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超声击破微泡介导EGFP转染类风湿性关节炎大鼠关节滑膜组织的实验研究
关节疾病的基因治疗是当今国内外研究的热门课题[1].超声击破微泡造影剂介导作为一种新型的基因转染方法,在心脏、脑、角膜及肿瘤组织中得到实验证实[2-4].本实验旨在探讨该方法在类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis:RA)滑膜组织中实现基因转染的可能性.资料与方法一、质粒的提取与鉴定取大肠杆菌DH5α制备感受态细菌,将质粒pEGFP-C1转化感受态细菌,挑取单菌落接种到LB培养基中,37℃振荡培养过夜.提取质粒后酶切电泳鉴定.二、实验动物及分组1.建立RA大鼠动物模型:24只正常清洁级Wister大鼠,雌雄各半,体质量258～279 g,平均(261.57±5.42)g.Ⅱ型胶原乙酸溶液(4 mg/ml)4℃搅拌过夜后按1∶1滴加至冷的福氏完全佐剂中,充分乳化.每只大鼠在左后足底、尾根部、背部分3点皮内注射乳化液共0.25 ml,7d后用同样方法加强注射一次.大鼠四肢足爪均严重肿胀、踝关节直径增长幅度≥2mm为造模成功.
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一种可提高成纤维细胞在三维支架上种植效率和均匀性的简单方法
目的:尝试使用简单的动态种植方法来提高成纤维细胞在三维支架上的种植效率和均匀性,以更有效地构建组织工程皮肤.方法:成纤维细胞以下列方式在胶原海绵支架进行种植和培养:(1)振荡种植振荡培养;(2)振荡种植静止培养;(3)静止种植静止培养.定期取样品进行电镜、组织学检测及细胞计数分析.结果:细胞加入24 h后振荡种植的样品比静止种植的样品细胞在支架内分布更为均匀,同时振荡种植的样品细胞贴壁率[(56±5)%]明显高于静止种植的样品细胞贴壁率[(31±4)%,P<0.01].振荡种植振荡培养的样品在培养过程中细胞脱离支架而死亡,因此放弃了这些样品的继续培养.振荡种植静止培养的样品和静止种植静止培养的样品细胞一直保持正常的伸展状态.在培养过程中细胞向支架内部的长入速度及支架中的活细胞总数振荡种植静止培养的样品一直高于静止种植静止培养的样品.结论:采取振荡种植的方式种植细胞可明显提高成纤维细胞在三维支架上种植的效率和分布均匀性.
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芽孢杆菌动态发酵产细菌纤维素工艺的优化
以解淀粉芽孢杆菌ZF-7(Bacillus amyloliquefaciens ZF-7)为菌源,对其动态发酵生产细菌纤维素(Bacterial cellulose,BC)的发酵工艺条件进行优化. 利用单因素试验,以粒径为0.5cm~0.8cm的BC颗粒产量及其占总纤维素比率为考察指标,考察摇床转速、装液量、温度、接种量及培养时间对其BC颗粒形成的影响,探索佳动态发酵工艺. 结果表明:优培养条件为装液量70mL/250mL三角瓶,接种量5%,150r· min -1 , 32℃振荡培养5d,在此条件下,可获得89.5%的φ0.5cm~0.8cm颗粒状BC,干重为6.56g· L -1.
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振荡培养对变形链球菌在两种修复材料表面粘附的影响
目的:研究振荡培养对变形链球菌在两种修复材料表面粘附的影响.方法:将热凝树脂和钴铬合金试件各22个分别置于含变形链球菌悬液的试管内,随机分成两组,各11只试管,分别置于振荡培养箱和静止培养箱中培养24 h.测定细菌粘附量,并进行扫描电镜观察.结果:在振荡培养条件下,热凝树脂和钴铬合金材料表面变链菌粘附量低于同种材料静止培养组(P＜0.01).结论:振荡培养条件可减少变形链球菌在修复材料表面的早期粘附.
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PCR和毛细管电泳技术检测沙门氏菌等5种病原菌的方法研究
目的 采用多重PCR技术检测结合毛细管电泳成像技术建立快速检测沙门氏菌、志贺氏菌、副溶血性弧菌金黄色葡萄球菌和大肠杆菌O157的方法.方法 根据沙门氏菌hilA基因、志贺氏菌ipaH基因、副溶血性弧菌TDH基因、金黄色葡萄球菌的pSa-442 Sau3AI fragment基因及大肠杆菌O157的rfbE基因设计异性特PCR引物,被检样品经4h振荡培养后金属浴裂解制备DNA模板,使用全自动毛细管电泳核酸检测系统分析PCR扩增产物.结果 在580 bp、423bp、257 bp、245 bp和194 bp处分别出现预期的特异性DNA条带,且无非特异扩增条带出现.敏感性试验显示在模拟标本中的检测灵敏度,沙门氏菌为101-2 cfu/ml、志贺氏菌为101 cfu/ml、副溶血性弧菌为102 cfu/ml、金黄色萄萄球菌为102 cfu/ml、大肠杆菌O157为101 cfu/ml.结论 该方法操作方便、特异性和灵敏度高、分辨率高,可同时完成5种病原菌的检测,在公共卫生突发事件中具有实用价值.
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抗菌蛋白葛栳纱在乳酸乳球菌中的表达研究
目的:观察人工设计的葛栳素的cDNA在乳酸乳球菌中的表达及其表达产物的抗菌作用.方法:采用统计学方法,统计同种族蛋白质Attacin A cDNA序列各种遗传密码子的出现频率 ,并以此为基础根据已知的葛栳素蛋白质序列设计其cDNA序列.采用PCR重叠延伸法合成葛栳素的cDNA序列,在测序完全正确后将葛栳素基因插入适合乳酸乳球菌MG1363表达的表达载体pNZ8048中,采用电穿孔法转化MG1363,转化的MG1363在电转化后涂布于恢复培养基SGM17 MC(含氯霉素)后放入厌氧培养箱中培养72小时后,挑单个菌落于SGM17培养液(无抗生素), 厌氧振荡培养72小时后收集细胞上清并进行杀菌活性的检测.结论:转化的MG1363细胞上清对大肠杆菌J5具有杀菌活性.结论:人工设计葛栳素的cDNA序列在乳酸乳球菌中得到表达,其表达产物具有抗菌作用.
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动态种植法提高在去细胞猪瓣支架上种植内皮细胞效率和均匀性的研究
目的:尝试使用简单的动态种植方法来提高内皮细胞在去细胞牛心包支架上的种植效率和均匀性,以更有效地构建组织工程瓣膜.方法:采用胰酶-去垢剂法制备去细胞牛心包. 内皮细胞以下列方式在去细胞牛心包支架进行种植和培养: ①振荡种植振荡培养(OO);②振荡种植静止培养(OS);③静止种植静止培养(SS). 定期取样品进行电镜、组织学检测及细胞计数分析. 结果:细胞加入24 h后振荡种植的样品比静止种植的样品细胞在支架内分布更为均匀,同时振荡种植的样品细胞贴壁率[ (36±3) %]高于静止种植的样品细胞贴壁率[(21±2)%, P<0.05]. 振荡种植振荡培养的样品在培养过程中细胞脱离支架而死亡,因此放弃了这些样品的继续培养. 振荡种植静止培养的样品和静止种植静止培养的样品细胞一直保持正常的伸展状态. 在培养过程中支架上的活细胞总数振荡种植静止培养的样品一直高于静止种植静止培养的样品. 结论:采取振荡种植的方式种植细胞可明显提高内皮细胞在三维支架上种植的效率和分布均匀性.
