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铜绿假单胞菌噬菌体PaP3基因组电转化宿主菌的条件初探

周莹冰;申晓冬;丛延广;李明;黄建军;胡晓梅;胡福泉

摘要: 目的:研究将铜绿假单胞菌噬菌体PaP3基因组DNA电转入其宿主菌并获得噬斑的基本条件.方法:以铜绿假单胞菌PA3作受体菌,将噬菌体PaP3基因组DNA通过电转化导入受体菌中,研究细胞生长状态、感受态细胞的制备方式、电场强度、DNA浓度和细胞密度等条件对转化效率的影响.结果:在含50 μg/ml红霉素的LB培养液中培养宿主菌14~16 h,以100 mmol/L蔗糖溶液为介质,在25℃条件下制备感受态并使其浓度达到10 11/ml,电转参数为12 kV/cm,300 Ω,25 μF,在此组条件下能获得较高的转化效率,高可达2.1×103 pfu/μg的DNA.结论:确定了一组电转条件,成功地将铜绿假单胞菌噬菌体完整基因组导入PA3中,并形成噬斑,为铜绿假单胞菌噬菌体的深入研究奠定了基础.

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