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亲子鉴定:做?不做?
亲子鉴定是应用现代生物学、遗传学技术判断父母与子女之间是否存在血缘关系的过程.几个世纪以来,人们一直探寻着亲子鉴定的各种方法,随着科学技术,特别是DNA检验技术的发展,亲子鉴定技术方法日臻完善.在西方发达国家,亲子鉴定已写入法律条款.随着我国社会经济的发展,人们生活观念的改变以及科学和法律意识的增强,做亲子鉴定的社会需求逐年增加,但也由此引出一系列伦理、道德、社会问题,并引发了是否要禁止亲子鉴定的争论.
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小议出生性别比异常的综合治理
第五次人口普查数据表明我国出生婴儿性别比为117,全国0～9岁男孩比女孩多出1 277万人,提示21世纪人口与计划生育工作进入新的发展阶段同时,也面临着凸现的人口结构矛盾,人口与经济、资源、环境的协调和可持续性发展等重大课题的挑战.各种资料显示的出生性别比持续攀高、性别比异常只是一种人口表象,而传统的生育观--对男孩的性别偏好是造成出生性别比异常的根源.现代医学、遗传学技术的进步提供了导致出生性别比异常的技术条件或途径.由此产生的后果则远超过"婚姻拥挤"范畴的社会、经济失调后果.出生性别比异常这远非一个计划生育部门所能解决的问题,必须充分引起全社会的重视,各级政府及相关部门应加强部门配合、综合治理.
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流感病毒的反向遗传学研究进展
反向遗传学是指对病原微生物的cDNA进行目的性修饰,以对其进行功能和表型的分析[1].它是相对于经典遗传学而言的,后者是从生物的性状、表型到遗传物质来研究生命的发生与发展规律.反向遗传学则是在获得生物体基因组全部序列的基础上,通过对靶基因进行必要的加工和修饰,如定点突变、基因插入/缺失、基因置换等,再按组成顺序构建含生物体必需元件的修饰基因组,让其装配出具有生命活性的个体,研究生物体基因组的结构与功能,以及这些修饰可能对生物体的表型、性状有何种影响等方面的内容.与之相关的研究技术称为反向遗传学技术.在病毒学研究中,反向遗传学常利用经修饰的克隆化cDNA用来获得有感染性的病毒,从而可研究这些修饰对表型产生哪些影响.早报道的是正链RNA病毒的反向遗传学系统.将来自正链RNA的病毒全基因组RNA转染真核细胞,可使RNA充任mRNA(s),从而可翻译出病毒蛋白;反过来,这些蛋白又有助于完整病毒的包装.
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分子遗传学技术在诊断病理学中的应用
近年来,迅速发展的分子遗传学技术愈来愈多地进入常规病理诊断.美国Georgetown大学医院病理科常规分子诊断实验室在分子遗传学技术对诊断病理学中的应用较具特色,现结合近期参考文献简介如下.
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浆膜腔积液恶性肿瘤细胞鉴别诊断标志物研究进展
良性和恶性浆膜腔积液的诊疗和预后不同,因此对浆膜腔积液恶性肿瘤细胞的鉴别诊断具有重要的临床意义.传统的浆膜腔积液细胞学检杳特异性高,但敏感性较低,特别是转移性癌细胞和间皮细胞的形态学上有交叉,鉴别诊断常很困难.随着免疫细胞化学和分子遗传学技术的进步,越来越多的标志物开始被应用于浆膜腔积液恶性肿瘤细胞的鉴别诊断.一、闭合蛋白(claudin)细胞间的紧密连接由咬合蛋白、闭合蛋白和连接黏附分子构成.目前已发现闭合蛋白家族由24个跨膜蛋白亚型组成,相对分子质量为20 000 ～27 000[1].闭合蛋白表达异常所致的细胞间紧密连接功能的失常,可能是影响肿瘤细胞发生、发展的原因之一.研究显示,闭合蛋白-1、-7在宫颈癌中表达显著增高,闭合蛋白-3、4在浆液性卵巢癌中呈高表达,而闭合蛋白-4的低表达与胃癌细胞的低分化、浸润深度和转移情况密切相关[ 2-3].
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胰腺癌基因治疗的研究进展
胰腺癌的治疗一直是研究者和临床医生关注的重点. 目前胰腺癌的治疗还是以手术为主,尽管结合了放疗及化疗等方法进行综合治疗, 但结果都不能令人满意, 胰腺癌患者的死亡率仍然很高, 其5年生存率仍低于5%.由于发病部位的特殊性以及症状的隐匿性,绝大多数患者在诊断为胰腺癌时已是晚期,并且多数已不能手术切除,因此在目前还不能明确进行早期诊断的情况下,探讨新的有效治疗方法已成为胰腺癌研究的重要方向[1].随着分子生物学及分子遗传学技术的发展,肿瘤的本质已被逐渐认清.目前认为,肿瘤的发生发展是个多步骤的复杂过程,这一过程中存在多种基因改变,胰腺癌的发生发展同样与多种基因异常有关,如p53、K-ras、p16/MTS1、DPC4/SMAD4、BRCA2等基因改变,研究者已根据这些改变尝试进行基因治疗[2].肿瘤的基因治疗虽然取得了一定成绩,但尚无根本性突破.目前肿瘤基因治疗的目标主要包括两方面:一是通过基因转染纠正某些"基因错误",逆转细胞表型或诱导其凋亡;另一方面是采用对细胞进行直接杀伤措施来清除肿瘤细胞(利用载体的细胞毒性、转染毒性基因表达或增强免疫反应等).有关胰腺癌基因治疗的研究也是根据上述目标进行的,主要包括以下几方面.
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我国病理学技术六十年发展的现状和展望
病理学自21世纪以来进入了一个飞速发展的时代，病理学技术的进步也促进了病理学的飞速发展［1］。近10年，病理技术实验室已经走向以常规HE制片技术为基础，加上特殊染色、免疫组织化学、分子病理学、分子遗传学技术和液基细胞学等辅助技术的多元化时代，为病理学的发展注入了新的动力，也为病理医师提供了大量可靠和有效的病理研究和诊断依据，使病理学研究和诊断更加全面、深入和准确，使病理学从传统的器官病理学划时代地进入组织病理学和分子病理学阶段。
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H9N2禽流感病毒反向遗传系统的构建和鉴定
目的 建立H9N2亚型禽流感病毒反向遗传系统,为人禽流感疫苗研制以及传播和致病机制等方面的研究提供技术平台.方法 使用RT-PCR方法获得禽流感H9N2亚型病毒A/Guangzhou/333/99(H9N2)的8条全长基因节段,然后克隆到双表达载体pCI-pol Ⅰ中,获得H9N2禽流感病毒的8个基因节段的8质粒系统.将构建好的8质粒共转染293T细胞后,收获上清接种鸡胚,然后对鸡胚尿囊液进行鉴定;对拯救的病毒进行鉴定.结果 8质粒系统转染293T细胞后可以成功拯救出H9N2禽流感病毒,血凝效价可达到29/50μl,生长特性与野生型病毒类似.结论 成功建立了H9N2禽流感病毒反向遗传系统.
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基于2009年流感大流行代表毒株反向遗传平台系统的建立
目的 通过反向遗传学的技术手段,建立基于甲型H1N1流感大流行病毒A/California/07/2009(H1N1)的反向遗传平台系统,为今后疫苗株的研制及病毒的相关生物学研究提供技术基础.方法 分别扩增A/California/07/2009(H1N1)病毒的八个基因片段,利用PCI双表达质粒分别构建表达八个基因的重组质粒,共转染293T细胞拯救病毒.通过对拯救病毒的氨基酸序列测定、抗原性分析、生长特性测定,比较其与野生型病毒的异同.结果 拯救的病毒与野生病毒具有相一致的氨基酸序列,相同的抗原性和相似的生长特性.结论 建立了甲型H1N1流感大流行病毒A/California/07/2009(H1N1)的反向遗传平台系统,利用该系统拯救的重配病毒与野生病毒具有相同的抗原性和生长特性,可用于今后疫苗株的研制及甲型H1N1流感病毒的致病机制等生物学研究.
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基因检测诊断中的假阴性
基因检测诊断,即聚合酶链式反应(PCR),是体外酶促反应合成特异性DNA的一种方法.它以特异、快速、敏感的核酸分析技术而著称,是分子生物学技术的一项新突破.因其高度的灵敏性,污染问题已广泛受到人们的关注与重视.不少学者对假阳性的对抗与解除方法已进行过不少的研究与探讨,但因其本试验的特殊性操作中标本量的甚微,假阴性同样是一个不可忽视的问题.如果在实验操作中对于假阴性不能很好地控制和解除,同时不能保证本试验其特异、准确、敏感的特性,对于如何预防和解除假阴性分述如下.
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圆锥动脉干畸形的分子遗传学研究进展
先天性心脏病是常见的儿童先天性畸形之一,我国活产儿中患病率是3‰～8‰[1].而其中圆锥动脉干畸形(conotruncal malformation)占先天性心脏病的1/4～1/3,约占青紫型先天性心脏病的70%[2].圆锥动脉干畸形造成的先天性心脏病由于病情相对较重,预后相对较差,长期以来一直受到人们的关注.圆锥动脉干发育异常造成的畸形主要包括:法洛四联症、大动脉转位、右心室双出口、肺动脉闭锁以及永存动脉干.随着外科手术技巧以及术后监护技术的日渐成熟,圆锥动脉干畸形所致死亡率和治愈率都有所提高.但对其发生机制和病因的理解仍有局限,其发病率依然居高不下.目前认为,圆锥动脉干畸形所致的先天性心脏病,多数是由环境因素及遗传因素共同造成.环境因素包括:暴露于维生素A、视黄醇、烟酸以及视黄醇受体.另外包括除草醚、空气污染、氯化烃以及杀虫剂等都已经有相关报道证明与流出道畸形的形成有关[3].近几年,随着分子遗传学技术的发展和成熟,圆锥动脉干分子遗传学方面的研究得到了巨大的关注并且进展迅速.本文就近年来研究的较为成熟和热点的几个候选基因作一综述.
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精子染色质扩散试验及吖啶橙染色试验检测精子DNA完整性研究
目的 探讨精子染色质扩散(sperm chromatin dispersion,SCD)试验及吖啶橙染色(AO)试验检测精子DNA完整性的应用价值.方法 对32名已生育的成年男性健康对照者和27例特发性少精子症(idiopathic oligozoospermia,IO)患者同时进行SCD试验和AO试验,对检测结果 进行分析.在SCD试验中,DNA完整性正常精子的DNA扩散形成大晕环或中晕环,而受损伤产生DNA碎片的精子不形成或形成很小的晕环.用AO试验检测,正常精子DNA为双链,染成绿色,不成熟或损伤精子DNA为单链.染成红色、橙色或黄色.结果 SCD试验检测10患者的大晕环、中晕环、小晕环和无晕环精子百分率分别为(49.9±13.8)%、(11.5±5.4)%、(11.9±6.1)%和(26.7±10.0)%,健康对照组分别为(73.2±6.2)%、(14.7±6.3)%、(6.8±2.9)%及(5.3±2.2)%,2组比较,差异有统计学意义(t=8.576,P＜0.O1;t=2.083,P＜0.05;t=4.284,P＜0.01;t=11.823,P＜0.01);IO患者的DNA损伤精子的百分率为(38.6±12.1)%,健康对照组为(12.1±5.2)%,2组比较差异有统计学意义(t=11.995,P＜0.01).AO试验检测IO患者的单链DNA精子百分率为(45.5±13.8)%,健康对照组为(39.8±13.3)%,差异无统计学意义(t=1.626,P＞0.05).结论 精子DNA完整性异常可导致男性不育.SCD试验是一种有效的精子DNA完整性检测方法 .
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男性不育的分子和遗传诊断的现状与挑战
遗传因素是引起男性不育的重要原因之一，约占病例总数的30％，开展分子和遗传检测对男性不育的诊断和治疗具有重要意义。目前临床开展的男性不育分子和遗传检测技术主要包括染色体分析、Y染色体微缺失检测、基因突变筛查以及精子质量和功能的相关检查，本文就目前相关技术的临床应用及面临的挑战作一评析。（中华检验医学杂志，2015，38：511-513）
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高分辨熔解方法的建立及在真菌感染患者CYP2C19遗传多态性检测中的应用
目的 探讨高分辨熔解方法 (high resolution melting,HRM)检测真菌感染患者CYP2C19遗传多态性的可行性.方法 建立HRM方法 检测CYP2C19 * 2和CYP2C19 * 3两个多态性位点的基因型,并与传统方法 PCR-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)及序列分析结果 相比较,进一步应用于47例真菌感染患者基因型的检测与分析.结果 2种方法 检测CYP2C19 * 2和CYP2C19* 3基因型结果 完全一致,与DNA序列分析结果 也相吻合,而HRM方法 操作更为简便,耗时更短.47份临床标本检测结果 显示,CYP2C19的2个多态性位点存在不同基因型,CYP2C19 * 1/ * 1所占比例为48.9%(23/47),CYP2C19 * 1/ * 2为25.5%(12/47),CYP2C19 * 1/ * 3为6.4%(3/47),CYP2C19 * 2/ * 2为12.8%(6/47),CYP2C19 * 2/ * 3为6.4%(3/47).结论 HRM方法 能有效检测CYP2C19基因多态性,且较PCR-RFLP方法 更为简便、快速.此外,CYP2C19基因在真菌感染患者中存在明显的遗传多态性.
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酵母双杂交技术筛选克隆HCV核心蛋白结合蛋白基因1
目的克隆与丙型肝炎病毒(HCV)核心蛋白结合的肝细胞中的未知蛋白基因方法应用酵母双杂交系统3构建HCV核心蛋白诱饵质粒,转化酵母AH109后与含文库质粒的酵母Y187进行配合,在营养缺陷培养基上进行双杂交筛选.筛选出30个阳性克隆,对既能在4缺营养缺陷培养基上生长(SD/-Trp-Leu-Ade-His)又能在涂有X-α-半乳糖(X-α-gal)的四缺培养平皿上长出蓝色菌落,提取此酵母克隆的质粒转化大肠杆菌后进行测序,进行生物信息学分析.将HCV核心蛋白基因分为大、中、小三段,与所克隆的未知功能基因回交,以证实其相互作用的部位.结果分析的结果显示,其中1号克隆的测序结果与GenBank中的1个未知功能序列有99%的同源性,初步证明了此基因与HCV核心蛋白有结合活性(GenBank号:AY032593).HCV核心蛋白的全长、2/3,1/3三段,回交显示三段均能在酵母中与此未知基因具有结合作用.结论 HCV核心蛋白结合蛋白肝细胞基因克隆成功,核心蛋白与此未知基因的作用部位应是氨基端.此项研究结果,为以后研究此基因在HCV致病机制以及在肝细胞中的生理功能提供了线索.
关键词： C型肝炎样病毒属/遗传学 病毒蛋白质类/遗传学 基因 病毒 克隆 分子 遗传学技术 -
100例男性不育的辅助生殖技术治疗
目的：探讨辅助生殖技术治疗男性不育的疗效和可行性。方法：选取2008年4月～2010年1月在我中心就诊的不育症患者100例，采用IVF/ICSI-ET技术辅助治疗完成受孕过程。结果：经过辅助生殖技术治疗，75例男性具有生殖能力且实现生育愿望。结论：采用IVF/ICSI-ET技术治疗男性不育，应该在客观评估男性生育能力的基础上进行。选择IVF/ICSI-ET法还要结合女方因素综合考虑，制定佳辅助生殖技术治疗案。
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微卫星不稳定性与食管癌的关系
食管癌(EC)是一种具有遗传倾向的多因素疾病,其发病原因尚不十分明确.近年来,随着分子生物学技术的发展,应用细胞遗传学和分子遗传学技术揭示肿瘤的发生、发展,探索肿瘤基因诊断、基因治疗的研究有了较快的进步.微卫星(Microsatellite,MS)和微卫星不稳定性(microsatellite instability,MSI)现象发现于上世纪70年代末,是继癌基因和抑癌基因之后,研究肿瘤发生、发展和预后方面的又一热点.现就MSI与肿瘤,尤其是与食管癌的关系综述如下.
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胚胎植入前遗传学诊断进展
胚胎植入前遗传学诊断(preimplantation genetic diagnosis,PGD)是产前诊断的一种早期形式,在胚胎期通过遗传检测技术选择正常的或没有发病风险的胚胎,避免怀上有家族遗传疾病的胎儿,减少反复流产的发生.因为PGD检测的标本在胚胎卵裂期仅为1～2个单细胞,在囊胚期为几个滋养层细胞,因此,在基因扩增和检测技术上有较高的难度.目前,PGD技术经过20年的发展,逐渐发展成为产前胚胎期遗传学诊断的常规项目.现代分子遗传学技术,包括生物芯片、二代测序等高通量全基因组的检测技术,也进入该领域的临床应用.目前的PGD助孕技术前仍需要对风险夫妇或其家系进行准确的遗传诊断,包括染色体检测和基因检测,未来技术的研发,有可能会使其并非必须.
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先天性心脏病遗传学机制的研究进展
先天性心脏病( congenital heart disease, CHD)，是胎儿期心血管发育异常、发育障碍或出生后应该退化的组织未能退化所造成的心血管畸形，是控制心脏发育的基因产生突变以及这些基因在时间(发育阶段)和空间(组织特异性)调控表达异常引起的。CHD是人类常见的出生缺陷疾病，是婴幼儿非感染性疾病中主要的死亡原因[1]。据国外文献报道的数据显示，CHD的发病率为（5.4～16.1）/1000[2]，而国内文献报道的出生缺陷监测结果中，CHD的发病率为25.1/10000[3]。CHD可因心脏结构和血流动力学异常而导致身体运动耐力下降、脑发育延迟、肺动脉高压、心脏扩大、心功能衰竭、艾森曼格综合征、血栓栓塞、亚急性细菌性心内膜炎、心律失常以及死亡[4-6]。近年来，随着对心脏发育分子机制的研究进展，发现了一系列参与心脏发育转录调节、信号传导和形态发生的关键基因，随后遗传学分析证实多个基因参与了CHD的发病[7]。随着对人类全基因组测序的成功和分子遗传学技术的发展，遗传因素在CHD中的作用受到越来越多的重视。因此，识别遗传缺陷对CHD的防治具有重要的临床意义。本文从近年来的CHD分子遗传学机制方面，对染色体异常、单基因突变、基因拷贝数变异(copy number variation，CNV)以及重要的转录调控因子的研究进展综述如下。
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C-erbB2及C-myc基因反义脱氧寡核苷酸对卵巢癌COC1细胞的作用
近年来,有关卵巢肿瘤的基因治疗研究方兴未艾,特别是反义基因治疗取得了一些明显的效果[1].但随着分子生物学和分子遗传学技术的深入发展,人们已逐渐认识到肿瘤的发生是一个涉及多基因、多步骤的复杂过程,单一癌基因的反义阻断不能完全抑制或逆转其恶性表型.本研究应用脂质体(LF)介导的C-myc、C-erbB2基因反义脱氧寡核苷酸(AS-ODNs)共同作用于卵巢癌COC1细胞系,通过体外实验探讨反义基因治疗对COC1细胞C-erbB2、C-myc 基因表达及细胞增殖的影响.
