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女贞子总三萜的制备及抗氧化活性研究
目的:从中药女贞子中制备总三萜并评价总三萜抗氧化活性.方法:用甲醇浸提,石油醚、乙酸乙酯先后萃取,并用乙醇热溶冷沉纯化制备总三萜,并测试总三萜抗氧化活性.结果:总三萜含量高,抗氧化活性高.结论:该制备方法简单,总三萜抗氧化活性显著高于单体三萜的抗氧化活性.
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药用拟层孔菌子实体提取物的抗肿瘤活性研究
目的:测定药用拟层孔菌子实体的石油醚粗提物、乙酸乙酯粗提物和甲醇粗提物的总三萜及总甾醇含量;研究3种粗提物及从乙酸乙酯粗提物中分离得到的三萜类单体化合物的体内抗肿瘤活性.探讨其抗肿瘤活性与总三萜和总甾醇含量的关系.方法:通过分光光度法测定3种粗提物的总三萜和总甾醇含量.通过H22荷瘤小鼠移植模型的体内抗肿瘤实验,观察该真菌子实体的石油醚提取物、乙酸乙酯提取物、甲醇提取物及三萜类单体化合物的抗肿瘤活性进行评价.结果:乙酸乙酯粗提物中总三萜含量和总甾醇含量高,石油醚次之.从乙酸乙酯层分离得到5个单体化合物:去氢齿孔酮酸,3-酮基-去氢硫色多孔菌酸,去氢齿孔酸,阿里红酸A和阿里红酸C.在体内实验中,乙酸乙酯层抑瘤率效果佳,当浓度达到1 000 mg·kg-1时抑瘤率为64.65％,与阳性药5-氟尿嘧啶(5-Fu)的抑瘤率(59.98％)接近,并且免疫器官指数均有一定的变化.单体化合物2(3-酮基-去氢硫色多孔菌酸)抑瘤率为75.13％,与阳性药物CTX(81.76％)抑瘤率接近,比阳性药5-Fu高.其余4种单体化合物也有一定作用效果.结论:乙酸乙酯提取物及这5种单体化合物能有效抑制肿瘤的生长,并且对机体的免疫力有较好的促进作用,该5种单体化合是药用拟层孔菌子实体的抗肿瘤活性成分,药用拟层孔菌的抗肿瘤活性成分可能是三萜类化合物.
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王瓜的微波-超声波联合提取工艺优选及抗氧化活性考察
目的:优选王瓜的微波-超声波联合提取工艺并考察其抗氧化活性.方法:以总三萜质量分数为指标,通过单因素试验和正交试验考察乙醇体积分数、提取时间、料液比、微波功率对王瓜提取工艺的影响；采用DPPH法、水杨酸法、ABTS法和FRAP法测定提取物的抗氧化能力.结果:佳提取工艺条件为加50倍量90％乙醇于500 W微波-超声波联合提取6 min；王瓜提取物清除DPPH·、清除ABTS+·和Fe3+还原/抗氧化能力大于茶多酚但小于抗坏血酸,清除OH·能力均小于二者.结论:优选的提取工艺简便、快速,王瓜提取物具有一定的抗氧化性能.
关键词： 王瓜 总三萜 提取工艺 抗氧化活性 微波-超声波联合提取 -
鸭脚木皮中总三萜的提取工艺优化
目的:建立鸭脚木皮中总三萜的含量测定方法并优选其提取工艺.方法:采用香草醛-高氯酸-浓硫酸法测定总三萜含量,检测波长540 nm.以总三萜提取率为指标,通过正交试验考察料液比、提取时间和提取次数对鸭脚木皮中总三萜提取工艺的影响.结果:以齐墩果酸为对照品,线性范围0.083 2 ～0.280 02 mg,加样回收率99.36％.佳提取工艺为加10倍量水煎煮提取3次,每次1h;总三萜平均提取率2.94％,RSD 0.5％.结论:建立的总三萜含量测定方法稳定可靠,优选的提取工艺合理可行,为鸭脚木皮有效部位的开发提供参考.
关键词： 鸭脚木皮 总三萜 香草醛-高氯酸-浓硫酸法 正交试验 提取工艺 -
桑黄总三萜的提取及其体外抗脑胶质瘤U251活性
目的:优化药用真菌桑黄总三萜的超声提取工艺并测定其对脑胶质瘤U251生长的抑制作用.方法:采用正交设计试验对超声辅助提取过程中影响桑黄总三萜得率的乙醇体积分数、超声时间、超声温度和料液比等因素进行优化;采用MTT比色法测定桑黄总三萜对U251细胞株增殖的抑制率,应用倒置相差显微镜观察桑黄总三萜对肿瘤细胞形态结构的影响.结果:超声辅助提取桑黄总三萜的佳工艺条件为70％乙醇,超声提取20 min,温度60℃,料液比1∶25.在此条件下,桑黄总三萜提取率可达9.40 mg·g-1.桑黄总三萜对脑胶质瘤U251细胞株有抑制增殖作用,且表现出浓度依赖关系,倒置相差显微镜下可见部分细胞形成凋亡小体.结论:采用超声辅助提取桑黄总三萜时间短、得率高,是一种高效、快捷的方法,桑黄总三萜可抑制脑胶质瘤U251细胞株的增殖,诱导肿瘤细胞凋亡.
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液固压缩技术速释茯苓皮总三萜片中松苓新酸和去氢依布里酸的机制探索
目的:探讨液固压缩技术速释茯苓皮总三萜片中松苓新酸和去氢依布里酸的机制.方法:以松苓新酸和去氢依布里酸为指标成分,比较茯苓皮总三萜液固压缩片与原料药体外溶出度的差异,采用差示扫描量热法(DSC)对茯苓皮总三萜原料药、液固压缩片粉末和液固压缩片辅料混合粉末进行物相表征.结果:液固压缩技术可显著提高松苓新酸和去氢依布里酸的溶出速率.茯苓皮总三萜液固压缩片中松苓新酸和去氢依布里酸在120 min时的总溶出度92％,t50(溶出总浓度50％所需时间)和tD(溶出总浓度63.2％所需时间)分别为11.18,22.71 min;总三萜原料中松苓新酸和去氢依布里酸的总溶出度29％,t50和tD分别为231.06,359.23 min.DSC分析显示辅料对茯苓皮总三萜不存在相互作用,液固压缩片粉末的DSC曲线上,主药吸收峰完全消失,说明药物在液固粉末中是以非晶型形式存在.结论:液固压缩技术可改善茯苓皮总三萜的溶出度,使难溶性药物快速释药.
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大孔树脂纯化七叶莲总三萜工艺研究
目的:研究大孔树脂纯化七叶莲总三萜的工艺条件及参数.方法:采用紫外分光光度法测定七叶莲总三萜含量,选择3种大孔树脂,以总三萜吸附率和解吸率为指标,筛选适宜树脂类型,并对分离纯化工艺进行优化.结果:AB-8树脂对总三萜的吸附解吸效果好.佳纯化工艺条件:以自然pH条件下的样液上样,上样浓度为0.884mg/mL,大上样量6BV,用8BV的80％乙醇进行洗脱.该工艺下产品的洗脱率达48.14％,纯化后总三萜的质量分数达45.98％.结论:AB-8大孔树脂分离纯化七叶莲总三萜工艺效果好,简单可行,可为工业化纯化七叶莲总三萜提供理论依据.
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大孔树脂分离纯化桑黄总三萜的研究
目的:研究大孔树脂对桑黄总三萜的吸附特性,优化其对总三萜分离纯化工艺.方法:用分光光度计法测定总三萜含量,通过静态试验确定适合纯化总三萜成分的树脂型号,研究D101树脂对桑黄总三萜的纯化工艺.结果:D101树脂对桑黄总三萜有良好的纯化性能,工艺条件为:上样液pH值为6,上样液质量浓度为1.0mg/mL,上样流度为3BV/h,上样体积为4BV,先用3BV蒸馏水、20％乙醇溶液2BV洗去杂质、再用70％乙醇溶液4BV洗脱,流速为3BV/h;经D101树脂纯化后,总三萜纯度由(4.46±0.42)％上升至(22.49±0.75)％.结论:D101树脂可用于桑黄总三萜的富集纯化.
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柳茶总三萜提取富集工艺优化及抗缺氧活性研究
目的 优选藏药柳茶总三萜的提取富集工艺并研究其抗缺氧活性.方法 通过小鼠常压密闭缺氧实验筛选柳茶总三萜的提取溶剂;再以总三萜含量、提取率为评价指标,采用正交试验考察提取时间、提取次数、料液比,优选柳茶总三萜的提取工艺;然后考察大孔吸附树脂类型、上样浓度、洗脱剂浓度、洗脱剂体积,优选其富集工艺;后通过小鼠常压密闭缺氧实验和急性减压缺氧实验研究其抗缺氧活性.结果 优选的提取工艺为:70%乙醇提取,料液比为1:20,提取2次,每次1.5 h,平均总三萜含量可达32.25%;优选的富集工艺为:AB-8型大孔吸附树脂,上样浓度为2 mg/mL,80%乙醇5 BV洗脱,总三萜含量可达61.09%;柳茶总三萜抗缺氧活性较强,且存在一定的剂量依赖性.结论 本研究优选的柳茶总三萜提取富集工艺稳定、重现性好,所得柳茶总三萜具有显著的抗缺氧活性.
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柿叶中总三萜的提取以及熊果酸分离、纯化研究
目的 研究了柿叶中总三萜的提取以及熊果酸的分离、纯化,并确定了提取、分离及纯化的适宜工艺条件,以利于柿叶资源的开发利用.方法 以总三萜得率为指标,采用溶剂提取法筛选出总三萜提取的合适工艺,以及经脱脂、除杂、结晶得到熊果酸的合适条件.熊果酸晶体用EI-MS,ESI-MS,1H-NMR和13C-NMR等方法进行了表征.结果 优化的总三萜的提取精制工艺条件为:柿叶粉用石油醚(沸点60～90℃)在60℃和液固比为6的条件下,脱色除杂3次,每次2 h;脱色除杂后柿叶用乙酸乙酯作为提取溶剂,在70℃和液固比为6的条件下,提取3次,每次2 h,合并乙酸乙酯提取液减压蒸干得到总三萜,总三萜得率约为4.1%,纯度约为63.1%.熊果酸的分离、纯化工艺条件为:乙酸乙酯粗提物用石油醚,60℃和液固比为30的条件下,脱色除杂3次,每次30 min;然后,每0.4 g经石油醚脱色除杂后的乙酸乙酯提取物用40 mL乙醇溶解,加入0.4 g左右活性炭,30℃下脱色2次,每次20 min;后,经活性炭脱色后的乙酸乙酯提取物用乙醇结晶两次就得到熊果酸晶体.经现代谱学方法研究证明,所得晶体为熊果酸,HPLC测定熊果酸含量超过98%,总产率在0.4%左右(以干柿叶计).结论 该工艺简单易行、快捷,成本较低、产品纯度高、环境污染小,适合工业规模化提取总三萜及生产熊果酸.
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对用分光光度法测定灵芝中总三萜含量的探讨
目的:考察用分光光度法测定灵芝中总三萜含量的可行性.方法:采用正交试验法和单因素试验法.结果:不同测定条件,测定的结果差异较大,5%香草醛-冰醋酸的用量以0.2 mL为宜,高氯酸的用量以0.8 mL为宜,水浴温度以60 ～ 65 ℃为宜、水浴中加热时间以10 ～ 15 min为宜.结论:该方法测定的结果不一定能反映灵芝中三萜的真实含量,若一定采用该方法测定灵芝中的总三萜含量,应严格控制检测条件,特别是水浴温度和水浴中加热时间.
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大孔树脂纯化五味子总木脂素、总三萜工艺研究
目的 考察大孔树脂纯化五味子总木脂素总三萜的佳工艺.方法 比较了5种不同类型大孔树脂对五味子总木脂素、总三萜、五味子醇甲的吸附解析性能,确定适宜的树脂类型和佳纯化工艺条件.结果 AB-8型树脂吸附解析效果好;佳工艺条件:上样液浓度1.5 mg/mL,大上样量7BV,蒸馏水洗脱体积9BV,洗脱溶剂为30%乙醇(9BV)+80%乙醇(10BV);纯化后终产品中总木脂素、总三萜、五味子醇甲的质量分数分别为39.55%、13.96%、8.95%.结论 本文所报道的梯度洗脱法可显著提高终产品中总木脂素、总三萜、五味子醇甲的质量分数,验证了其工业生产的可能.
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紫外分光光度法测定灵芝孢子油中总三萜含量
目的:建立紫外分光光度法测定灵芝孢子油中总三萜含量.方法:以齐墩果酸为对照品,与5％香草醛-冰乙酸反应,在高氯酸环境下显色,在545 nm处测定样品吸光度.结果:齐墩果酸在0.02 ～0.12 mg范围内线性关系良好,y=11.033X-0.0441,r=0.9998.重复性实验,RSD为2.84％(n=6).平均回收率78.43％,RSD为3.5％(n=6).结论:经过线性、重复性、精密度、回收率实验,确认本方法适用于灵芝孢子油总三萜的含量测定.
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三种灵芝不同部位的活性成分含量差异性分析
目的：比较三种灵芝（霍芝1号、韩芝、日芝）不同药用部位的总多糖、总三萜、灵芝酸A及灵芝酸B的含量差异，为全面评价灵芝药材及孢子粉的质量及其药用成分的合理利用提供依据。方法采用苯酚-硫酸法测定总多糖含量；香草醛-冰乙酸-高氯酸显色法测定总三萜的含量；HPLC法测定灵芝酸A、B的含量。结果每种灵芝不同药用部位的总多糖含量由高到低依次为：孢子粉＞菌盖＞菌柄；每种灵芝不同药用部位的总三萜含量由高到低依次为：菌盖＞菌柄＞孢子粉；每种灵芝不同药用部位的灵芝酸A和灵芝酸B含量由高到低依次为：菌盖＞菌柄＞孢子粉，且灵芝酸A的含量均明显高于灵芝酸B。结论该研究为全面评价灵芝子实体及孢子粉的质量及其药用成分的合理利用提供依据。
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野生大豆内生真菌及发酵液中高质量分数次生代谢产物菌株筛选
目的 以分离纯化的42株野生大豆内生真菌为材料,分析内生真菌菌丝及发酵液中次生代谢产物的积累,筛选高产次生代谢产物内生菌株.方法 采用液体发酵摇瓶培养法及紫外分光光度法对不同内生真菌菌丝及发酵液中的总三萜、黄酮、多糖、多酚与总酚的量进行检测.结果 42株野生大豆内生真菌菌丝中,筛选获得高质量分数多糖菌株为Y2S9、WDL3和WDL2,质量分数高可达85.51 mg/g;高质量分数黄酮菌株为Y1S9和Y6S8,质量分数分别为2.99和2.24 mg/g;高质量分数三萜菌株为Y6S8、Y2R1、Y6R2,质量分数分别为25.55、17.89、15.96 mg/g;而WDS7总酚量高,为22.65 mg/g.内生真菌发酵液中,黄酮量较高菌株为Y1S8和SYS4,其质量浓度分别为3.11和4.81 mg/L;总三萜质量浓度较高的菌株为YSYL2、Y1S8、WDL3,质量浓度分别为17.46、35.00、42.98 mg/L.结论 不同生境可能是导致次生代谢产物量差异的主要原因,本研究筛选出高产次生代谢产物野生大豆内生真菌菌株11株,为野生大豆内生真菌功能挖掘及新药筛选奠定了基础.
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星点设计-效应面法优化牛樟芝总三萜提取工艺及其抗肿瘤活性研究
目的 研究牛樟芝总三萜(ACTT)提取工艺及其抗肿瘤活性.方法 采用星点设计-效应面法(CCD-RSM)优化ACTT的提取工艺;通过MTT法检测其对人肝癌HepG2细胞体外增殖抑制作用;以佳质量浓度的ACTT提取物(ACTTE)处理HepG2细胞,应用荧光显微镜进行形态学观察;应用AnnexinV凋亡检测试剂盒进行流式细胞分析,应用流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 优化的工艺为加20倍量的90％乙醇,超声提取2次,每次40 min,超声功率400 W,ACTT提取率达11.87％,实际值与预测值的偏差为1.56％;不同质量浓度(12.5～200 μg/mL)的ACTTE对HepG2细胞的增殖均有明显的抑制作用(P＜0.01);直接形态显微观察及Hoechst33342荧光染色可观察到核浓缩及核碎裂等典型细胞凋亡特征及凋亡小体;流式细胞仪结果显示,给药组细胞凋亡率与空白组相比,有显著差异(P＜0.01).结论 CCD-RSM优化牛樟芝的超声醇提工艺,实际值与预测值吻合度高,预测性良好,是可行的;ACTTE体外对HepG2细胞有明显的增殖抑制及诱导凋亡的作用.
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苹果树枝中总三萜的提取工艺
[目的]研究苹果树枝中总三萜的提取工艺.[方法]采用紫外分光光度法建立总三萜含量测定,用单因素和正交试验法考察了提取溶剂浓度、提取温度、提取时间对总三萜提取的影响.[结果]苹果树枝中总三萜的佳提取条件是100℃,5倍量60％乙醇,回流提取40 min,三萜化合物含量达到18.23 mg/g.[结论]该优化工艺对总三萜有较高的提取率.
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分光光度法测定灵芝孢子油中的总三萜含量
采用硅胶层析柱将灵芝孢子油中的甘油三酯及溶于其中的可能对总三萜含量测定造成干扰的组分分离除去,然后再用分光光度法测定灵芝孢子油中的总三萜含量.该方法简单快速,得到了满意的结果,可用于质量控制.
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湖南、江西产侗药血马鞭的总三萜含量测定
目的:测定湖南、江西产血马鞭的总三萜含量.方法:采用正交实验优选佳提取工艺,分光光度法测定血马鞭中总三萜含量.结果:湖南、江西产血马鞭的总三萜含量在0.97％ ～ 4.29％之间.结论:湖南、江西产血马鞭总三萜含量有差异,其中湖南怀化会同县栽培的血马鞭总三萜含量高,湖南怀化郊区林下自然生长的血马鞭总三萜低.
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响应面法优化茯苓总三萜超声波提取工艺
目的:优选茯苓总三萜的超声波提取工艺.方法:在单因素考察的基础上,以茯苓中总三萜的得率为评价指标,采用响应面分析法(选取乙酸乙酯为溶剂,料液比、提取温度、提取时间)确定佳的超声波辅助提取工艺.结果:佳工艺为30倍体积的乙酸乙酯,超声时间32 min,超声温度35℃,茯苓总三萜的得率为0.685％.验证试验结果为0.683％,与预测值接近.结论:Box-Behnken-设计的响应面优化茯苓总三萜的提取工艺方法简单,合理,可预测性优.
