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白血病抑制因子mRNA在早孕期小鼠子宫内膜的表达规律和组织学定位
目的研究白血病抑制因子(LIF)mRNA在早孕期小鼠子宫内膜的表达规律及LIF蛋白的组织定位。方法用RT-PCR半定量法测定LIF mRNA的表达；用免疫组化ABC法测定LIF蛋白的组织学定位。结果 LIF mRNA在早孕期小鼠子宫内膜呈时序性规律表达，孕早期升高，第4天达到高峰，比未孕期明显增高(P<0.01)，此后下降，到孕第7天降到孕前水平；LIF蛋白主要定位在子宫内膜腺上皮和腔上皮，且第4天染色深，间质细胞无LIF表达。结论 LIF的表达高峰与小鼠孕卵着床时间吻合。因此，LIF可能参与了着床的启动，LIF参与着床可能是通过自分泌和旁分泌作用的结果。
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不孕症患者子宫内膜白血病抑制因子mRNA表达的研究
目的研究白血病抑制因子(LIF)mRNA在黄体功能不全、不明原因不孕及输卵管原因不孕患者子宫内膜的表达,了解其与各种不孕症的关系.方法采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定不孕患者和正常妇女黄体中期子宫内膜LIF mRNA的表达水平.结果LIF mRNA在正常妇女(对照组)黄体中期子宫内膜的表达水平为1.12±0.45,黄体功能不全患者子宫内膜的表达量为0.64±0.41,两者差异有显著性(P＜0.05);不明原因不孕组表达量为0.52±0.41,与对照组之间差异有显著性(P＜0.01).输卵管原因不孕组LIF水平为0.99±0.35,与对照组相比差异无显著性(P＞0.05).结论LIF mRNA在黄体功能不全和不明原因不孕患者子宫内膜中表达量降低,因此,LIF基因表达缺失可能与不孕症的发病有关.输卵管原因不孕与LIF无关.
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血清雌孕激素及输卵管组织白血病抑制因子及其受体表达与输卵管妊娠的关系
目的 探讨白血病抑制因子(LIF)及其受体(LIFR)和血清雌孕激素[雌二醇(E2)、孕酮(P)]与输卵管异位妊娠的关系.方法 采用免疫组化技术检测11例非孕组、12例宫内妊娠组和36例输卵管异位妊娠组输卵管组织中LIF和LIFR的表达水平,半定量分析其在各组间的表达差异.电化学发光法检测32例正常宫内孕组、40例异位妊娠组血清E2和P.结果 LIF在非孕组、宫内妊娠组和异位妊娠组间的表达无明显差别；在输卵管腺上皮中,异位妊娠组LIFR的表达高于其他两组(P＜0.05),而非孕组和宫内妊娠组上皮间表达无明显差异(P＞0.05)；但是在间质中,LIFR的表达在输卵管妊娠组明显低于其他两组(P＜0.01),而非孕组和宫内妊娠组上皮间其表达无明显差异(P＞0.05).异位妊娠组血清E2、P水平明显均低于正常宫内妊娠组(P ＜0.05,p＜0.01).相关性分析显示输卵管妊娠时输卵管腺上皮LIFR和患者血清E2正相关,间质LIFR和E2负相关.结论 LIFR的异常表达可能与输卵管异位妊娠的发生密切相关.输卵管异位妊娠组血清E2、P均明显低于正常宫内妊娠组.E2能上调输卵管腺上皮的LIFR表达,下调输卵管间质LIFR的表达.
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LIF和RANTES在单病原菌性血流感染小鼠模型中的表达及意义
目的 探讨4种血流感染常见病原菌分别致小鼠血流感染后白血病抑制因子(leukaemia inhibitory factor,LIF)和活化T细胞调节的、正常T细胞表达和分泌的细胞因子(regulated upon activation,normal T cell expressed and secreted factor,RANTES)的表达及变化规律,为细菌性血流感染的早期诊断提供研究基础.方法 建立金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌标准菌株的CD-1 (ICR)小鼠血流感染模型,用蛋白质液相芯片技术检测各实验组和PBS对照组感染后0.5h、1h、3h、6h、12 h、24 h和48 h时LIF和RANTES的浓度.结果 金黄色葡萄球菌、粪肠球菌、大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌的致小鼠死亡的半数致死量(LD5o)分别约为8.1×108/mL、9.6×108/mL、8.1×108/mL和1.1×109/mL.细菌入血1h时血清中LIF的浓度明显升高,大肠埃希菌组、肺炎克雷伯菌组、金黄色葡萄球菌组和粪肠球菌组LIF的峰浓度分别为(51.6±5.0) pg/mL、(73.2±20.8) pg/mL、(7.3±0.9) pg/mL和(6.1±1.2) pg/mL,与对照组相比,差异均有统计学意义(P均＜0.01).粪肠球菌组、大肠埃希菌组和肺炎克雷伯菌组细菌入血1h时RANTES浓度明显升高,3h时升高更明显.且大肠埃希菌组和肺炎克雷伯菌组升高的幅度较金黄色葡萄球菌和粪肠球菌组更为明显.达峰值时浓度分别为(1 929.0±25.2)pg/mL、(1 218.1±227.4) pg/mL、(55.7±10.0) pg/mL和(179.2±9.2) pg/mL,与对照组相比,差异均有统计学意义(P均＜0.01).结论 LIF和RANTES的浓度在细菌入血后1h即明显升高.感染后的2d内,大肠埃希菌组和肺炎克雷伯菌组LIF和RANTES浓度的升高幅度明显高于金黄色葡萄球菌组和粪肠球菌组.联合检测LIF和RANTES可能在细菌性血流感染早期诊断和区分革兰阴性/革兰阳性菌感染方面有一定作用.
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生长因子对人精原干细胞体外存活和增殖的影响
目的:探讨3种生长因子--干细胞因子(SCF)、白血病抑制因子(LIF)和碱性成纤维细胞生长因子(bF-GF)对精原干细胞(SSCs)体外存活及增殖的作用. 方法:在培养液中加入不同浓度的SCF、LIF和bFGF,各生长因子均设浓度为0、5、10、20 μg/L 4个浓度组,每种生长因子不同浓度1式3份,每隔8～12 h观察细胞的体外存活及增殖情况.应用光镜、电镜观察SSCs的形态结构特点. 结果:培养液中加入不同浓度的SCF、LIF及bFGF后,SSCs的存活时间均比对照组有所延长,组间比较差异有显著性(P<0.05). 结论:生长因子SCF、LIF和bF-GF等可促进SSCs体外存活及增殖.
关键词： 精原干细胞 干细胞因子 白血病抑制因子 碱性成纤维细胞生长因子 -
抑抗汤调节不明原因不孕症患者子宫内膜白血病抑制因子表达的研究
目的:通过研究抑抗汤对不明原因不孕症患者子宫内膜白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)表达的影响,了解抑抗汤治疗不明原因不孕症的作用机制.方法:不明原因不孕症患者20例,口服标准量抑抗汤2个月,首先应用RT-PCR初步了解不孕症患者服药前、后黄体晚期子宫内膜表达LIFmRNA水平的差异,然后采用实时荧光定量PCR对服药前后LIF基因转录水平定量验证,并以免疫组化鉴定其在服药前后子宫内膜蛋白水平的表达情况.结果:不孕症患者治疗前、后子宫内膜LIF荧光定量PCR的Ct值分别为9.79±0.91和4.60±1.24,两者相比差异有显著性(P<0.01),表明治疗后LIF的转录水平高于治疗前.免疫组化结果显示LIF表达在子宫内膜腺上皮细胞的细胞浆内,且治疗后蛋白水平的表达较治疗前明显增强(P<0.05).结论:抑抗汤治疗不明原因不孕症可能是通过促进子宫内膜LIF的表达来实现的.
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输卵管组织LIF及其受体LIFR的表达与输卵管妊娠的关系
目的:探讨白血病抑制因子(LIF)及其受体(LIFR)与输卵管异位妊娠的关系.方法:采用免疫组化技术检测11例非孕组和36例输卵管异位妊娠组输卵管组织中LIF和LIFR的表达水平,半定量分析其在各组间的表达差异.结果:无论是在输卵管腺上皮还是间质中,LIF在非孕组和异位妊娠组间的表达无明显差别；但是在输卵管腺上皮中,LIFR的表达异位妊娠组高于非孕组(P＜ 0.05);而在间质中,LIFR的表达输卵管妊娠组明显低于非孕组(P＜0.01).结论:LIFR的异常表达可能与输卵管异位妊娠的发生密切相关.
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人胚胎生殖细胞体外培养条件优化及细胞移植实验研究
目的:优化人胚胎生殖细胞(EG细胞)的体外培养体系,并将生长状态良好的传代的人EG细胞移植用于大鼠心肌梗死模型的治疗.探讨人胚胎生殖细胞进行异种移植对大鼠心肌梗死的治疗机制.方法:取5～10周人胚胎生殖腺嵴和背侧肠系膜,用添加和不添加细胞因子的两种培养体系对比进行组织块原代及传代培养,选取生长情况良好的传至第4代的人EG细胞,移植到急性心肌梗死大鼠的梗死心肌周围,分别于移植后1天、1、2、4周处死大鼠,以鼠抗人细胞核抗体MAB1281作为示踪剂[1],通过免疫组化方法检测移植细胞的分布.结果:在培养液中添加LIF和b-FGF后原代及传代培养的人EG细胞生长旺盛,形成集落更早,传到第4代形成的集落体积变化不大;移植组人EG细胞在移植后1天、1周、2周、4周均可以在心梗区域观察到MAB1281阳性细胞.结论:添加LIF和b-FGF的培养体系是更高效的人EG细胞培养体系.人EG细胞可异种移植,人EG细胞在大鼠心肌梗死处由心外膜层逐渐向心肌层迁移.
关键词： 人胚胎生殖细胞 白血病抑制因子 碱性成纤维细胞生长因子 心肌梗死 细胞移植 -
血清白血病抑制因子水平与肥胖和2型糖尿病的相关性
目的 探讨血清白血病抑制因子(LIF)水平与肥胖和2型糖尿病(T2DM)的相关性.方法 44例初诊T2DM患者分为肥胖组(A组,22例,BMI≥25 kg/m2)和非肥胖组(B组,22例,BMI＜25 kg/m2),44例健康体检人群分为肥胖组(C组,22例,BMI≥25 kg/m2)和非肥胖组(D组,22例,BMI＜25 kg/m2).ELISA法测定各组血清LIF和IL-6水平.结果 A、B组年龄、FBG、HbA1c和LIF均高于C、D组(P＜0.05),A组C反应蛋白(CRP)和IL-6水平高于C、D组(P＜0.05);A组FBG、IL-6、CRP、LIF和BMI亦高于B组(P＜0.05);C组LIF、IL-6、BMI、CRP、TG亦高于D组(P＜0.05).LIF水平与年龄、FBG、HbA1c、CRP、BMI、腰臀比和IL-6呈正相关(r=0.228、0.729、0.665、0.852、0.627、0.601和0.911,P＜0.01).CRP和IL-6是血清LW的的独立相关因素(P＜0.01).结论 T2DM患者血清LIF与炎症反应有关;LIF可能参与了肥胖及T2DM的发生、发展.
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中药抑抗汤含药血清对子宫内膜容受性的影响
目的 探讨中药抑抗汤含药血清对体外培养的小鼠子宫内膜容受性的影响.方法 40只实验小鼠随机分为两组,分别用中药抑抗汤0.8ml和等量生理盐水灌胃28d,制备含药血清和空白血清.提取妊娠第4天(D4)雌鼠子宫内膜细胞后分为含药血清(A组)、胎牛血清(B组)和空白血清(C组)三组进行细胞培养.黏附实验检测子宫内膜细胞的黏附能力,ELISA法检测细胞培养液白血病抑制因子(LIF)水平,Western blot检测整合素ανβ3蛋白水平.结果 A组细胞黏附能力、LIF和整合素ανβ3蛋白表达均较B、C组显著增加(P＜0.05).结论 抑抗汤可能是通过增强细胞黏附功能,增加LIF和整合素ανβ3的表达来改善子宫内膜容受性.
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抑抗汤对胚泡着床障碍小鼠子宫白血病抑制因子表达的影响
目的 观察抑抗汤对小鼠胚泡着床障碍的影响.方法 将妊娠小鼠随机分为正常组、模型组、中药组和对照组.中药组按照抑抗汤灌胃剂量进一步分为低、中、高剂量组,分别每日以0.4、0.6、0.8 ml抑抗汤灌胃；对照组每日0.8ml生理盐水灌胃.模型组和中药组于第4天晨皮下注射0.8 g/L米非司酮溶液0.1ml.第5天观察各组小鼠妊娠率和平均胚泡着床数,ELISA法检测小鼠宫腔冲洗液白血病抑制因子(LIF)蛋白浓度,实时荧光定量PCR检测子宫内膜LIF表达水平.结果 模型组妊娠率和平均胚泡着床数较正常组明显下降(P＜0.01).中药组妊娠率和平均着床胚泡数均较模型组呈剂量依赖性增加(P＜0.05).中药组LIF蛋白和mRNA水平较模型组升高.结论 抑抗汤可能通过促进LIF表达促进胚泡着床.
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白血病抑制因子影响人子宫内膜间质细胞血管内皮生长因子表达的体外研究
目的 探讨白血病抑制因子(LIF)在体外条件下对人子宫内膜间质细胞(hESCs)血管内皮生长因子(VEGF)生成的影响,以及VEGF在体外诱导人脐静脉内皮细胞(HUvECs)形成管腔的能力.方法 体外培养分泌期hESCS,加不同浓度LIF处理24 h.半定量RT-PCR方法检测hESCs VEGF mRNA的表达;Western blot方法检测hESCs细胞沉淀中VEGF蛋白的表达以及培养上清中VEGF蛋白的分泌;收集各组hESCs的培养上清,加入在Matrigel上平铺生长的HUVECs细胞中,观察HUVECs在体外形成管腔的能力.结果 与对照组相比,LIF处理组能明显增加hESCs VEGF mRNA水平的表达,明显增加hESCS VEGF蛋白的表达和分泌;hESCs经LIF处理后的培养上清,能明显增加HUVECs形成新生血管的能力.结论 LIF可能通过增加hESCs VEGF的表达参与调控胚胎着床过程中的血管形成.
关键词： 白血病抑制因子 血管内皮细胞生长因子 胚胎着床 血管形成 -
小干扰RNA沉默白血病抑制因子基因对整合素ανβ3表达的影响
目的 白血病抑制因子(leukemia inhibitor factor,LIF)及整合素ανβ3 被认为是子宫内膜容受性的标记分子.探讨小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)对LIF的抑制效应及该效应对整合素ανβ3表达的影响.方法 化学合成3条LIF siRNA(LIFsiRNA-1、LIFsiRNA-2和LIFsiRNA-3),用脂质体法转染到小鼠子宫内膜细胞中,实时荧光定量PCR筛选出佳干扰片段和优转染浓度,RT-PCR检测整合素ανβ3 mRNA的表达水平,ELISA法检测细胞培养液中LIF蛋白,Western blot检测整合素ανβ3蛋白,从蛋白水平进行相关性分析.结果 siRNA转染后,LIFsiRNA-1 mRNA表达下调明显(0.26±0.09),差异有统计学意义(P<0.01),且在一定范围内呈剂量依赖性,选择优转染浓度70nmol/mL,整合素ανβ3 mRNA表达明显下降(0.53±0.23),差异有统计学意义(P<0.01);LIF蛋白[(2.47±0.03)ng/mL]及整合素ανβ3蛋白[(0.16±0.08)ng/mL]表达较对照组显著下调,差异有统计学意义(P<0.01).结论 LIFsiRNA-1可很好地抑制LIF的表达,而LIF的沉默表达能有效抑制整合素ανβ3的表达,LIF和整合素ανβ3具有显著正相关性(P<0.01).
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血清白血病抑制因子在体外受精-胚胎移植中的预测价值
体外受精-胚胎移植（in vitro fertilization and embryo transfer，IVF-ET）是辅助生殖技术的核心部分，也是治疗不孕症的有效方法之一，但IVF-ET存在低妊娠率及高流产率。白血病抑制因子（leukemia inhibitory factor，LIF）是一种分泌型糖蛋白，在分泌期的中、晚期子宫内膜中，LIF呈短暂性、爆发性增高，水平增至增生期的4~5倍。LIF在大量表达的同时，伴随胚泡白血病抑制因子受体（LIFR）的表达，这有利于胚泡与子宫内膜的结合。在着床过程中，LIF和LIFR结合激发着床，还可刺激滋养层细胞分泌纤连蛋白，使胚泡容易与子宫内膜接触、黏附，且同时形成物质交换的通道，促进胚胎着床的成功。因此，通过检测LIF，及早有效预测IVF-ET结局，对防治先兆流产，及早诊断异位妊娠，改善妊娠结局，降低自然流产率具有重要的临床意义。
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白血病抑制因子在骨性关节炎组织的表达及临床研究
[目的]探讨白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)在骨性关节炎(OA)关节组织中的表达规律及临床相关性.[方法]切取(32人)73例骨性关节炎滑膜、软骨和软骨下骨组织,含10人正常关节组织标本,应用RT-PCR检测LIF mRNA在OA不同病变阶段中的表达,酶联免疫吸附反应(ELISA)检测LIF在组织中的含量.[结果]中度OA病变软骨下骨LIF mRNA表达量高.重度OA软骨中LIF mRNA的表达量高,软骨下骨的表达量低.ELISA检测LIF在各组织的含量情况与上述结果一致.[结论]LIF在OA组织中表达呈现出一定的时间及空间分布的规律,提示LIF作为一种分解代谢因子可能参与了OA发病过程.
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抑抗汤对子宫内膜容受性作用的影响
目的 探讨抑抗汤对子宫内膜容受性作用的影响.方法 在实验室按需选取74只成年母鼠,将所选母鼠平均随机分为A组和B组,A组与B组大鼠分别应用抑抗汤与0.9％氯化钠注射液进行灌胃,对其心脏采血制得所需血清.另取74只大鼠分为对照组和研究组,并取得其子宫内膜细胞.上述A、B组血清分别对研究组与对照组大鼠取得的子宫内膜细胞进行培养,并对培养后子宫内膜细胞的黏附能力、白血病抑制因子(LIF)与整合素avβ3蛋白的表达水平进行检测比较.结果 研究组培养液细胞中LIF、细胞黏附能力与avβ3蛋白的表达均高于对照组(均P＜0.05).结论 抑抗汤可能对于对细胞的黏附功能有所增强,从而增加女性体内LIF水平与avβ3蛋白的表达,从而改善子宫内膜容受性.
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白血病抑制因子在自然流产绒毛组织中的表达
目的探讨白血病抑制因子(LIF)在绒毛组织中的表达及其与先兆流产及难免流产的关系.方法选择2003年10月～2004年8月来我院就诊、自愿采用人工流产术终止妊娠者为检测对象,按诊断分为正常早孕组、先兆流产组和难免流产组,每组各30例,采肘静脉血并收集流产绒毛组织.采用放射免疫法检测3组血清孕酮及人绒毛膜促性腺激素(hCG)水平,采用Western blot印迹杂交技术对3组流产绒毛组织中LIF的表达进行测定.结果难免流产组血清孕酮及hCG水平为(36.2±18.4)nmol/L及(13.6±3.1)kU/L显著低于正常早孕组(93.6±27.3)nmol/L及(70.2±15.9)kU/L和先兆流产组(89.5±25.2)nmol/L及(60.3±13.7)kU/L,差别均有显著性意义(均P＜0.01),先兆流产组与正常早孕组间差别无显著性意义(均P＞0.05);正常早孕组、先兆流产组和难免流产组绒毛组织中LIF平均相对表达量依次降低,分别为1.12±0.11、1.04±0.08、0.23±0.02,难免流产组LIF表达量显著低于其它两组(P＜0.01),先兆流产组与正常早孕组间LIF的表达差别无显著性意义(P＞0.05).结论 LIF在早孕者流产绒毛组织中的表达量降低,可能与hCG及孕酮分泌下降有关,是终导致难免流产的原因之一.
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复发性流产患者绒毛膜和蜕膜组织SOCS-3和LIF的表达
目的 探讨细胞因子信号转导抑制因子3(suppressor of cytokine signaling3,SOCS-3)和白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)在复发性流产(recurrent spontaneous abortion,RSA)患者绒毛膜和蜕膜组织中的表达情况,为RSA的早期识别和临床诊治提供一定理论依据.方法 随机抽取RSA患者45例作为观察组,选取同期在门诊行人工流产术的45例正常妊娠妇女作为对照组,采用Western blot法对所有患者绒毛膜和蜕膜组织中SOCS-3和LIF的表达水平进行检测.结果 观察组患者绒毛膜和蜕膜组织中的LIF相对表达量低于对照组(P<0.05),SOCS-3的相对表达量低于对照组(P<0.05).结论 较之于正常妊娠患者,RSA患者绒毛膜和蜕膜组织中SOCS-3和LIF的表达水平显著降低,可能反映出其宫体内妊娠状态时Th1/Th2的免疫耐受失衡、LIF的免疫保护作用减弱,进而引发的免疫损伤可能是导致RSA发病的原因之一.SOCS-3和LIF水平有望作为RSA患者识别的标志物之一.
关键词： 复发性流产 细胞因子信号转导抑制因子3 白血病抑制因子 免疫因素 -
白血病抑制因子促进大鼠坐骨神经再生的作用研究
目的 探讨白血病抑制因子(LIF)对大鼠坐骨神经损伤后再生的作用.方法 60只SD大鼠随机分成2组,每组30只.按Lundborg方法制成神经再生室动物模型,实验组套接管内注入LIF 50 μL (0.5 μg),对照组注入等量的生理盐水.术后4、8、12周,每组分别取10只大鼠进行坐骨神经指数、神经电生理学检测,然后取出硅胶管内的神经和同侧的腓肠肌进行神经肌肉组织学检查.结果 术后4、8、12周实验组的坐骨神经指数、神经传导速度、有髓神经计数,有髓神经的髓鞘厚度、肌湿重均较对照组有显著改善(P＜0.001).结论 白血病抑制因子能够促进大鼠坐骨神经的再生,且有肌营养作用.
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心肌营养素-1的研究进展
心肌营养素-1(cardiotrophin-1,CT-1)初是Pennica等[1]于1995年从小鼠胚胎干细胞的胚状体培养液中分离获得的一种新型细胞因子,其结构与细胞因子IL-6家庭成员如白血病抑制因子(1 eukamia inhibitory factor. LIF)睫状神经营养因子(ciliary neurotrophic factor. CNTF)抑瘤素M (oncostatin M. OSM)与白细胞介素-11(Interleukin-11.IL-11)具有高度同源性[2,3],属IL-6家庭成员.
