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Ki-67在浆膜腔积液鉴别诊断中的应用
目的：探讨Ki-67抗体对鉴别浆膜腔积液中良恶性细胞的价值，解决伴浆膜腔积液的疑难病例的诊断。方法：用Ki-67单克隆抗体标记47例浆膜腔积液涂片标本，每张涂片计数1000个细胞中的阳性细胞数，用百分率表示阳性指数，同时对涂片作HE染色。结果：恶性积液组Ki-67指数为34.89％，良性组为0.72％，两者差异具有显著性(P＜0.005)。结论：浆膜腔积液涂片HE染色诊断结合Ki-67标记，可提高恶性浆膜腔积液细胞学的阳性诊断率，可作为临床鉴别良恶性浆膜腔积液的参考指标。
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胸、腹腔积液脱落细胞石蜡包埋技术的应用
目的 探讨胸、腹腔积液脱落细胞石蜡包埋技术与免疫细胞化学检测相结合对提高胸、腹腔积液恶性肿瘤细胞诊断和鉴别诊断的方法.方法 应用胸、腹腔积液脱落细胞石蜡包埋技术对71例胸、腹腔积液疑难病例进行钙结合蛋白(Calr)、间皮细胞抗体、细胞角蛋白CAM5.2、广谱细胞角蛋白(CK)进行免疫细胞化学检测.结果 HE染色的良性胸、腹腔积液切片中可见间皮细胞、组织细胞、淋巴细胞及纤维蛋白成分；恶性者可见异型细胞染色质粗、散在或成团分布.免疫细胞化学染色显示背景干净,对比度好,阳性细胞数多,阳性信号定位准确.结论 胸、腹腔积液脱落细胞石蜡包埋技术结合免疫细胞化学检测对提高胸、腹腔积液恶性肿瘤细胞的诊断有重要意义.
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细胞角蛋白和钙结合蛋白在胸膜腔积液细胞学鉴别诊断中的价值
目的 探讨细胞角蛋白(CK)和钙结合蛋白(CR)免疫细胞化学标志物在胸膜腔积液转移癌细胞和反应性增生的间皮细胞鉴别诊断中的价值.方法 选用胸膜腔积液标本50例,每例均制备细胞石蜡块并用细胞石蜡块切片行免疫细胞化学染色.结果 23例恶性积液中有21例癌细胞CK呈阳性表达,占91.3％;27例良性积液中有3例间皮细胞阳性表达,占11.1％,两种不同性质胸腔积液的CK阳性率差异有统计学意义(P＜0.01).27例良性积液中有25例间皮细胞CR呈阳性表达,占62.6％;23例恶性积液中有3例癌细胞CR呈阳性表达,占13％,两种不同性质胸腔积液的CR阳性率差异有统计学意义(P＜0.01).结论 CK和CR抗体联合检测对胸膜腔积液中转移癌细胞和反应性增生的间皮细胞的鉴别诊断具有重要的临床应用价值.
关键词： 胸膜腔积液 免疫细胞化学 转移癌细胞 反应性增生的间皮细胞 -
牛磺酸对大鼠脑神经元细胞Fos蛋白表达的影响
目的研究牛磺酸对神经细胞c-fos基因表达的影响,以期从信号传导的角度探讨牛磺酸促进神经系统生长发育、增殖分化,增强动物学习记忆能力的机制.方法本实验利用图像分析仪通过免疫细胞化学的方法,分别对培养的大鼠海马神经元和整体动物脑神经细胞c-fos基因表达的影响进行了分析.结果牛磺酸浓度在0.4～6.4 mol/L时,Fos免疫反应阳性(Fos-like immunoreactivity,Fos-LI)神经元百分率较对照组(加入等量生理盐水)明显增高,表明牛磺酸能增加Fos-LI神经元细胞数.对Fos-LI神经元细胞进行图像分析,测其平均光密度,发现0.1～6.4 mmol/L牛磺酸可明显增高Fos-LI神经元细胞的光密度,表明牛磺酸能够增加Fos蛋白产生的量,即增加c-fos基因表达的强度.整体动物实验发现,牛磺酸可诱导大鼠脑神经细胞c-fos基因快速表达,合成Fos蛋白.Fos-LI胞核主要分布于颞叶、下丘脑等区域,在海马主要分布于CA4和CA1区.而这些脑区与学习记忆密切相关,这对于探讨牛磺酸提高大鼠学习记忆的机制有重要意义.结论牛磺酸不仅能增加海马神经元细胞的Fos-LI百分率,还在一定程度上增强c-fos基因表达的强度.这可能是牛磺酸增强动物学习记忆的原因之一.
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脑膜癌病的脑脊液细胞学与临床观察
目的研究脑膜癌病(LC)的脑脊液(CSF)细胞学、临床及神经影像学特点. 方法回顾分析16例LC.结果 16例LC患者中,男6例、女10例,年龄29～69岁.亚急性起病,头痛14例,伴恶心、呕吐、眼底视乳头水肿;出现脑膜刺激征12例;双下肢无力5例,排尿困难3例;意识丧失、抽搐7例;视力减退5例,眼肌麻痹4例,听力下降1例,吞咽困难2例,偏瘫1例,多饮多尿1例.消瘦10例,低热5例.7例有癌症病史.CSF压力升高13例, CSF常规计数白细胞升高10例,蛋白均升高,糖减低9例.CSF细胞学均见癌细胞, 4例行免疫组化检查示,肿瘤细胞上皮膜抗原和细胞角蛋白阳性.临床及病理学确定来源肺癌6例、乳腺癌3例、胃癌2例、卵巢癌1例,来源未明4例.结论 LC可作为首发症状和主要症状而缺少肿瘤原发灶表现.表现为亚急性脑膜炎,进行性颅内压升高,常合并多脑神经和脊髓神经根损害.CSF细胞学是确诊LC主要方法,结合免疫细胞化学方法对确诊有重要帮助.
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重症肌无力中枢神经系统损害与Fas关系
目的探讨细胞凋亡与重症肌无力(MG)中枢神经系统(CNS)损害之间关系.方法将MG患者血中提取的IgG注入大鼠脑室系统,建立大鼠MG CNS损害模型,用免疫细胞化学方法观察Fas在脑组织中的表达. 结果在MG组脑内Fas抗原表达于大脑皮质区和海马的神经元胞膜和树突上,而正常对照组脑内无阳性Fas抗原表达.结论 Fas-FasL凋亡过程在MG CNS损害中可能起一定作用.
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免疫细胞化学诊断脑膜癌病
脑膜癌病(meningeal carcinomatosis,MC)的诊断主要依靠脑脊液(CSF)细胞学检查.但在疾病早期,由于CSF中肿瘤细胞数极少以及一些反应性白细胞增多的影响,早期诊断较困难,单克隆抗体免疫细胞化学法的使用,提高了MC的早期诊断率.此文回顾报道9例确诊为MC共18份CSF的单克隆抗体免疫细胞化学与常规CSF检查结果.
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中枢神经系统病毒感染脑反应性星形细胞内皮素-1的表达
为探讨内皮素(endothelin,ET)在中枢系统病毒感染性疾病的作用,利用免疫细胞化学方法对12例中枢系统病毒感染尸检脑组织标本进行了研究.
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人脑胶质瘤干细胞初步研究
目的 从人脑胶质瘤体外细胞系和胶质瘤组织中分离、鉴定肿瘤干细胞,为进一步研究其生物学特性奠定基础.方法 将人胶质瘤SHG44细胞和手术标本制成的单细胞,分别用含血清培养基(DMEM+10% FBS)和无血清培养基(DMEM/F12,添加bFGF、LIF和EGF)培养.用CD133免疫磁珠筛选,流式细胞仪和免疫荧光共聚焦显微镜检测干细胞、祖细胞和分化细胞特异性标志物.结果 SHG44细胞培养1周,用CD133磁珠分离得到的CD133+细胞的比例:血清组为0.021%,无血清组为1.2%.流式细胞仪检测:(1)Hoechst 33342-细胞比例:血清组为1.5%,无血清组为16.4%;(2)nestin+细胞比例:血清组为7.2%,无血清组为51.05%;(3)免疫磁珠分离的CD133+细胞再用流式细胞仪测得的CD133+细胞为83.02%,CD133-细胞群中有3.32%的CD133+细胞.标本源肿瘤细胞在无血清条件下培养两天后CD133磁珠分离CD133+细胞比例为4%.CD133+细胞在分化不同阶段共表达或分别表达祖细胞标志物nestin、神经元和胶质细胞特异性标志蛋白MAP2和GFAP.结论 在胶质瘤细胞系和胶质瘤组织中均存在CD133+的脑肿瘤干细胞,具有自我更新和多向分化潜能、在无血清培养下细胞球体中CD133+细胞仍占少数,而nestin+细胞占多数,可作为进一步研究脑肿瘤干细胞生物学特性的实验材料在相关领域中的应用.
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表面活性剂在脱落细胞免疫细胞化学技术中的应用
目的 探讨表面活性剂聚乙二醇辛基苯基醚(Triton X-100)在免疫细胞化学染色中提高细胞阳性率的重要作用.方法 用分组对照方法把采集的27例胸、腹水标本分成A、B、C组,A、B组使用表面活性剂Triton X-100,C组作为阴性对照组不使用表面活性剂Triton X-100,分别做增殖细胞核相关抗原、癌胚抗原、白细胞共同抗原3种免疫细胞化学标记.结果 加入表面活性剂Triton X-100的A、B组细胞阳性率明显高于未加入表面活性剂Triton X-100的C组.结论 表面活性剂Triton X-100在免疫细胞化学中可以增加涂片中阳性细胞表达,减少非特异性着色、降低背景.
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早期肺癌外周血中肿瘤细胞的检测及其临床意义探讨
目的探讨检测早期肺癌循环肿瘤细胞(CTCs)的可行性及临床意义.方法应用免疫磁性分离(IMS)+免疫细胞化学(ICC)法及RT-PCR法检测3组标本(A组:早期肺癌组,15例;B组:肺部良性病变组,20例;C组:健康志愿者组,20例)的CTCs,并对A组患者进行了6～9个月的随访.结果应用IMS+ICC法检测,A组有5例阳性,B、C组均为阴性;应用巢式RT-PCR法检测,A组7例、B组8例、C组6例检测为阳性.A组患者随访中有2例术前及术后检测均为阳性的患者发生了复发.结论 IMS+ICC法是检测早期肺癌CTCs的敏感方法;早期肺癌患者CTCs的检出可能与临床预后有一定的关系.
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人前列腺癌相关基因pc-1表达产物在细胞内的定位研究
目的:研究pc-1基因表达产物在细胞内的定位.方法:采用巢式PCR技术,从原始克隆质粒中扩增出可编码蛋白分子的pc-1 cDNA片段,分别将其克隆入含EGFP和MYC标签的真核表达载体中;用脂质体介导法将其转染入人前列腺癌细胞C4-2中;通过免疫细胞化学方法和激光共聚焦显微镜技术检测pc-1表达产物在细胞内的定位.结果与结论:pc-1表达产物定位于细胞质中,为进一步研究其生理、生化功能奠定了基础.
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免疫细胞化学中不同固定剂对核蛋白检测效果的影响
目的:观察免疫细胞化学中不同固定剂对乳癌易感基因(brca1)和表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)在MCF-7细胞中的亚细胞分布的影响.方法:采用免疫细胞化学的方法,按照ABC试剂盒提供的操作步骤观察用不同固定剂及不同缓冲液时BRCA1和EGF在MCF-7细胞中定位情况.结果:如果细胞用3.7%的甲醛-PBS溶液固定,抗体稀释液及细胞冲洗液皆用PBS,则BRCA1和EGF均着色于细胞浆;若用3.7%的甲醛-PBS溶液固定细胞, 而抗体稀释液及细胞冲洗液更换为含有0.1%吐温20或0.05%TritonX-100的PBS,则BRCA1和EGF均主要着色于细胞核.结果还表明,用纯甲醇、95%乙醇或冰醋酸∶甲醇(1∶3)固定细胞,无论是单用PBS或是含有化学去垢剂的PBS作为抗体稀释液及细胞冲洗液, BRCA1和EGF均主要着色于细胞核.结论:用免疫细胞化学技术检测细胞核蛋白时,好选用甲醇作为固定剂.如果用甲醛固定细胞,建议用能给核膜打孔的化学去垢剂进一步处理细胞,否则会导致错误结果出现.
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基于报告基因的雌激素受体β亚型激动剂细胞筛选模型的建立
目的 建立基于报告基因和雌激素受体β(estrogen receptor β,ERβ)亚型信号通路的药物筛选模型,以期发现ERβ亚型激动剂.方法 构建带有雌激素应答序列(estrogen responsive element,ERE)靶序列和报告基因的诱导性表达载体pTAL-ERE-SEAP,并将其转入人胚肾(HEK293)细胞中,筛选报告基因分泌型碱性磷酸酶(secreted alkaline phosphatase,SEAP)表达受雌二醇(17β-estradiol,E2)诱导的阳性克隆.选取相关核受体配体进行模型的特异性考察,同时考察模型的稳定性及时效量效关系,以及免疫细胞化学染色鉴定转染后ERβ的表达情况.利用此模型对本实验室样品库中的2 622个化合物进行筛选.结果 转染pTAL-ERE-SEAP的HEK293细胞中,SEAP报告基因的表达受E2的诱导并呈剂量与时间依赖关系,E2对阳性克隆细胞无增殖作用,本模型的Z'因子值为0.7,免疫细胞化学染色结果表明,转染后ERβ表达、地塞米松以及其他配体的诱导表达率低.结论 利用此模型通过测定SEAP报告基因的诱导表达水平可筛选ERβ亚型激动剂.
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慢性给予吗啡诱导大鼠蓝斑核Fos蛋白表达
本文研究吗啡戒断大鼠蓝斑核Fos蛋白表达情况.采用连续5dip吗啡建立大鼠吗啡依赖模型,纳洛酮催促后对桥脑蓝斑核进行Fos蛋白的免疫细胞化学实验(ICC).结果发现吗啡组大鼠蓝斑核神经元Fos蛋白表达明显.这一结果从蛋白表达的角度证明蓝斑核在阿片类药物戒断中的作用机理.
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苦龙胆脂苷促进肝癌细胞系Huh-7细胞凋亡的PKA/C调节机制
目的 本实验分析苦龙胆脂苷对肝癌细胞系Huh-7细胞凋亡的促进作用及PKA/C的调节机制,为相关的新药开发提供参考.方法 将生长状态良好的肝癌细胞系Huh-7细胞随机分为4组:对照组、苦龙胆脂苷组、苦龙胆脂苷+蛋白激酶A(PKA)抑制剂H89组和苦龙胆脂苷+PKC的抑制剂H7组(n=8).除对照组肝癌细胞外,其余各组细胞给予苦龙胆脂苷共培养6 h(30 mmol ·L-1),H89组和H7组细胞于培养的后3h加入H89(10 mmol·L-1)和H7(10 mmol·L-1)共培养.Western Blotting和免疫细胞化学法检测细胞凋亡相关蛋白及MEK/ERK通路蛋白的表达,DAPI染色分析细胞凋亡小体情况.结果 与对照组相比,苦龙胆脂苷能够显著的提高Bax、Caspase 3和Caspase 9(P＞0.05)而降低Bcl2蛋白的表达(P＞0.05),同时促进凋亡小体形成和提高Ras/Raf/MEK/ERK1/2蛋白表达(P＞0.05);PKA抑制剂H89能显著的恢复上述蛋白的异常表达(P＞0.05)而PKC抑制剂H7无明显效果(P＞0.05).结论 苦龙胆脂苷能有效促进肝癌细胞系Huh-7细胞凋亡及MEK/ERK信号通路的激活,且此过程与PKA的调控作用密切相关.
关键词： 苦龙胆脂苷 细胞凋亡 MEK/ERK信号通路 免疫细胞化学 抑制剂 -
药物流产出血者刮宫组织中孕酮受体的表达
为研究孕酮受体(PR)与米非司酮抗早孕出血残留蜕膜和绒毛的关系,用免疫细胞化学LSAB法显示出血后刮出组织(19例)中的PR.发现PR在子宫内膜基质细胞、腺上皮细胞、肌上皮细胞、血管内皮细胞和平滑肌细胞多呈阳性或强阳性,在残留绒毛呈弱阳性,而在残留蜕膜细胞多为阴性.PR在子宫内膜和残留蜕膜中的分布有显著性差异(P＜0.01).提示药流后蜕膜和绒毛残留与蜕膜中孕酮受体无关,而内膜中孕酮受体的作用有待进一步研究.
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药物流产后子宫刮出物的组织病理学和免疫细胞化学研究
为探讨药物流产后阴道出血和子宫内膜中胎盘残留组织的关系,用组织病理学和免疫细胞化学方法,对药物流产后刮出组织(20例)和正常流出组织(10例)进行了研究.组织病理学显示:刮出内膜组织中都含有残留蜕膜组织,后者多数蜕膜细胞变性坏死,蜕膜和内膜都有大量炎性细胞浸润,并具有不同步发育的腺体和间质.免疫细胞化学方法显示:正常流出或刮出组织的毛细血管内皮因子Ⅷ相关抗原和胎盘碱性磷酸酶(PALP)呈阳性反应.残留的蜕膜组织中可见结构和功能正常的毛细血管.提示:子宫内膜中的炎细胞浸润,内膜不同步发育,残留蜕膜的某些部位因正常血液供应而继续生长,可能是药物流产后出血的原因.
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人胎肝干细胞的分离、培养和鉴定
为探讨人胎肝中干细胞的存在并对其生物学特性进行鉴定,采用原代分离法培养人胎肝细胞集落,免疫组化鉴定细胞集落分子标志物的表达.结果:从人胎肝组织中成功分离表达甲胎蛋白(AFP)、白蛋白、波形蛋白等标志物的胎肝干细胞集落.证实人胎肝中同样存在具有干细胞特性的原始细胞.这一发现为肝干细胞的生物学特性的深入研究奠定了良好的基础.
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细针穿刺标本Midkine检测在甲状腺微小乳头状癌中的临床意义
目的 探讨细针穿刺标本Midkine检测在甲状腺微小乳头状癌中的临床意义.方法 选取2014年8月～2017年5月我院收治的50例甲状腺微小乳头状癌患者、30例结节性甲状腺肿患者的术中细针穿刺标本作为研究对象,观察两类病理类型免疫细胞化学技术检测Midkine的表达.结果 甲状腺微小乳头状癌细针穿刺标本Midkine的表达明显高于结节性甲状腺肿,差异有统计学意义(P＜0.01).有淋巴结转移甲状腺微小乳头状癌患者的细针穿刺标本Midkine表达阳性率高于无淋巴结转移患者,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 检测细针穿刺标本Mid-kine的表达可为甲状腺微小乳头状癌的正确诊断和淋巴结转移预测提供帮助.
