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灵芝三萜成分分析
目的建立灵芝子实体、孢子粉、发酵菌丝体三萜成分的HPLC含量测定方法.方法以赤芝孢子酸A(ganosporeric acid A,1),赤芝酸A(lucidenic acid A,2),灵芝酸B(ganoderic acid B,3)和灵芝酸C(ganoderic acid C,4)为对照品;色谱柱:反相C18;流动相:乙腈-水(37∶63);流速:1.0 mL*min-1;检测波长:UV 254 nm.结果进样量在0.2～1 μg有良好的线性关系,(1),(2),(3)和(4)的加样回收率分别为100.9%,101.2%,101.3%和101.7%.结论本法快速、简便、灵敏和分离度好,适用于灵芝子实体、孢子粉、发酵菌丝体及相关制剂的三萜类物质检查和含量测定.
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灵芝三萜类化合物对3种小鼠肝损伤模型的影响
目的研究灵芝三萜类化合物对3种小鼠肝损伤模型的影响.方法制备CCl4,D-Gal及BCG+LPS引起的小鼠肝损伤模型,按比色测定法和改良Fletcher法测定小鼠血清中ALT和肝脏TG水平及进行肝脏病理组织学检查.结果灵芝总三萜GT(80 mg·kg-1)和其组分GT2(10,20,40 mg·kg-1)与阳性对照药马洛替酯(91 mg·kg-1)相仿,均明显降低模型动物的血清ALT和肝脏TG含量,并不同程度减轻动物肝损伤的程度.结论灵芝三萜类化合物GT和GT2均有明显的保肝作用.
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灵芝多组分微乳一步制备方法的探索
灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum (Leyss.ex Fr.) Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao,Xu et Zhang的干燥子实体[1].早记载于汉代《神农本草经》,具有滋补强壮、延年益寿、宁心安神、扶正固本之功效[2,3].现代研究表明灵芝具有较好的抗肿瘤作用,其中灵芝中含有的脂溶性三萜及水溶性多糖是灵芝抗肿瘤的主要有效组分[4-7].本课题组在前期研究中发现灵芝三萜溶解性较差,而多糖为水溶性大分子物质,二者在肠道内吸收均较差,口服不利于其药效的发挥.
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灵芝三萜合成关键元件GLCYP450及其还原酶GLNADPH的基因克隆及共表达载体构建
细胞色素P450是灵芝三萜生物合成途径中的关键元件,其催化反应过程中需要有NADPH/NADH为其传递电子.本课题组根据已获得的赤芝(Ganoderma lucidum (Leyss.Ex Fr.) Karst.)基因组数据中的CYP450和NADPH转录本序列,利用RT-PCR方法获得灵芝CYP450 (GLCYP450)和NADPH(GLNADPH)基因的全长cDNA序列,并在序列两端引入相应的限制性内切酶位点,通过酶切及连接反应,将GLCYP450和GLNADPH重组到酵母表达载体pESC-URA中,成功构建了酵母表达载体质粒pESC-GLNADPH-GLCYP4 50,为通过合成生物学手段研究灵芝三萜生物合成奠定基础.
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基于全因子实验设计的灵芝抗肿瘤有效组分配伍研究
目的 研究灵芝总多糖和总三萜抗肿瘤的佳配伍剂量.方法 以抑瘤率为响应值,设计两因素三水平的(32)全因子实验,观察9个灵芝总多糖、总三萜不同配伍对S180荷瘤小鼠肿瘤生长情况并计算抑瘤率;用Minitab 16软件分析灵芝总多糖和总三萜对抑瘤率的影响;用响应曲面法优化两者的配伍剂量.结果 与对照组的瘤重为(3.48±o.75)g相比,9个糖萜组/PT组(灵芝总多糖、总三萜配伍组)的S180荷瘤小鼠的瘤重分别为(2.55±0.72),(2.07±0.98),(1.95±0.70),(1.95±0.67),(1.84±0.91),(1.80±0.65),(1.75±0.52),(1.60±0.59)和(1.61±0.71)g,这9组的抑瘤率分别为26.86％,40.65％,43.92％,44.04％,47.27％,48.19％,49.74％,54.08％和53.64％,以上指标差异均有统计学意义(P＜ 0.05,P＜0.01).灵芝总多糖、总三萜均是抑瘤率的主效应影响因素(均P＜0.05),与抑瘤率的拟合响应曲面模型优化获得两者配伍的理论大抑瘤率为54.45％,此时三萜与多糖的剂量分别为90.00,43.03mg·kg-1.结论 灵芝总多糖、总三萜的不同配伍对抑瘤率影响较大,适宜的灵芝多糖、三萜剂量配伍能有效地提高抗肿瘤药效,本实验获得了两者抗肿瘤的佳配伍剂量.
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对灵芝的理化鉴别开发与临床应用
灵芝,作为药食品在民间被视作神草仙药.我国早的药学专著<神农本草经>将灵芝列为上品药收录于书中.以后,历代医家对灵芝均有所记载,但临床应用并不广泛.究其原因,可能与当时灵芝的数量稀少有关.近数十年来,由于科学技术的发展,人工培植灵芝技术的成功,使灵芝的产量大大提高,从而促进了对灵芝的深入研究和广泛应用.与此同时,对灵芝菌发育周期中的另一形态--灵芝孢子开发应用的研究也正在进行中.以下笔者特介绍灵芝孢子开发应用中的一些情况.
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正交法优选夜宁胶囊中灵芝镇静成分提取工艺的研究
目的 用正交试验研究中药灵芝中镇静成分的提取工艺.方法 采用四因素三水平的正交实验设计,以出膏率和灵芝多糖及总糖含量为指标,用紫外分光光度计测定浸膏中灵芝多糖及总糖含量,筛选佳工艺条件.结果 40倍量的60%乙醇,80℃回流2 h,即保持沸腾状态2 h为佳工艺.结论 以正交试验法优选的灵芝镇静成分提取工艺方法简单,结果 稳定,效果满意,从而确保质量.
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灵芝三萜组分GLE的体内外抗肿瘤作用
目的:评价灵芝三萜组分GLE的体内外抗肿瘤作用.方法:建立小鼠S180实体瘤和腹水瘤两种模型,观察GLE对实体瘤抑瘤率和腹水瘤生命延长率的影响；采用MTT法检测GLE对人鼻咽癌细胞CNE1和CNE2的体外抗肿瘤活性.结果:3个剂量(125,250,500 mg·kg-1) GLE对S180实体瘤小鼠均具有一定的抑制作用(P＜0.05),500 mg·kg-1组的瘤重抑制百分率达51.4％；对S180腹水瘤小鼠具有明显的延长存活期作用,500 mg·kg-1组的生命延长率为52.0％(P＜0.05)；体外对人鼻咽癌低分化细胞CNE2有一定的抑制作用.结论:GLE对小鼠肉瘤S180及人鼻咽癌低分化细胞CNE2的生长有一定的抑制作用.
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参茸贵细的系统打法
在中药的销售分类中,往往将参茸立为一个大类,参茸大类顾名思义是以人参、鹿茸为主打品种.在长期的销售实践中,药店将比较稀缺的和价格比较贵的中药品种比如羚羊角、西红花、牛黄、狗宝、马宝、灵芝、铁皮石斛、三七、海马、海龙、燕窝等都列为贵细药材,从这个意义上讲,贵细商品是一个大类,而参茸产品是贵细商品中的一个重要分支.不过,现如今药店一般都将贵细品种和参茸品种合在一起并称为“参茸贵细大类”.
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吉祥瑞草话灵芝
在中国流传千古的美丽爱情故事《白蛇传》中有一段白素贞盗仙草的剧情,其中的仙草就是指灵芝.本期,我们就来了解一下这棵能"起死回生"的仙草——灵芝.化朽为奇生灵芝灵芝治愈万症功能应验,灵通神效,此谓之"灵".茯苓生于山谷之中,得松柏之余气而生;槐耳,此槐树上菌也,为槐之余气所生;而灵芝亦为树木腐朽之余气而生.我们习惯把生长在坚硬地方的叫菌,生长在阴柔地方的叫芝,土气和则芝草生,此谓之"芝".中国古人将灵芝归为无根、茎、叶的物种,明代李时珍在《本草纲目》中将其列入菜部.灵芝本身不是植物,是体质坚硬、多孢子的多孔菌科真菌赤芝或紫芝的干燥真菌子实体,自身不能进行光合作用,只能从其他有机物或腐树中摄取养料.
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黄劲松的三个身份
"我从山中来."每次说出这句话时,黄劲松的神情都会变得专注甚至虔诚,因为这句话,或许承载了他下半生的所有梦想.这里的"我"并非自称,而是泛指野生或林下种植的灵芝、鹿仙草、龙血树叶、石斛、何首乌这些云南特有的珍稀药材,通过林下种植的方式,还原其纯天然、原生态的成长环境.这是黄劲松以极大的心血倾注其上并期望毕生与之为伍的事业.
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灵芝多糖肽对自由基所致的腹腔巨噬细胞早期损伤的影响
目的以膜电位方法进一步研究灵芝多糖肽(GLPP)对自由基损伤的巨噬细胞线粒体的影响.方法以叔丁基氢过氧化物(tBOOH)为氧化剂,建立小鼠巨噬细胞体外氧化损伤模型,以罗丹明123(Rh123)为荧光染色剂,以激光共聚焦显微镜检测细胞线粒体膜电位改变.结果 tBOOH氧化剂可损伤线粒体膜,使线粒体膜电位降低,GLPP体内(100 mg·kg-1 ig 5 d)及体外给药(GLPP 10 mg·L-1)均可对抗tBOOH自由基损伤,可使因自由基损伤而降低的巨噬细胞线粒体膜电位恢复.结论 GLPP体内体外给药可减轻自由基损伤,使损伤的线粒体膜电位恢复.
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大鼠灌胃灵芝总三萜后血浆中灵芝酸类成分的检测
研究灵芝中总三萜在大鼠体内的吸收情况.大鼠灌胃给予灵芝总二萜后,利用HPLC-DAD和LC-MS方法鉴定大鼠血浆中的灵芝酸类成分.在大鼠血浆中检测到5种灵芝酸类成分,即灵芝酸C2、灵芝酸C6、灵芝酸G、灵芝酸B和灵芝酸A.大鼠口服灵芝总三萜后灵芝中的灵芝酸类成分能被大鼠吸收.
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GC测定灵芝中24种有机磷农药残留量
目的 研究灵芝中24种有机磷农药残留量的测定方法.方法 样品经冰浴超声提取,凝胶渗透色谱(GPC)净化后,采用不分流进样,用双柱双火焰光度检测器(FPD)气相色谱同时定性、定量测定.结果 样品3水平添加时的24种有机磷农药回收率均在75.28%～117.18%,相对标准偏差在3.19%～15.57%,符合农药残留分析的要求.结论 本法净化效果好,重现性好,可用于灵芝中24种有机磷农药残留量的检测.
关键词： 灵芝 有机磷农药残留 双柱双火焰光度检测器(FPD)气相色谱 -
灵芝中6种主要三萜酸类成分的HPLC定量分析
目的 建立应用RP-HPLC同时测定灵芝中6种主要活性成分灵芝酸A、灵芝酸B、灵芝酸C2、灵芝酸G,灵芝酸E、赤芝酸A含量的方法.方法 采用Diamonsil-C18色谱柱(4.6 mm×250 mm,5 μm),流动相为乙腈和0.8%醋酸水溶液,梯度洗脱,流速1 mL·min-1检测波长254 nm,柱温为室温.结果 灵芝酸A、灵芝酸B、灵芝酸C2、灵芝酸G,灵芝酸E、赤芝酸A的质量分别在0.650～7.800,0.175～2.1130,0.206～2.475,0.188～2.250,0.275～3.300,0.120～1.440 μg的对数值与相应峰面积的对数值呈良好线性关系.平均回收率(n=6)分别为100.06%(RSD=2.6%),99.55%(RSD=1.6%),100.75%(RSD=1.5%),98.86%(RSD=1.9%),99.26%(RSD=2.3%)和98.95%(RSD=1.3%).结论 本方法简单、快速,准确可靠,可作为灵芝药材的质量控制方法.
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复方灵芝乳膏对兔耳轻(Ⅱ)度冻伤治疗作用的初步研究
目的 考察复方灵芝乳膏对家兔耳轻度冻伤模型的治疗作用.方法 将家兔耳浸入-24.5℃酒精浴冷冻槽中20 s,复制家兔耳轻度冻伤模型,涂抹不同浓度的复方灵芝乳膏,观察兔耳表观变化、肿胀程度、存活面积和冻区病理学检查等指标,考察复方灵芝乳膏家兔耳轻度冻伤模型的治疗作用.结果 复方灵芝乳膏2号对家兔耳轻度冻伤有一定的治疗作用,但其治疗作用不如复方灵芝乳膏3号(每1 g乳膏含灵芝生药0.5 g、王不留行0.25 g)和4号(每1g乳膏含灵芝生药1 g、王不留行0.5g)明显；复方灵芝乳膏3号、4号对家兔耳轻度冻伤有明显的治疗作用.结论 复方灵芝乳膏对兔耳轻(Ⅱ)度冻伤治疗作用的初步研究表明,复方灵芝乳膏3号和4号具有深入研究的价值.
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灵芝及其近缘种高效薄层色谱指纹图谱的研究
目的 以赤芝为基础建立灵芝三萜类化合物高效薄层荧光色谱指纹图谱,并与赤芝的近缘种无柄灵芝、平盖灵芝等的指纹图谱进行比较分析.方法 硅胶GF_(254)高效预制薄层板,以正己烷.乙酸乙酯.甲醇.甲酸(30:30:2:0.2)为展开剂展开,展至约5 cm,再以正己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(30:30:1:0.2)为展开剂进行二次展开,10%硫酸乙醇溶液显色后获得薄层荧光色谱指纹图谱,经指纹图谱系统解决方案软件(Chromafinger~(TM))生成共有模式,并进行相似度和主成分分析.结果 赤芝薄层荧光色谱指纹图谱由9个特征荧光条斑组成.荧光色谱图像与轮廓扫描图谱结合分析比较,建立了赤芝指纹图谱模式.赤芝与紫芝、无柄灵芝、平盖灵芝、薄树芝、黑芝等在三萜类化合物方面区别较大.结论 通过封旨纹图谱考察,当前市场灵芝类型主要是赤芝.紫芝为主流,但两者区别较大,其他灵芝的近缘种均为代用品,不可做灵芝使用,应加以区别.
关键词： 灵芝 三萜类化合物 薄层荧光色谱指纹图谱 品种鉴定 -
灵芝抗肿瘤作用机制的研究概述
目的 对近年来关于灵芝抗肿瘤作用机制的研究做整理分析.方法 查阅近年的国内外文献,进行全面综合、整理和归纳.结果 综述了灵芝抗肿瘤的作用机制,重点阐述其在抑制肿瘤细胞增殖、促进肿瘤细胞死亡、抑制肿瘤细胞的侵袭和转移以及免疫调节等多个方面的研究现状.结论 灵芝具有潜在的抗肿瘤作用,但作用机制复杂,亟待进一步研究.
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灵芝过氧化物同工酶和酯酶同工酶的研究
目的:探讨利用同工酶技术对灵芝不同菌株的分类鉴定方法.方法:应用聚丙烯酰胺凝胶电泳法,分析比较过氧化物同工酶和酯酶同工酶酶谱的变化.结果:灵芝5个菌株间存在相似的酶带和相近的Rf值,亲缘关系极其相近,紫芝与其它菌株间酶谱差异较大,亲缘关系相对较远.结论:利用酯酶同工酶对灵芝菌株及菌种进行分类鉴定是一种可靠的方法.
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对用分光光度法测定灵芝中总三萜含量的探讨
目的:考察用分光光度法测定灵芝中总三萜含量的可行性.方法:采用正交试验法和单因素试验法.结果:不同测定条件,测定的结果差异较大,5%香草醛-冰醋酸的用量以0.2 mL为宜,高氯酸的用量以0.8 mL为宜,水浴温度以60 ～ 65 ℃为宜、水浴中加热时间以10 ～ 15 min为宜.结论:该方法测定的结果不一定能反映灵芝中三萜的真实含量,若一定采用该方法测定灵芝中的总三萜含量,应严格控制检测条件,特别是水浴温度和水浴中加热时间.
