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胶体金免疫层析法检测高含量尿HCG呈假阴性1例分析
胶体金标记免疫层析法测定尿绒毛膜促性腺激素(HCG)已广泛应用于检查早孕及其它引起HCG增高的疾病,具有简便、快速、准确性高、试剂稳定等优点,但在某些情况下,如葡萄胎、恶性葡萄胎等,尿中HCG含量过高,则有时会产生假阴性结果.本文用博赛牌胶体金免疫层析试条测试一例葡萄胎患者尿液HCG,结果呈假阴性,报告如下.
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一种胶体金免疫层析试条检测犬利什曼原虫感染的效果评价
目的 评价检测内脏利什曼病特异抗体的胶体金免疫层析试条检测我国动物源型内脏利什曼病流行区犬血样的效果. 方法 以杜氏利什曼原虫前鞭毛体粗抗原作为包被抗原,以链球菌G蛋白标记胶体金制成检测特异抗体的免疫层析试条(immunochromatographic strip test,ICT).用该试条检测甘肃省陇南市武都区(动物源型黑热病流行区)和甘肃省漳县(非流行区)犬的腿弯处静脉血样品,同时用镜检法、PCR和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)分别检测犬骨髓、静脉血和血清样本,并比较各种检测方法的敏感性差异. 结果 对动物源型内脏利什曼病流行区的105头犬的骨髓涂片镜检,阳性检出率为7.62％ (8/105).应用PCR法的阳性检出率为48.57％ (51/105);检测非流行区30份犬静脉血,1份为阳性,阳性检出率为3.33％ (1/30).试条法和ELISA法检测内脏利什曼病流行区的105份犬血样的阳性检出率分别为32.38％ (34/105)和33.33％ (35/105);检测内脏利什曼病非流行区的30份犬血样均为阴性.镜检法的阳性检出率低于PCR法、试条法和ELISA法(x2=43.58、20.12、21.32,P＜0.05),PCR法的阳性检出率高于镜检法、试条法和ELISA法(x2=43.58、5.71、5.04,P＜0.05),试条法和ELISA法阳性检出率无统计学差异(x2--0.02,P＞0.05). 结论 快速检测内脏利什曼病的胶体金免疫层析试条适用于检测动物源型内脏利什曼病流行区犬血样中特异性抗体.
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两种鉴别诊断恶性疟和间日疟免疫层析试条检测效果评价
目的 对两种快速、简便能区分诊断恶性疟和间日疟的胶体金免疫层析试条的检测效果进行评价. 方法 筛选基于恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ和恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记筛选到的单克隆抗体C6E9和G4C9,并将其同时吸附于样品垫;将单克隆抗体B2G10(针对恶性疟原虫与间日疟原虫)和C6H.(只针对恶性疟原虫)分别划线包被于同一硝酸纤维素膜适当位置,制成免疫层析检测试条.用该试条检测疫区非疟疾发热病人血样(120份)和内脏利什曼病患者血样(20份)以评价其特异性,检测确诊的疟疾患者血样(间日疟105份,恶性疟95份)以评价其敏感性.均用单盲法检测,同时用基于恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对制备的试条进行平行检测. 结果 检测120份疫区非疟疾发热病人血样和20份内脏利什曼病患者血样,有138份显示为阴性,特异性为98.6％,其中20份内脏利什曼病患者血样全部为阴性.检测200份疟疾患者血样,阳性190份,敏感性为95.0％,其中间日疟检出率为93.3％ (98/105),恶性疟检出率为96.8％ (92/95).基于恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对制备的试条检测的敏感性和特异性分别为93.5％ (187/200)和95.7％ (134/140),与本研究制备的基于恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ和恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对的试条比较两者敏感性(x2=0.42,P＞0.05)和特异性(x2=1.09,P＞0.05)的差异均无统计学意义. 结论 研制出的基于恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ和恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对的快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条敏感性、特异性均较高.
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快速检测内脏利什曼病特异抗体胶体金免疫层析试条方法的建立与效果评价
目的 建立快速、简便地检测内脏利什曼病特异抗体的胶体金免疫层析试条方法,并评价效果. 方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,用以标记链球菌G蛋白(streptococcal protein G,SPG),并将其吸附于交联释放垫上;将杜氏利什曼原虫前鞭毛体粗抗原作为包被抗原,包被于硝酸纤维素膜适当位置,制成检测特异抗体的免疫层析试条.用该试条检测病原学确诊的内脏利什曼病(129例)、疟疾(20例)、细粒棘球蚴病(10例)、日本血吸虫病(10例)、并殖吸虫病(5例)、华支睾吸虫病(5例)等患者血清,以及健康者(40例)血清,评价其敏感性和特异性.同时用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)进行平行检测. 结果 试条法检测129份黑热病患者血清,124份为阳性,敏感性为96.1％;与疟疾患者血清存在10.0％ (2/20)的交叉反应;与日本血吸虫病患者血清存在10.0％ (1/10)的交叉反应;与健康者血清存在2.5％ (1/40)的假阳性反应;与10份细粒棘球蚴病患者血清,5份并殖吸虫病患者血清和5份华支睾吸虫病患者血清均无交叉反应,总特异性为95.6％ (86/90).该方法与ELISA法的符合率为99.2％,二者阳性检出率之间的差异无统计学意义(x2=0.12,P＞0.05),二者特异性之间的差异也无统计学意义(x2=0.42,P＞0.05). 结论 成功建立快速检测内脏利什曼病的胶体金免疫层析试条,该试条敏感性、特异性均较高.
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检测恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ的疟疾诊断免疫层析试条的研制与评价
目的 建立一种快速、简便的诊断恶性疟的胶体金免疫层析试条方法,并对其进行评价.方法 克隆、表达恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ基因,以表达的重组蛋白免疫BALB/c小鼠,制备单克隆抗体,筛选恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ特异的单克隆抗体,分别作为包被抗体和标记抗体,制备免疫层析试条.用该试条检测流行区非疟疾发热患者血样80份、内脏利什曼病患者血样20份和确诊的间日疟患者血样75份以评价其特异性；检测确诊的恶性疟患者血样89份,以评价其敏感性. 结果 成功克隆并表达了恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ,用重组蛋白免疫小鼠制备单克隆抗体,采用杂交瘤技术共筛选出5株能高效分泌特异抗体的细胞株(效价为1:12 800～1:102 400),抗体亚类均为IgG1.所有抗体均能唯一识别恶性疟原虫虫源蛋白组分,而与疫区非疟疾发热患者的红细胞组分无交叉反应.以筛选到的单克隆抗体制备的免疫层析试条检测疫区非疟疾发热患者、内脏利什曼病患者和间日疟患者血样的特异度为97.7％(171/175),其中20份内脏利什曼病患者血样全部为阴性.检测恶性疟患者血样敏感度为95.5％(85/89). 结论 制备了能识别天然恶性疟原虫富组蛋白Ⅱ的特异性单克隆抗体,以此单抗为基础研制出的快速诊断恶性疟的胶体金免疫层析试条敏感度、特异度均较高.
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胶体金免疫层析试条法检测囊型棘球蚴病患者血清特异性抗体效果评价
目的 建它一种快速、简便诊断囊型棘球蚴病的胶体金免疫层析试条方法 ,并对其进行评价.方法 采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记抗人IsG4单克隆抗体,并将其吸附于样品垫上;将羊肝棘球蚴包囊液抗原作为包被抗原包被于硝酸纤维素膜适当位置,制成检测特异抗体的免疫层析试条.用该试条检测确诊的囊型棘球蚴病患者血清155份,以评价其敏感性,检测健康者血清50份和其他寄生虫病患者血清50份(其中囊尾蚴病患者血清30份,血吸虫病、弓形虫病、并殖吸虫病、肝吸虫病患者血清各5份)以评价其特异性.均用单盲法检测,同时用酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immu-nosorbent assay,ELISA)进行平行检测.结果试条法检测155份囊型棘球蚴病患者血清,133份为阳性,灵敏度为85.8%;其他寄生虫病患者血清50份,44份为阴性;50份健康者血清全部为阴性,总特异度为94.0%.该方法 与ELISA的符合率为97.1%,二者阳性检出率之间的差异无统计学意义(r=0.25,P>0.05).结论 快速诊断囊型棘球蚴病的胶体金免疫层析试条法灵敏度、特异度均较高.
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快速检测美洲钩虫特异抗体胶体金免疫层析试条方法的建立与效果评价
目的 建立简便、快速检测美洲钩虫特异抗体胶体金免疫层析试条方法并评价其检测效能.方法 将美洲钩虫成虫置液氮中研磨,通过膜蛋白表面活性剂浸泡、再经液氮反复冻融和硫酸铵沉淀提取成虫可溶性抗原.用制备的成虫可溶性抗原作为包被抗原,以胶体金标记G蛋白为检测探针,制备检测钩虫特异抗体的免疫层析试条.用该试条检测美洲钩虫、蛔虫、鞭虫、日本血吸虫和刚地弓形虫等寄生虫感染者的血清以及健康人血清,评价该试条检测的敏感性和特异性,同时用ELISA进行平行检测,以评价该试条的检测效能.结果 制备了检测钩虫特异抗体的胶体金免疫层析试条.用该试条和ELISA法分别检测美洲钩虫、蛔虫、鞭虫、血吸虫、刚地弓形虫感染者血清95、10、11、10和10份,健康人血清74份.试条和ELISA检测美洲钩虫感染者血清的敏感性分别为88.4％ (84/95)和90.5％ (86/95),检测74份健康人血清假阳性率分别为4.1％ (3/74)和6.8％(5/74);与蛔虫感染者血清的交叉反应分别为2/10和4/10,与鞭虫感染者血清的交叉反应分别为1/11和4/11,试条法与血吸虫和弓形虫感染者血清无交叉反应,ELISA法与血吸虫感染者的交叉反应为1/10,与弓形虫感染者血清无交叉反应.试条法与ELISA法的特异性分别为94.9％(109/115)和88.7％(102/115),检测效能分别为91.9％和89.5％.试条法与ELISA法敏感性、特异性的差异均无统计学意义(P＞0.05).结论 以美洲钩虫成虫可溶性抗原制备的快速检测美洲钩虫特异抗体胶体金免疫层析试条检测美洲钩虫感染者血清的敏感性和特异性均较高.
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快速诊断多房棘球蚴病胶体金免疫层析试条方法的建立与评价
目的 建立快速、简便诊断多房棘球蚴病的胶体金免疫层析试条方法.方法 提取多房棘球蚴原头节总RNA,通过RT-PCR获得编码Em18基因片段并克隆入pGEX-3X表达载体,异丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达得到重组蛋白；采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金,标记抗人IgG单克隆抗体；将重组Em18抗原包被于硝酸纤维素膜适当位置,制成检测特异抗体的胶体金免疫层析试条.用该试条检测多房棘球蚴病(56份)、细粒棘球蚴病(87份)、囊尾蚴病(30份)、日本血吸虫病(10份)和弓形虫病(10份)患者血清,以及健康人(50份)血清,以评价其检测的敏感性和特异性,同时用ELISA法进行平行检测,以评价该试条的诊断性能.结果 以重组蛋白Em18为抗原胶体金免疫层析试条检测多房棘球蚴病患者血清,敏感性为92.9％ (52/56).与细粒棘球蚴病和囊尾蚴病患者血清分别存在9.2％(8/87)和3.3％ (1/30)的交叉反应,与健康人血清存在8.0％( 4/50)的假阳性率,与日本血吸虫病和弓形虫病患者血清则无交叉反应,特异性为93.0％( 174/187).ELISA法检测的敏感性和特异性分别为94.6％ (54/56)和92％(172/187),与试条法比较两者差异均无统计学意义(P＞0.05).kappa分析结果显示,试条法与ELISA法检测多房棘球蚴病患者血清的结果高度一致(κ=0.98).结论 以重组Em18抗原建立的快速诊断胶体金免疫层析试条,检测多房棘球蚴病的敏感性和特异性均较高.
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快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条方法的建立与评价
目的 建立一种能区分恶性疟的快速、简便诊断疟疾的胶体金免疫层析试条方法,并对其进行评价.方法 筛选基于恶性疟原虫乳酸脱氢酶制备的单克隆抗体对,采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记筛选到的单克隆抗体F4H12、G4C9和D8F7,并将其吸附于样品垫;将单克隆抗体B2G10(针对恶性疟原虫与间日疟原虫)和D6A7(只针对恶性疟原虫)分别划线包被于同一硝酸纤维素膜适当位置,制成免疫层析检测试条.用该试条检测疫区非疟疾发热病人血样(107份)和内脏利什曼病患者血样(17份)以评价其特异性,检测确诊的疟疾患者血样(间日疟110份,恶性疟54份)以评价其敏感性.均用单盲法检测.结果 检测107份疫区非疟疾发热病人血样和17份内脏利什曼病患者血样,有119份显示为阴性,特异性约为96.0%;其中17份内脏利什曼病患者血样全部为阴性.检测164份疟疾患者血样,阳性153份,敏感性为93.3%,其中间日疟检出率为92.7%(102/110),恶性疟检出率为94.4%(51/54).结论 研制出的快速诊断疟疾胶体金免疫层析试条敏感性、特异性均较高.
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检测特异抗体胶体金免疫层析试条诊断内脏利什曼病患者现场评价
目的 在现场评价检测内脏利什曼病特异抗体的胶体金免疫层析试条诊断内脏利什曼病患者的效果.方法 2013年采集动物源型内脏利什曼病流行区(四川省、甘肃省)和人源型内脏利什曼病流行区(新疆喀什市)疾病预防控制中心门诊就诊的病人血样和骨髓样本,用镜检法、内脏利什曼病试条和rK39试条进行平行测试,以镜检法为金标准,比较两种试条法检测的敏感性和特异性有无差异.结果 内脏利什曼病试条和rK39试条检测镜检确诊的97例内脏利什曼病患者的敏感性分别为98.87％(96/97),97.94％(95/97),二者无统计学差异(x2=0.34,P＞0.05).两种试条检测非内脏利什曼病病例145例,均有2例假阳性反应,特异性为98.62(143/145).对来自动物源型内脏利什曼病流行区和人源型内脏利什曼病流行区的内脏利什曼病患者分别统计阳性率,结果显示内脏利什曼病试条和rK39试条法检测动物源型和人源型流行区的内脏利什曼病患者血样之间阳性率的差异均无统计学意义(x2=0.22 /0.01,P＞0.05).两种试条法检测动物源型和人源型内脏利什曼病流行区非内脏利什曼病患者血样之间特异性的差异也均无统计学意义(x2=0.29,P＞0.05).结论 快速检测内脏利什曼病的胶体金免疫层析试条适用于检测动物源型内脏利什曼病流行区患者血样中的特异性抗体.
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巨片形吸虫病快速诊断胶体金免疫层析试条的研制与评价
目的 建立快速、简便诊断巨片形吸虫病的胶体金免疫层析试条方法.方法 提取巨片形吸虫总RNA,通过RT-PCR获得FgCL1-YN基因片段,并克隆入pET28a(+)表达载体,异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达得到重组蛋白(rFgCL1-YN);将rFgCL1-YN和羊抗鼠IgG抗体分别包被于硝酸纤维素膜的适宜位置作为检测带和质控带,以胶体金标记抗人IgG4抗体的鼠单抗作为检测试剂,制备检测特异性IgG4型抗体的免疫层析试条.用该试条检测巨片形吸虫病患者(30份)、日本血吸虫病患者(15份)以及健康人(32份)血清,评价其诊断价值,同时用ELISA法进行平行检测作为对照.结果 试条检测法的敏感性为100％(30/30),特异性为97.9％(46/47),总体符合率为98.7％(76/77).ELISA法检测的敏感性、特异性和总体符合率分别100％(30/30)、100％(47/47)和100％(77/77).试条法与ELISA法的敏感性、特异性和总体符合率,经四格表确切概率法检验,P值分别为1、0.5和0.5,全部大干0.05.显示,试条法与ELISA法检测巨片形吸虫病患者血清的结果高度一致.另外,试条法的检测时间为10 min,血清用量低于10μL,且具较高的敏感度.结论 以rFgCL1-YN建立的快速诊断胶体金免疫层析试条,检测巨片形吸虫病具有较高的诊断价值.
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HBsAG／HBeAg联检胶体金免疫层析试条的应用评价
胶体金免疫层析技术(GICA)是90年代初在免疫渗滤技术的基础上建立的一种简易快速的免疫学检测手段，由于其独特的原理及操作优势，已广泛应用于临床实验室。近，又有HBsAg／HBeAg联检胶体金免疫层析试条的推出，为此，我们对其进行了实验评价。……
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快速诊断包虫病免疫层析试条
包虫病(Hydatid disease或Hydatidosis)是一种人畜共患的寄生虫病,流行于欧、亚、非和地中海区域沿岸国家,以及澳洲和南美.包虫病在我国23个省、自治区、直辖市都有病例报告,新、青、甘、宁、藏五省区流行严重.
