～ 99％;特异性检验结果为本试剂盒对EGF、FGF-2、PDGF-AA、PlGF-1、PlGF-2、HGF、TNF-α、TNF-β检测的交叉反应率≤0.52％;经37℃保存3、7d后,试剂盒线性相关系数r＞0.99,空白检出限≤3.125 pg/ml,批内差异＜8％,回收率为80％ ～ 82％.139例非肿瘤人群和100例肿瘤患者的血清样本中VEGF的中位水平(M)分别为44.6和83.4 pg/ml.结论 本研究开发的试剂盒具有较高的准确性、灵敏性、特异性,适用于血清VEGF的临床检测,具有较好的临床应用前景.
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人催乳素化学发光免疫分析试剂盒的制备及验证
目的 制备人催乳素(hPRL)化学发光免疫分析(CLIA)试剂盒,并进行验证.方法 采用2株不同结合位点的抗hPRI.单克隆抗体,1株用于包被微孔板,另1株用于标记HRP,建立双抗体夹心检测系统,配合化学发光底物组装成试剂盒,并进行各项技术指标的验证.结果 试剂盒佳定量范围在5～100 ng/ml,标准曲线的相关系数r=0.999 9,灵敏度为o.49 ng/ml,平均回收率为100.9%,试验内和试验间变异系数分别小于6.3%和10.9%.试剂盒有效期可达1年,特异性良好,出现Hook效应的样品浓度为1 500 ng/ml.与进口化学发光试剂盒和放射免疫分析试剂盒对比检测84份临床标本的结果呈高度相关,相关系数分别为0.953 7和0.948 6.结论 已成功制备灵敏、特异的hPRL CLIA试剂盒,可用于人催乳素的临床检测.
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新型癌抗原125化学发光免疫试剂盒的制备
目的 制备新型癌抗原125(CA125)化学发光免疫试剂盒,并进行验证.方法 用1株针对CA125蛋白特异性位点的单克隆抗体作为包被抗体,1株针对CAl25分子糖链的碱性磷酸酶(ALP)标记单抗和另1株针对蛋白特异性位点的ALP标记单抗分别作为酶标抗体,采用双抗体夹心法,金刚烷增敏化学发光体系作为酶底物制备试剂盒,检测CA125,并对试剂盒进行验证.结果 新型CA125试剂盒检测灵敏度达0.1 U/ml,测定范围在0.1～430 U/ml之间,与传统CA125试剂盒一致;与CA199、CA153和CA50糖蛋白无交叉反应;精密性和准确性良好.与传统CA125试剂盒比较,检测结果有显著性差异,特别是在卵巢癌标本检测方面,糖链单抗酶标抗体制备的试剂盒与普通抗体酶标抗体制备的试剂盒检测结果的比值与其他标本两者的比值之间差异具有统计学意义.结论 已制备了新型CA125化学发光免疫试剂盒,其与传统试剂盒检测标本结果的比值更适用于对卵巢癌进行特异性诊断.
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2种治疗药物监测结果分析
目的:通过对治疗药物(462例地高辛、171例氨茶碱)的血药浓度监测,提出个体化给药建议,以有效指导临床合理用药.方法:用全自动微粒子化学发光免疫分析系统(EMIA)测定地高辛和氨茶碱在病人体内的血药浓度,进行血药浓度监测.结果:浓度在有效范围内比例逐年上升,低于治疗范围的比例较高,高出治疗范围的比例较低,我院共监测地高辛血药浓度462例,在有效血药浓度范围(0.8 μg·L-1～2 μg·L-1)248例,有效率为53.7%;氨茶碱血药浓度171例,在有效血药浓度范围(10 mg·L-1～20 mg·L-1)83例,有效率为48.5%.结论:该方法快速、敏感、简便,本研究提示在应用地高辛和氨茶碱等安全范围窄的药物时,应注意血药浓度监测(TDM),并密切注意患者的生理、病理、联合用药等影响因素.
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甲功五项化学发光免疫分析的基质效应对临床测值的影响
目的:探索评价基质效应在化学发光免疫分析中对甲状腺功能五项指标的影响.方法:选取甲状腺功能五项高值血清,用10种基质牛血清、马血清、山羊血清、水解明胶、BSA、PBS、生理盐水、正常人血清、甲减人血清、甲亢人血清分别对T3、T4、FT3、FT4、TSH的高值血清进行倍比稀释,观察基质效应,另将10种基质用考马斯亮兰法检测蛋白含量,分析蛋白含量与基质效应的关系.结果:T3项目牛血清、水解明胶、BSA有明显基质效应；T4和FT3项目牛血清、水解明胶、BSA、PBS、生理盐水有明显基质效应；FT4项目牛血清、马血清、水解明胶、BSA、PBS、生理盐水有明显基质效应；TSH项目没有发现基质效应,正常人血清、甲减人血清和甲亢人血清对甲状腺功能五项无基质效应.检测结果显示蛋白含量多少与基质效应无关.结论:人血清基质是用于稀释样本,基质效应小的液体,针对个体差异性进行的选择,稀释T3、T4、FT3、FT4高值血清选择甲减人血清,稀释TSH高值血清选择甲亢人血清,可以得到较为满意的结果.
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乙肝表面抗原弱阳性标本复检策略分析
探讨ELISA检测乙肝表面抗原(HBsAg)弱阳性标本的复检策略.采用ELISA双孔检测法、化学发光免疫分析法及胶体金免疫层析法复查149例ELISA初检HBsAg弱阳性标本.比较这三种方法的检测灵敏度、特异性以及临床实用价值.结果显示,ELISA法复查149例HBsAg弱阳性标本中,仅81例阳性,与化学发光法比较,结果无显著性差异,一致性检验Kappa值为0.864;以化学发光法与ELISA检测一致的结果为标准,金标法检测HBsAg弱阳性标本灵敏度为87％,特异性达到95％,能够满足临床HBsAg弱阳性标本复查要求；化学发光法较前两者具有更高的特异性及灵敏度,影响因素小,准确性高,临床研究多将其作为参考方法,缺点是其试剂成本高.因此,我们依据各检测方法特点,并针对不同的干扰因素,综合考虑临床需要和经济效益,合理制定HBsAg弱阳性标本的复查策略.
