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卵透明带避孕疫苗研究进展
哺乳动物卵透明带(zona pellucida, ZP)是由卵母细胞及颗粒细胞分泌并覆盖于卵母细胞及着床前受精卵外的一层基质，人和许多动物包括猪、鼠、兔等在内的ZP都是由3～5种糖蛋白组成，称为ZP1、ZP2、ZP3等。ZP蛋白在精卵结合及精子穿透卵透明带中起着非常重要的作用，影响受精过程的成败。ZP蛋白具有很强的抗原性，主动免疫动物可诱发产生抗体，其相应抗ZP抗体与ZP结合能干扰卵子和卵泡细胞间信息交流，使卵子失去与同种精子结合的能力。ZP是一个不影响激素水平的特异性的抗生育阻断位点，国内外已对ZP避孕疫苗进行多层次的研究。随着研究的不断深入，无疑将为人类生殖避孕、鼠类等有害动物不孕控制提供新思路和新途径。本文就ZP疫苗近年来的研究进展进行综述。
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乙型肝炎病毒感染对辅助生殖技术的影响与探究
我国是乙型肝炎病毒(HBV)感染的高发区,随着辅助生殖技术(ART)的发展,越来越多携带有HBV的不孕夫妇选择ART进行助孕治疗.HBV的携带可能对男性精子功能、女性卵母细胞功能造成损伤,从而影响妊娠结局.同时,在胚胎实验室中也会由于HBV的存在造成样本样本,样本-人之间的交叉感染.因此,在ART助孕过程中探究HBV可能造成的影响,对于加强实验室的管理,有效预防该疾病,从而获得良好ART结局,有着非常重要的意义.
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卵泡刺激素、黄体生成素对卵母细胞成熟的调节作用
遵循两细胞两促性腺激素的理论,卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)对于卵泡成熟和卵巢性腺类固醇的产生都是必需的.在体内FSH启动卵泡生长,LH促进卵母细胞成熟.FSH及LH的应用显著缩短了卵母细胞体外成熟(IVM)的时间,提高卵母细胞成熟及发育的潜能,提高妊娠率.因此揭示卵母细胞核质成熟的影响因素,对提高IVM卵母细胞的质量至关重要.
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脑源性神经营养因子在生殖细胞发育过程中的作用
脑源性神经营养因子(BDNF)是神经营养因子家族成员,不仅在神经系统广泛表达,也在非神经组织如心血管系统、免疫系统、内分泌和生殖系统表达.本文综述了BDNF在生殖细胞发育过程中的表达和作用的研究进展,重点讨论了BDNF在卵泡发育和成熟过程中的表达和可能作用.
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干细胞向女性生殖细胞分化的研究进展
人类辅助生殖技术(ART)可以治疗部分女性卵巢早衰、年龄相关的卵巢功能障碍,但不能治疗生殖细胞缺乏的不孕不育.干细胞研究取得的重大进展,包括多种成体干细胞、人类胚胎干细胞、诱导多能干细胞等,对生殖医学有潜在的应用前景.卵巢中极少量具有自我更新和分化潜能的生殖干细胞,有产生新的卵母细胞的潜能,为卵巢再生、卵母细胞生成、女性不孕治疗提供了新的希望,也为研究生殖生理提供新的研究策略.本文综述干细胞向生殖细胞分化研究.
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原始卵泡的形成与发育
在胚胎发育时期,原始生殖细胞形成并迁移至生殖腺,形成种系囊.卵原细胞进入减数分裂成为卵母细胞.随后种系囊分裂,单个卵母细胞与前颗粒细胞组装成原始卵泡.前泡膜细胞被募集到原始卵泡周围,原始卵泡发育并向初级卵泡转化.原始卵泡的形成和发育是卵巢生物学的重要过程,阐释其分子和细胞机制为调节卵巢功能和治疗卵巢疾病提供方向.
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卵母细胞的细胞质体外成熟的观察指标
卵母细胞体外成熟(IVM)培养过程中还存在很多问题,胞核和胞质成熟的不同步直接影响了卵母细胞的发育能力,从而影响了IVM的成功率.在探讨人未成熟卵母细胞IVM的各种影响因素时,对细胞质成熟一直缺乏有效的观察、评价指标,从而影响了研究进程.本文就IVM中卵母细胞成熟胞质的一般形态、超微结构以及可能影响胞质成熟的特异性表达基因做简要综述.
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一氧化氮与卵巢生理
NO是一种结构简单的气体,是脊椎动物体内已发现的分子量小的生物活性分子.NO作为一种信使分子,生物作用广泛,在生殖系统发挥重要作用.本文着重介绍NO作为卵巢内重要的调节因子,在调节卵泡发育、卵母细胞成熟、排卵、黄体的形成与退化、激素合成等方面的研究进展.
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脑源性神经营养因子在卵母细胞成熟过程中的表达与作用
卵泡发育及卵母细胞成熟是一个非常复杂的过程,是一种多种因子相互作用、相互协调的结果.近年来研究脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor,BDNF)不仅广泛分布于神经系统,对神经元的分裂和发育发挥重要作用,而且在生殖系统也有表达.并认为BDNF能够通过某种旁分泌或自分泌的方式促进卵母细胞成熟,尤其是胞浆成熟,从而促进移植前胚胎的发育.但其具体作用机制还不甚清楚,有待于进一步研究.
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卵母细胞成熟与老化的研究进展
哺乳动物卵母细胞的发育与成熟是一个复杂的生物学过程,是生殖行为的关键,这一过程中的任何差错都会导致卵母细胞发育异常或不孕.研究人类卵母细胞成熟与老化,对于了解人类胚胎发育特征以及认识反复流产、胚胎停育、不孕不育等疾病发病机制的具有重要意义.本文综述了卵母细胞减数分裂的停滞与恢复、卵母细胞的核成熟、胞质成熟以及卵母细胞老化等方面研究.
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卵母细胞的成熟抑制与发育潜力
体外成熟的卵母细胞发育潜力下降与其胞质及核成熟的不同步有关,因此,抑制卵母细胞核成熟的物质引起了人们的关注.本文综述了各种卵母细胞成熟抑制剂的作用机制及应用,重点讨论选择性的细胞周期蛋白依赖性激酶(CDKs)抑制剂丁内酯I(BL-Ⅰ)对卵母细胞的超微结构和发育潜力的影响.BL-Ⅰ能可逆性抑制卵母细胞减数分裂恢复,有望改善卵母细胞发育至囊胚的能力.
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体外成熟的卵母细胞胞质成熟的评价指标
卵母细胞的体外成熟培养(in vitro maturation,IVM)是辅助生殖技术的重要过程之一.优质的IVM的卵母细胞必须是细胞核和细胞质同步成熟,以保证成功受精、胚胎正常发育乃至健康子代的出生.目前,细胞核成熟的评价标准已得到共识,而细胞质的成熟却表现复杂,尚缺乏有效的观察评价指标.近年来研究发现,卵母细胞成熟时其超微结构、一些信号分子和细胞因子均发生某些变化,这为评价细胞质成熟提供了依据.
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IVF中卵母细胞线粒体的治疗进展
卵母细胞线粒体是评价卵母细胞质量的重要指标之一,与精卵结合、胚胎发育密切相关.本文基于辅助生育技术中存在胚胎质量优良却移植失败的现象,对线粒体的结构及作用、影响因素和卵母细胞线粒体病变在生殖领域的治疗现状进行综述.
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内皮素-1调节小鼠生发泡期卵母细胞体外成熟作用的实验研究
目的 研究内皮素-1(ET-1)对小鼠未成熟卵母细胞生发泡破裂(GVBD)、第一极体(PBⅠ)排出的影响. 方法 昆明系雌性小鼠生发泡(GV期)卵母细胞分为去卵丘裸卵(DO)组及卵丘卵母细胞复合体(COC)组,在体外培养条件下,观察ET-1对两组GVBD、PBⅠ形成的量效和时效关系. 结果 (1) DO在10-9、10-8、10-7、10-6mol/L ET-1作用3、6、9、12、24 h对其成熟分裂无明显影响(P＞0.05);(2)COC在10-8mol/L ET-1作用6 h能显著抑制GVBD率(P＜0.05),在 10-7、10-6mol/L ET-1作用6 h极显著抑制GVBD率(P＜0.01);在10-8mol/L ET-1作用12 h明显抑制PBⅠ率(P＜0.05), 10-7、10-6mol/L ET-1作用12 h极显著抑制PBⅠ率(P＜0.01). 结论 ET-1对COC体外成熟具有抑制作用并呈剂量依赖性,对DO体外成熟无明显影响.
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短期营养不良对雌性小白鼠生殖能力的影响
目的 研究短期营养不良对雌性小白鼠生殖能力的影响.方法 将40只10周龄雌性小白鼠随机均分为研究组及对照组.研究组取卵前36 h仅供给饮水；对照组正常饮食.采用体外受精(IVF)的方法,观察两组小鼠的获卵数、卵母细胞成熟度及卵裂率,取卵前检测两组小鼠卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)以及雌二醇(Ez)水平.结果 研究组雌鼠平均获卵数(2.80±1.24),对照组雌鼠平均获卵数(4.00±1.17)；卵母细胞第一极体排出率及卵裂率研究组分别为12.5％、14.3％,对照组分别为88.8％、70.4％.研究组FSH、LH及E2分别为(1.32±0.49)IU/L、(2.08±0.39)IU/L及(13.03±1.68)pmol/L,对照组分别为(4.45±0.72)IU/L、(15.72±2.38)IU/L及(133.69±6.95)pmol/L.两组所有观察指标均具有极显著差异(P＜0.01).结论 短期营养不良可明显降低小白鼠获卵数及卵子成熟度,减弱卵母细胞的IVF能力.
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冻融兔卵母细胞培养不同时间再激活效应的研究
目的 探讨冻融兔卵母细胞行卵胞浆内单精子注射(ICSI)后,不同培养时间、不同激活方法,卵母细胞受精及胚胎发育能力.方法 共收集兔卵母细胞470枚,玻璃化冷冻,解冻行ICSI后培养半小时,分为3组激活:组1 (n=46):钙离子激活;组2 (n=40):氯化锶(SrCl2)激活;组3 (n=33):无水酒精激活;再同样方法解冻一部分卵母细胞,ICSI后培养1 h,分为2组激活:组4 (n=30):钙离子激活;组5 (n=26):氯化锶激活;对照组(n=39):ICSI后直接培养,不激活.各组得到的囊胚玻璃化冷冻,受体兔HCG准备后,胚胎解冻后移植.结果 卵母细胞解冻行ICSI后,组5的卵母细胞受精率、分裂率和囊胚形成率高,分别为53.8%,26.9%和7.7%,所获囊胚的母兔可能怀孕.结论 冷冻卵母细胞解冻行ICSI后,适当延长培养时间,使用合适的激活方法可能会提高卵母细胞的受精以及早期胚胎发育能力.
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抑癌基因RB1在小鼠不同发育阶段卵母细胞中的表达及甲基化状态的研究
目的 研究抑癌基因RB1在小鼠不同阶段卵母细胞中的mRNA表达及DNA甲基化的状态,旨在探讨RB1基因在卵母细胞生长发育中的作用,为胚胎植入前肿瘤的诊断提供理论基础. 方法 采用改良的逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测RB1在不同发育阶段卵母细胞[GⅤ期(生殖泡期)、MⅠ期(第一次减数分裂中期)、MⅡ期(第二次减数分裂中期)]中的mRNA表达,即细胞裂解后直接逆转录+全转录扩增cDNA+荧光定量PCR扩增方法检测不同发育阶段卵母细胞的相对表达量.同时还进行DNA甲基化的研究:细胞裂解后直接进行亚硫酸盐处理,再进行半巢式PCR扩增出目的片段,把目的片段进行T载体(TA)克隆测序RB1在不同阶段卵母细胞中的甲基化状态. 结果 RB1在小鼠GⅤ期、MⅠ期、MⅡ期卵母细胞的表达量分别是:(0.054±0.004)、(0.080±-0.005)、(0.101±0.005),RB1在MⅡ期中的表达量约是GⅤ期的2倍,差别具有统计学意义(P＜0.05).RB1甲基化:MⅠ期和MⅡ期卵母细胞的24个CpG位点C完全变成T,所有CpG位点完全非甲基化.GⅤ期偶见1～2个CpG位点甲基化,所有CpG位点基本完全非甲基化. 结论 RB1 mRNA随着卵母细胞的生长发育表达量不断增加,RB1 DNA在卵母细胞(GⅤ～MⅡ)中尚未发生甲基化.
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小鼠卵子发生过程中核糖体RNA基因扩增的测定
目的了解小鼠卵母细胞成熟过程中是否有核糖体RNA基因(rDNAs)的扩增. 方法选用4～5周龄小鼠,分离卵母细胞,提取基因组DNA,以小鼠rDNA启动子区及编码区的两个序列为研究指标,采用引物5'末端[32P]标记的聚合酶链反应(PCR)方法,比较小鼠卵母细胞和体细胞的rDNA拷贝数.采用转录连续测定法对rDNAs的转录进行动态观察.结果在小鼠生长卵母细胞中未检测到rDNA的扩增.结论在小鼠早期卵母细胞的大量蛋白质合成中,不是通过扩增rDNA,而是依赖于其他的调节因子来促进rRNA的合成以满足需求.
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小鼠卵母细胞中14-3-3蛋白亚型的表达
目的 对小鼠卵母细胞生发泡期(GV)、生发泡破裂期(GVBD)的14-3-3蛋白亚型表达进行鉴定. 方法 RT-PCR法检测GV、GVBD期卵母细胞中14-3-3蛋白7个亚型的mRNA水平,蛋白免疫印迹(Western blotting)法检测其蛋白表达水平. 结果 检测了7个14-3-3亚型(β,γ,ε,σ,ζ,τ和η)mRNA的表达水平,结果显示,在GV期只有14-3-3β和14-3-3ε两个亚型表达,并且14 3 3ε mRNA水平显著高于14-3-3β(P＜0.01).在蛋白水平上,在小鼠卵母细胞GV期和GVBD期均检测到14-3-3ε亚型蛋白表达,未检测到14-3-3β3蛋白表达. 结论 14-3-3蛋白ε亚型在小鼠卵母细胞GV、GVBD期均稳定表达.
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Syntaxin4参与小鼠卵母细胞皮质颗粒的转运机制的研究
目的 探讨Syntaxin4参与小鼠卵母细胞皮质反应及对皮质反应的影响.方法 RT-PCR和Western blot检测Syntaxin4在小鼠卵母细胞表达;免疫荧光验证Syntaxin4与皮质颗粒在卵母细胞中的定位,分析Syntaxin4对小鼠卵细胞皮质反应的影响;活细胞实时拍摄系统观察降低Syntaxin4表达后皮质反应的动态变化.结果 (1)Syntaxin4在小鼠卵母细胞中表达,且在GV期和MII期无明显变化;(2)Syntaxin4与小鼠卵细胞皮质颗粒共定位;(3)活细胞实时拍摄证实降低Syntaxin4的表达后阻碍了皮质反应的进行.结论 Syntaxin4参与小鼠卵细胞皮质反应.
