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CytoSpin4细胞离心涂片机在细胞学中的应用价值
常规脱落细胞学标本细胞来源于生理或病理情况下自然脱落下来的细胞,如:痰、胸腹腔积液、尿等[1].对于细胞学诊断医师而言,优质的细胞学制片效果至关重要,是做出正确病理诊断的关键所在[2].本文通过对细胞学标本分别进行手工制片、细胞蜡块和CytoSpin4细胞离心涂片机制片,对制片效果进行对比分析,对疑为恶性的标本采用细胞离心涂片机制片并进行相应的免疫细胞化学检测,探讨细胞离心涂片机在细胞学诊断中的应用价值.
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高温蒸汽热修复法在免疫细胞化学中的应用
免疫细胞化学已经成为细胞病理学中常使用的辅助诊断方法.该方法借助于抗原抗体的特异性结合,通过标记抗体能发现与之结合的抗原存在[1].免疫细胞化学技术(ICC)分为2种,一种方法是通过离心或直接收集将细胞聚拢,再用蛋清或琼脂包裹后形成细胞块进行固定、脱水、包埋、切片,再按照免疫组化步骤进行操作.另一种方法是将细胞标本置于载玻片上(多为液基涂片),经固定后直接进行免疫细胞化学染色.本文着重探讨后一种方法中的技术难点.
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变异型克雅病的实验室诊断
(英)Ironside JW……∥Histopathology,2000,37:1-91990~1998年间,克雅病(CJD)监测实验室拟诊CJD病例646例,其中变异型克雅病(VCJD)33例,本文分析了其神经病理学特征和有关的生化特征.作者采用免疫细胞化学并利用冷冻组织作PrpRES的Western blct分析,研究其与临床和遗传学资料之间的关系.
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骨髓涂片的多药耐药检测技术
随着免疫细胞化学(ICC)技术的深入开展,医院病理科开始接收越来越多的需要做多药耐药指标检测的骨髓涂片标本,旨在为白血病患者提供个体性化疗的相关依据.为做好骨髓涂片的ICC染色,确保实验结果的可靠性,本室对常规ICC染色方法和操作程序进行了改良,取得了良好的效果.
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一种能使免疫组织化学DAB显色变浅的方法
免疫组织化学(免疫组化)或免疫细胞化学是应用免疫学或组织化学原理,对组织切片或细胞标本中的某些化学成分进行原位定性、定位或定量的研究.方法是利用抗原与抗体结合所具有的高度特异性,先将组织或细胞中的某些化学物质提取出来,以此作为抗原或半抗原,通过免疫获得特异性抗体,用此抗体去探测组织或细胞中的抗原物质.
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丝氨酸蛋白酶级联相关性斯氏按蚊血细胞分析
目的分析与丝氨酸蛋白酶级联相关性的斯氏按蚊血细胞.方法采用姬氏染色法观察血细胞类型,并利用免疫细胞化学技术检测斯氏按蚊血细胞内前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶,对酶学定位阳性细胞类型进行初步鉴定.结果经姬氏染色,斯氏按蚊血细胞主要为颗粒细胞,前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶主要分布于颗粒细胞和浆细胞内.结论斯氏按蚊血细胞可结构性表达前酚氧化酶和丝氨酸蛋白酶,颗粒细胞和浆细胞可能为丝氨酸蛋白酶级联成分来源的主要细胞类型.
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浆膜腔积液恶性肿瘤细胞鉴别诊断标志物研究进展
良性和恶性浆膜腔积液的诊疗和预后不同,因此对浆膜腔积液恶性肿瘤细胞的鉴别诊断具有重要的临床意义.传统的浆膜腔积液细胞学检杳特异性高,但敏感性较低,特别是转移性癌细胞和间皮细胞的形态学上有交叉,鉴别诊断常很困难.随着免疫细胞化学和分子遗传学技术的进步,越来越多的标志物开始被应用于浆膜腔积液恶性肿瘤细胞的鉴别诊断.一、闭合蛋白(claudin)细胞间的紧密连接由咬合蛋白、闭合蛋白和连接黏附分子构成.目前已发现闭合蛋白家族由24个跨膜蛋白亚型组成,相对分子质量为20 000 ~27 000[1].闭合蛋白表达异常所致的细胞间紧密连接功能的失常,可能是影响肿瘤细胞发生、发展的原因之一.研究显示,闭合蛋白-1、-7在宫颈癌中表达显著增高,闭合蛋白-3、4在浆液性卵巢癌中呈高表达,而闭合蛋白-4的低表达与胃癌细胞的低分化、浸润深度和转移情况密切相关[ 2-3].
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现代免疫细胞化学和荧光图像技术
近20年来,生命科学、计算机科学、物理学、化学、生物信息学取得了巨大进步.人们已经可以表达、合成和突变体内的各种蛋白及其片段;已经可以随心所欲的制备出数以万计的抗各种天然蛋白、突变蛋白、翻译后经各种修饰(磷酸化、甲基化、乙酰化等)的蛋白、各种蛋白亚区、不同基序的抗体以及标记不同的细胞器的特异性抗体;已经可以合成许多稳定性好,不易淬灭,不受pH环境影响,水溶性好,发射光谱特异,适于多重标记的有机荧光色素,如分子探针Alexa Fluor系列[1]、Amersh的Cy系列[2]以及其他活体荧光标记分子;如FIAsH,ReAsH等二砷荧光色素[3]和O6-苯基鸟嘌呤荧光素(BGFL)[4],纳米量子颗粒(quantum dot)[5, 6]和荧光蛋白(GFP)[7]等;共聚焦扫描显微镜、全内反射荧光显微镜[8,9]及其他三维、四维荧光显微镜[10,11]和荧光图像数字图像系统的出现,又大大提高了对荧光信号的感知水平,即可感知细胞内低丰度(甚至单个分子)的标记荧光,其时间分辨率已可达微秒水平,其空间分辨率亦可与电镜匹敌[12].
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免疫细胞化学在细胞病理学中的应用
免疫细胞化学(ICC)在细胞病理学中是一很有用的辅助诊断方法.目前在甲醛固定的石蜡包埋切片和冷冻组织切片中应用的抗体也多数能应用于乙醇或甲醛固定的细胞涂片[1-3].免疫细胞化学常用的标本制备方法有4种:直接涂片(CS)法、细胞离心涂片法(cytospin)、细胞块石蜡包埋(CB)法和液基薄层制片法.
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免疫细胞化学在浆膜腔积液中对腺癌细胞及反应性间皮细胞的鉴别价值
一、材料与方法1.材料:收集我院2003年6月至2004年6月门诊及住院患者96例浆膜腔积液标本,其中胸水72例,腹水18例,心包积液6例.患者男62例,女34例,年龄27~84岁.
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抗原微波热修复对乳腺癌雌激素受体和孕激素受体免疫组织化学检测结果的影响
免疫组织化学是目前乳腺癌激素受体检测的常规方法,但免疫组织化学检测易受多种因素的影响,其标准化程度令人担忧.英国国家免疫细胞化学外部质量评估方案(NEQAS-ICC)曾评估200余个实验室对同一例乳腺癌组织进行的雌激素受体(ER)染色,发现仅36%的实验室获得准确的检测结果[1],提示抗原修复是影响免疫组织化学检测结果主要的因素,而激素受体水平低的癌组织进行免疫组织化学染色更易受到各种因素的影响.
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胸(腹)水免疫细胞化学方法改进
免疫组织化学技术,已成为组织学诊断中不可缺少的辅助手段,特别是在肿瘤的组织学诊断、鉴别诊断中发挥了重要的作用.但在细胞学诊断中,特别是浆膜腔积液标本,却因易脱片、细胞涂片面积大,耗费试剂多、标本制作重复性差等方面的原因,不能像病理组织学作免疫组织化学那样常规开展.我们在临床细胞学检验中,对浆膜腔积液标本在做免疫细胞化学(ICC)前,进行必要的处理,克服以上影响其开展的因素,使之能像病理组织学作免疫组织化学一样成为病理科的常规工作,并获得了满意的结果.
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细胞和细胞核微阵列的制作及其应用
组织微阵列(TMA)又称组织芯片(tissue chip) 技术[1].基于其优点,新近学者们考虑能否将细胞也同样制成相似的阵列进行研究.我们利用打过孔的石蜡为模具,将培养悬浮的细胞和从石蜡包埋组织中提取的细胞核制成细胞和细胞核的微阵列,并将其用于荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization, FISH)、mRNA原位杂交、免疫细胞化学基因蛋白的检测,证明其效果良好,具有组织微阵列的优点.
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p16/Ki-67双染检测助力子宫颈癌前病变诊断
2016年6月18日,在中华医学会第十四届全国细胞病理学会议暨细胞病理学读片会上,中山大学附属第一医院病理科主任余俐教授同与会专家深入交流并探讨了CINtec?PLUS p16/Ki-67免疫细胞化学双染检测对于辅助宫颈癌前病变诊断的重要性。
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中华医学会第十二届全国细胞病理学会议暨细胞病理学读片会通知
为进一步提高细胞病理学诊断与技术的水平,增进学术交流和相互了解,推动我国细胞病理学更好更快的发展,由中华病理学分会细胞病理学组主办、江苏省病理学会协办的中华医学会第十二届全国细胞病理学会议暨细胞病理学读片会定于2014年6月13至16日在江苏省扬州市召开。会议将邀请国内外知名细胞病理学专家结合细胞学读片和病例讨论进行专题讲座,包括宫颈细胞学、非妇科脱落细胞学、细针穿刺细胞学诊断等的专题讲座。邀请有关专家进行常规细胞病理学技术、免疫细胞化学和分子生物学等技术在细胞学中的应用、质量控制与标准化的讲座。会议期间将召开细胞病理学组委员会并进行换届改选。
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人乳头状瘤病毒 L1壳蛋白表达与宫颈病变程度相关性研究
目的:探讨人乳头瘤病毒( human papillomavirus,HPV)感染宫颈上皮细胞L1壳蛋白表达对宫颈病变的进展及宫颈癌的发生的临床意义。方法病例组共259例,根据液基薄层细胞检测(TCT)结果不同分为未见上皮内病变细胞或恶性细胞(NILM)103例、非典型鳞状细胞(ASCUS)91例、低度鳞状上皮内病变(LSIL)36例、高度鳞状上皮内病变(HSIL)23例和鳞状细胞癌(SCC)6例。同时选择50例健康体检者作为对照组。分别用PCR-反向点杂交法检测HPV 23种亚型和免疫细胞化学法检测L1壳蛋白表达。结果对照组PCR和L1壳蛋白表达结果均呈阴性。病例组NILM、ASC、LSIL、HSIL和SCC患者HPV感染率分别为23.3%、69.2%、83.3%、87.0%和100%,HPV-PCR阳性上述患者高危型 HPV ( HR-HPV )的构成比分别为79.2%、92.1%、96.7%、100%和100%。NILM、ASC、LSIL、HSIL 和 SCC 患者 HPV L1壳蛋白表达阳性率分别为25.2%、31.9%、63.8%、17.4%和0%。结论随宫颈病变的进展HPV感染率和HR-HPV构成比升高,提示本地区HPV感染率和HR-HPV构成比与宫颈上皮内瘤变程度密切相关。 L1壳蛋白检测阳性率随病变早期表达呈上升趋势,晚期呈明显下降,HPV L1壳蛋白的表达与宫颈病变程度有关,可以作为宫颈癌癌前病变的随访指标。
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纳米尺度神经细胞膜蛋白单分子免疫细胞化学三维定位方法的建立
目的建立纳米尺度神经细胞膜表面蛋白单分子三维标记的免疫细胞化学方法.方法应用原子力显微镜,对分布在云母表面的抗NMDAR1亚基IgG-葡萄球菌蛋白A-胶体金颗粒免疫标记复合物分子进行扫描,明确其特定的三维结构作为对照标准,然后扫描结合了免疫标记复合物分子的神经细胞膜表面,对表面形貌作出对比后确定目的抗原的定位和复合物三维结构.并与激光共聚焦免疫荧光方法对比.结果在空白云母表面,免疫复合物分子在原子力显微镜下呈现出均匀分散粒径为49nm的特征性球形结构.在神经元表面结合免疫标记物后可以发现有大量的粒径为53nm 的球形或双球形(短棒状)结构,颗粒均匀,截面为双峰或单峰.而在LSCM下荧光呈颗粒点状分布,为多个FITC聚集显色的结果.结论原子力显微镜下免疫胶体金标记技术可以在纳米尺度对目的膜受体蛋白进行定位和表面三维结构测定.NMDA受体蛋白可以结合1个或2个胶体金复合物,与LSCM相比,原子力显微镜下胶体金标记方法可以对单个膜NMDA受体蛋白抗原进行定位、定性、定量标记测定.
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针吸细胞学及免疫细胞化学在研究转移癌原发灶中的应用
临床既往通过查体、检验、影像学、组织病理学等方法来寻找转移癌的原发灶.前三种方法很难对肿瘤同时做到准确的定位和定性.组织病理学检查需要手术方可进行,难免会给患者带来较大的创伤和痛苦.寻找一种可靠方便的诊断途径成为大家广泛关注的问题.针吸细胞学早在上世纪60年代就有相关的报道并得到广泛的发展.多年来,利用免疫组织化学的方法诊断癌细胞的组织学来源,已经取得了阶段性成果,在一些肿瘤的诊断过程中,免疫组织化学的作用已经变得不可替代,同样的技术也正被应用于免疫细胞化学.
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TI-RADS联合细胞学Galectin-3、HBME-1检测对甲状腺良恶性结节的诊断价值
目的 探讨甲状腺超声恶性风险评估系统(TI-RADS)联合细胞学Galectin-3、HBME1检测在US-FNA诊断甲状腺良恶性结节中的应用价值.方法 前瞻性收集经TI-RADS分类的223个甲状腺结节,行US-FNA、Bethesda分类及细胞学Galectin-3、HBME-1表达检测,并与组织学病理结果进行对照分析.结果 Galectin-3、HBME1多在甲状腺恶性结节中高表达,良性结节中低表达或不表达,两指标的阳性率在良恶性结节间有明显差异(P=0.000);在Bethesda分类不确定性质结节的联合TI-RADS分类及Galectin-3、HBME-1检测并联试验中,联合方法的灵敏度为86.36%、特异度为75%;串联试验中,灵敏度为36.36%、特异度为100%.结论 TI-RADS分类联合Galectin-3、HBME-1检测有助于提高US-FNA诊断甲状腺良恶性结节的准确率.
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乳管冲洗液脱落细胞制片及免疫化学染色的价值
目的 探讨乳腺导管冲洗液脱落细胞制片方法 及免疫化学染色可行性,评估其临床价值.方法 冲洗液行打点涂片,纯甲醇固定,免疫细胞化学染色;切除标本行免疫组化染色.统计分析免疫细胞化学和免疫组织化学染色结果的相关性.结果涂片中可见大量异形性细胞,免疫细胞化学染色Her2阳性者6例,P53阳性者4例.免疫细胞化学和免疫组织化学检查结果显著正相关,相关系数分别为0.6286(P<0.05)、0.5876(P<0.05).结论 乳管冲洗液脱落细胞学诊断乳腺疾病有较高的敏感性,免疫细胞化学法检测乳腺导管冲洗液脱落细胞Her2和P53蛋白方法 可行,结果可靠.能术前了解乳管内微小病灶的生物学特性,有一定的临床应用价值.