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人干燥综合征B抗原的基因克隆及融合表达

杨湘越;兰小鹏;钟智强;朱忠勇

摘要: 目的:建立新的检测方法,克隆并表达人干燥综合征B抗原(SS-B). 方法:应用逆转录PCR(RT-PCR)技术,从HL-60细胞株中克隆SS-B全长基因,将PCR产物直接TA克隆、鉴定及测序,再定向克隆至pGEX-5T载体中,转入大肠杆菌BL-21,阳性克隆鉴定后在IPTG诱导下表达,产物行十二烷基硫酸钠-多丙烯酰胺冻胶电泳(SDS-PAGE)和蛋白质印迹法(Western blot)试验. 结果:PCR产物约为1 200 bp,与预期1 224 bp接近,测序结果与GenBank报道的完全一致.pGEX-5T- SS-B重组阳性克隆酶切鉴定正确,SDS-PAGE和Western blot结果显示融合蛋白相对分子质量为71 000,具有天然SS-B的免疫原性. 结论:成功克隆表达SS-B,为下一步研究奠定了基础.

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