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神经生长因子受体p75表达影响喉癌Hep2细胞系增殖的初步研究
目的 初步探索神经生长因子低亲和力受体(p75 neurotrophin receptor,p75NTR)在喉癌Hep2细胞系的表达情况并研究其相关生物学功能.方法 应用免疫细胞化学及免疫荧光染色法,检测p75NTR在喉癌Hep2细胞系中的表达;应用RNAi法下调p75NTR表达,通过Real-Time-PCR及Western blot方法验证基因干扰有效,MTT法观察下调p75NTR蛋白水平对喉癌Hep2细胞存活及增殖的影响.结果 喉癌Hep2细胞系内小部分肿瘤细胞显示p75NTR免疫染色强阳性,多数呈强阳性显色的细胞处于旺盛的分裂增殖状态.通过Real-Time-PCR及Western blot方法均证实预先设计的小干扰RNA(siRNA)可以有效下调p75NTR蛋白的表达,转染siRNA抑制p75NTR表达能够抑制喉癌Hep2细胞系的增殖.结论 p75NTR高表达于喉癌Hep2细胞系中具有较强增殖活力的细胞.p75NTR表达对支持和促进喉癌细胞增殖具有重要作用,p75NTR受体信号途径激活与喉癌细胞存活及增殖密切相关,其能否成为肿瘤治疗的靶点有待进一步深入研究.
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改良细胞离心涂片法在检测宫颈液基细胞学P16INK4a中的应用
目的 评价用细胞离心涂片机制作宫颈液基细胞涂片检测P16INK4a在宫颈病变中的诊断价值及临床意义.方法 用改良细胞离心涂片法(cysopin)和液基薄层制片法(Thinprep,TP)分别进行免疫细胞化学检测10例TCT标本中P16INK4a的表达.结果 改良cytospin法和TP法免疫细胞化学染色P16INK4a表达结果 相似,背景清晰,信号强度基本相同,定位准确.蛄论改良cytospin法优于TP法行免疫细胞化学染色.
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免疫标记物在恶性腹腔积液细胞学诊断中的应用
目的 探讨免疫标记物在腹膜恶性间皮瘤(PMM)和转移性卵巢浆液性腺癌(OSA)鉴别诊断中的作用.方法 应用细胞包埋技术及免疫细胞化学法检测 PMM 20例和 OSA 35例患者腹水中AE1/AE3、Vimentin、CK5/6、Calretinin、WT-1、HBME-1、CK7、CK20、CEA的表达.并对其阳性表达率及诊断价值进行分析比较.结果 Calretinin、CK5/6、WT-1、HBME-1、CK7和CEA在PMM与OSA中的表达差异有统计学意义(P<0.05),AE1/AE3、Vimentin和CK20的表达差异无统计学意义(P＞0.05).诊断PMM敏感的抗体是AE1/AE3(100.0%)和Calretinin(95.0%),其次是CK5/6(90.0%)和WT-1(90.0%),特异性高的抗体是Calretinin(94.3%)和CK5/6(94.3%);对OSA 敏感性高的抗体是AE1/AE3(100.0%)和CK7(100.0%),其次是CEA(88.6%),特异性高的抗体是CEA(95.0%)和CK20(95.0%).结论 Calretinin、CK5/6和CEA兼具特异性和敏感性,可作为PMM和OSA鉴别诊断中的首选抗体;AE1/AE3和Vimentin阳性的细胞,结合细胞的形态学特点可以初步区分PMM和OSA.
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人胎儿骨髓基质干细胞的分离、体外培养和鉴定
目的分离培养并鉴定人胚胎骨髓基质干细胞.方法抽取流产胎儿股骨骨髓,Percoll离心纯化分离,取界面有核细胞培养.不同培养基培养对比,观察细胞生长曲线,免疫细胞化学鉴定细胞膜表面分子.结果得到纯化率较高的骨髓基质干细胞(MSCs),用αMED比DMEM和RPMI1640原代培养生长速度快,第二代MSCs在上述三种培养基中倍增时间分别为43h、54h、56h.免疫细胞化学结果99%CD44(+)、98%Vim(+)、所有细胞CD34(-)、CD29(-).结论Percoll离心法成功地分离纯度较高的MSCs.MSCs在αMEM中培养增殖率比在DMEM和M1640中培养为快.
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人胎儿不同发育时期睾丸间质细胞的增殖与凋亡
目的:观察不同胎龄人胎儿睾丸间质细胞增殖与凋亡的特征和规律,探讨二者在睾丸发生中的意义.方法:利用SP免疫细胞化学方法和改进的石蜡切片原位末段标记法(TUNEL法)观察了人胎儿12～32周龄睾丸间质细胞增殖与凋亡阳性细胞表达率.结果:细胞凋亡在胎儿16～32周龄睾丸间质细胞呈阳性表达,16～20周为表达高峰,阳性细胞定位于细胞核为桔黄色或棕黄色;PCNA在胎儿16～20周龄睾丸间质细胞呈阳性表达,16～20周为表达高峰,阳性细胞核为桔黄色或棕黄色,随着胎龄的增长呈逐渐下降趋势(P＜0.01).结论:细胞增殖与凋亡在人胎儿睾丸发育过程中有不同程度的表达;表明细胞增殖与凋亡在睾丸组织发育过程中起着重要的作用.
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人胎儿不同发育阶段睾丸细胞增殖与凋亡的变化
目的:观察不同胎龄人胎儿睾丸细胞增殖与凋亡的变化规律.方法:采用SP免疫细胞化学方法和TUNEL法观察12-32周龄人胚胎睾丸细胞增殖与凋亡的情况.结果:12周睾丸细胞即出现凋亡,20-32周达高峰,阳性产物定位于细胞核.12周睾丸有大量PCNA阳性细胞,16-24周为表达高峰,随着胎龄的增长呈逐渐下降趋势(P＜0.01).结论:增殖与凋亡在人胎儿睾丸发育过程中有不同程度的表达,表明细胞增殖与凋亡在睾丸组织发育过程中起着重要作用.
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人胎儿睾丸发生过程中TGF-β1与PCNA的表达
目的:观察TGF-β1与PCNA在人胎儿睾丸发生过程中的表达特征,探讨二者在睾丸发生中的作用.方法:采用SP免疫细胞化学技术检测12～28周人胎儿睾丸间质细胞、支持细胞、生精细胞TGF-β1、PCNA的表达情况.结果:TGF-β1阳性细胞胞浆呈桔黄色或棕黄色颗粒状;在12周胎儿睾丸组织未见表达,在16～28周睾丸间质细胞呈阳性表达,16～20周为表达高峰;随着胎龄的增长TGF-β1阳性细胞率逐渐下降(P＜0.01).PCNA阳性细胞核为桔黄色或棕黄色,在胎儿睾丸间质细胞、支持细胞和生精细胞均有不同程度表达,16～20周为表达高峰,随着胎龄的增长PCNA阳性细胞率逐渐下降(P＜0.01).结论:TGF-β1与PCNA在人胎儿睾丸发育过程中有不同程度的表达,表明TGF-β1与PCNA在睾丸发育过程中起着一定的作用.
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TGF-β1在人胎儿晶状体上皮细胞的加龄变化
目的:观察转化生长因子-β1(TCF-β1)在人胎儿晶状体上皮细胞的表达.方法:用SP免疫组织化学法对48例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞进行TGF-β1免疫细胞化学染色.结果:TGF-β1在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达;免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少.TGF-β1阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的颗粒状或斑块状.结论:TGF-β1在人胎儿不同胎龄胎晶状体上皮细胞均有表达.
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人胎儿发生过程中PCNA在睾丸组织细胞的表达
目的:观察人胎儿发生过程中PCNA在睾丸组织细胞的表达特征,探讨PCNA在睾丸发生中的作用.方法:用SP免疫细胞化学技术检测了人胎儿12～32周睾丸间质细胞、支持细胞、生殖细胞PCNA阳性细胞表达率.结果:PCNA在胎儿睾丸间质细胞、支持细胞、生殖细胞有不同程度表达,16～20周为表达高峰,阳性细胞核为桔黄色或棕黄色,随着胎龄的增长呈逐渐下降趋势(P＜0.01).结论:人胎儿发育过程中PCNA在睾丸间质细胞、支持细胞、生殖细胞有不同程度的表达.
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PCNA与TGF-β1在人胎儿晶状体上皮细胞的表达
目的:观察增殖细胞核抗原(PCNA)及转化生长因子-β1(TGF-β1)在人胎儿晶状体上皮细胞的表达.方法:用SP免疫组织化学法对48例人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞进行PCNA、TGF-β1免疫细胞化学染色.结果:PCNA、TGF-β1在人胎儿不同胎龄晶状体上皮细胞均有表达;免疫阳性细胞随着胎龄的增加而减少.PCNA阳性细胞核为桔黄色或棕黄色;TGF-β1阳性细胞浆为桔黄色或棕黄色的颗粒状或斑块状;经相关分析,TGF-β1与PCNA呈正相关.结论:PCNA、TGF-β1在人胎儿不同胎龄胎晶状体上皮细胞均有表达;TGF-β1促进晶状体上皮细胞的增殖.
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Skp2-siRNA干预对Eca-109食管癌细胞系p21和p27蛋白及细胞周期的影响
目的 探讨Skp2-siRNA干扰后食管癌Eca-109细胞株Skp2、p21和p27蛋白表达情况及其对细胞增殖调控的影响.方法 经Skp2-siRNA干扰食管癌Eca-109细胞株24、48和72 h后,用免疫细胞化学法检测Skp2、p21和p27蛋白的表达情况,流式细胞仪检测细胞增殖周期的分布.结果 食管癌Eca-109细胞株主要分布在G1期,Skp2 蛋白表达下降(P<0.05或<0.01),p21和p27 蛋白的表达增高(P<0.05或<0.01).结论 运用Skp2-siRNA技术可以有效降低对p21和p27蛋白的降解,促进细胞停滞在G1期,降低细胞增殖活性.
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不同淋巴结转移潜能口腔鳞癌细胞株的形态学分析及流式细胞周期分析的研究
目的：探讨口腔鳞癌不同转移潜能细胞株形态学的变化，及对细胞周期、凋亡指数的影响。方法复苏传代口腔鳞癌高、低淋巴结转移潜能细胞株，利用倒置显微镜观察不同细胞株的形态学差异，采用病理图像分析系统对两种不同细胞株的形态学参数进行分析；利用免疫细胞化学检测两种细胞株中CEA、EMA的表达；流式细胞术检测培养12 h、24 h、36 h、48 h、60 h、72 h时间节点细胞周期分布差异。结果高淋巴结转移细胞株呈梭形外形，粘附性较差，随传代时间的延长，细胞异型性更加明显、且梭形变较突出；低淋巴结转移细胞株呈圆形或卵圆形，细胞粘附性差，体积较小，细胞异型性不明显；高淋巴结转移细胞株 CEA、EMA的阳性细胞比率为（84±7）％和（83±5）％，在低淋巴结转移细胞株中的阳性细胞比率分别为（89±7）％和（81±6）％，两种指标在不同细胞株中的阳性率比较差异无统计学意义（ P ＞0厖．05）。细胞形态学图像分析结果显示2种细胞株在细胞面积、周长、等效直径、长径、短径高转移组明显高于低转移组，差异有统计学意义（ P ＜0．05）；2组细胞株的细胞变异参数面积、周长、等效直径、长径、短径高转移组明显低于低转移组（ P ＜0．05）。流式细胞术结果显示高淋巴结转移细胞株的细胞凋亡指数明显低于低转移组细胞凋亡指数（ P ＜0．05）。高淋巴结转移细胞株G1细胞比值明显低于低转移细胞株，差异有统计学意义（ P ＜0．05）；G2期高低转移组，差异无统计学意义（ P ＞0．05）；S期明显高于低淋巴结转移组，差异有统计学意义（ P ＜0．05）。结论不同淋巴结转移潜能的口腔鳞癌细胞株在形态学参数方面存在一定的差异，这可能是造成其具有不同转移潜能的结构基础；口腔鳞癌细胞株凋亡抑制和细胞合成期比例优势是导致淋巴结转移的分子基础。
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免疫细胞化学在胸腹水肿瘤细胞学诊断中的应用
目的:探讨免疫细胞化学(ICC,immunocytochemistry)方法诊断胸腹水中细胞的良恶性和鉴别诊断恶性肿瘤细胞的组织学类型的临床意义.方法:对临床送检的胸腹水标本,除进行HE染色常规细胞学涂片和液基薄层细胞片(TCT)检查外,还将胸腹水制成石蜡包埋细胞块(CB,cell block),进行石蜡包埋细胞块的免疫细胞化学染色(CBICC),诊断细胞的良恶性,确定肿瘤细胞的组织起源.结果:186例患者,胸腹水细胞经免疫细胞化学鉴别诊断出:良性病变52例；恶性肿瘤134例,其中乳腺癌24例,肺癌27例,甲状腺癌18例,胃肠道癌22例,卵巢癌19例,肝癌9例,前列腺癌7例和间皮肉瘤8例,恶性肿瘤均经组织病理学证实.结论:病理细胞块的免疫细胞化学确定胸腹水中细胞的良恶性和鉴别诊断恶性肿瘤细胞的组织起源特异性强、敏感性高,具有客观、准确的特点,有着广泛的临床应用价值和推广前景.
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ER 、PR 和 HER-2在乳腺癌穿刺细胞学检测中的应用
目的：探讨乳腺癌细针穿刺细胞学标本检测雌激素受体（ER）、孕激素受体（PR）和表皮生长因子受体2（HER‐2）的方法与可行性，研究免疫细胞化学（Immunocy to chemistry ，ICC ）与乳腺癌新辅助化疗的相关性和意义。方法：收集徐州医科大学附属医院经病理确诊的乳腺癌细针穿刺细胞学标本，将穿刺吸取的细胞学标本直接涂到防脱片上，行免疫细胞化学染色，采用S‐P法检测肿瘤细胞中的表达，所得数据结果应用SPSS17．0统计软件分析。结果：48例乳腺癌细针穿刺细胞学标本免疫细胞化学检测 ER、PR、HER‐2阳性表达率分别为58．33％（28／48）、43．75％（21／48）、47.92％（23／48），三种受体结果与术后病理免疫组化结果及文献资料对比没有显著性差异。结论：乳腺癌细针穿刺细胞学标本检测ER、PR和HER‐2方法可靠、结果客观，作为乳腺癌新辅助化疗前的检测方法具有临床应用意义和推广价值。
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人骨髓间充质干细胞的培养及细胞增殖测定
目的 分离培养并鉴定人骨髓间充质干细胞.方法 成人骨髓取自非血液系统疾病、非肿瘤及乙肝表面抗原阴性的胸外科手术中摘取的肋骨,采用密度梯度离心法和贴壁筛选法进行培养;免疫细胞化学法鉴定细胞膜抗原.结果 人骨髓间充质干细胞(MSCs)的CD44表达阳性;早、中、晚3代传代培养具有以下共性特征:传代培养潜伏期约为24～36 h;传代培养对数增殖期约为4～6 d;对数增殖期结束后至接种后第9 d,MSCs生长逐渐缓慢,进入平台期.结论 培养的细胞不是骨髓中的造血干细胞或骨髓基质中的成纤维细胞,是处于未分化阶段的骨髓间充质干细胞.
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改良法人胎肾小球系膜细胞原代培养
目的:原代培养和鉴定正常人胎肾小球系膜细胞(HMC).探索和总结佳培养方法.方法:取4月胎龄的引产胎儿肾,分赢皮质后,筛网滤过分离肾小球,Ⅳ型胶原酶消化,接种肾小球时分别采用传统方法(第1组)和预先浸湿瓶底并以胎牛血清中和肢原酶替代离心洗涤(第2组)两种方法.观察系膜细胞生长状态.并采用免疫细胞化学检测第3代肾小球系膜细胞的结蛋白(Desmin)、肌动蛋白(Actin)、波形蛋白(Vimentin)、细胞角蛋白(Cytokeratin)、Ⅷ因子(FactorⅧ)等相关抗原的表达,鉴定系膜细胞,并绘制其生长曲线,计算倍增时同.结果:两组肾小球贴壁率分别71%和90%,系膜细胞开始爬出时间为II d和7 d.次代倍增时间为3.94 d和3.52 d,细胞生长状况有统计学差异.第2组传代的系膜细胞1 d内贴壁,1周后长满.细胞呈三角、梭形、不规则形半透明,树枝状突起.免疫化学鉴定Desmin、Vimentin和Actin 阳性,FactorⅦ和Cytokeratin阴性.结论:两种肾小球接种方法对系膜细胞培养有不同影响.我们总结改进的培养方法肾小球贴壁率高,细胞存活和生长良好,并确定培养的细胞为人HMC.
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大鼠神经干细胞的分离培养和分化鉴定
目的建立神经干细胞分离、培养和分化鉴定技术.观察神经干细胞生长、增殖特点.方法利用无血清培养,从胚胎大鼠海马、纹状体等区分离神经干细胞,进行体外扩增培养、传代观察.采用荧光免疫细胞化学检测技术,观察鉴定神经干细胞及其分化结果.结果从胚胎大鼠海马、纹状体等区分离的细胞具有增殖能力,可进行传代培养,获得的细胞克隆中有巢蛋白(nestin)表达阳性细胞,显微镜下观察见典型的干细胞特征.分化为3种神经细胞类型:神经元、胶质细胞、少突胶质细胞.结论用上述方法分离培养的神经干细胞具有自我更新和增殖能力,通过鉴定确为神经干细胞,并经过分化鉴定确认.
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新柏氏细胞清洗液在血性胸腹水细胞学诊断中的应用
目的 探讨新柏氏细胞清洗液在血性胸腹水脱落细胞学检测中的应用及意义. 方法 收集我院2016-12～2017-04血性胸腹水130例,用新柏氏细胞清洗液处理后行液基细胞学制片(TCT)、细胞块切片联合免疫细胞化学检测;传统检测法未用新柏氏细胞清洗液处理,直接离心涂片及细胞块切片检测. 结果 130例血性胸腹水传统检测法涂片及细胞块切片中细胞重叠明显,常成堆分布,因含大量红细胞、蛋白黏液,造成背景不清晰;用新柏氏细胞清洗液处理后TCT及细胞块切片中红细胞数量与传统检测法相比明显减少,且间皮细胞、肿瘤细胞、淋巴细胞等轮廓清楚,细胞染色清晰.130例血性胸腹水标本传统细胞涂片肿瘤细胞检出率为16.15％ (21/130),TCT法肿瘤细胞检出率为29.23％ (38/130),两种方法HE染色结果差异有统计学意义(P＜0.05);细胞块切片结合免疫细胞化学法肿瘤细胞检出率为36.15％(47/130),与TCT阳性率比较差异无统计学意义(P＞0.05). 结论 血性胸腹水经新柏氏细胞清洗液去红细胞、黏液及蛋白液等处理,并采用TCT法及细胞块切片联合免疫细胞化学法能有效提高肿瘤细胞的检出率.
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人视网膜色素上皮细胞原代培养及HGF/c-Met的表达
目的:探讨肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)及其受体c-Met在原代培养的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium, RPE)细胞中的表达情况.方法:体外培养人RPE细胞,3-5代细胞用于实验;采用免疫细胞化学和RT-PCR方法检测细胞内HGF及其受体c-Met的表达.结果:人RPE细胞HGF及其受体c-Met免疫细胞化学染色的阳性信号分别位于细胞浆内和细胞膜上;RT-PCR方法可检测到HGF及其受体c-Met mRNA的表达.结论:人RPE细胞自身产生HGF并表达其受体c-Met,提示HGF可能通过自分泌和(或)旁分泌途径作用于RPE细胞,涉及眼内多种疾病过程.
关键词： 肝细胞生长因子 人视网膜色素上皮细胞 免疫细胞化学 RT-PCR -
Shh信号通路成员Shh蛋白在胃癌细胞SGC-7901中的表达
目的:研究Shh信号通路成员Shh蛋白在胃癌细胞中的表达,探讨其与胃癌发生的关系.方法:培养胃癌细胞(SGC-7901)和正常肠上皮细胞(IEC-6),用免疫细胞化学法检测两种细胞中Shh蛋白的表达,用RT-PCR法检测Shh mRNA在两种细胞中的表达.结果:Shh蛋白在正常肠上皮细胞中表达阳性率为15%,在胃癌细胞中表达阳性率为70%,Shh蛋白在正常肠上皮细胞中的表达明显低于胃癌细胞(P＜0.05).Shh mRNA在正常肠上皮细胞中不表达或低表达,在胃癌细胞中明显表达(P＜0.05).结论:Shh信号通路可能与胃癌发生有关.
