野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜组织中TRAIL、TNF-α表达的影响
摘要： 目的 研究野菊花总黄酮对佐剂性关节炎大鼠滑膜细胞的增殖功能以及滑膜组织中TRAIL、TNF-α表达的影响.方法 SD大鼠随机分成6组:正常组、模型组、TFC大、中、小剂量组和阳性药雷公藤多苷(TPT)对照组;SD大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂复制AA模型;MTT法检测滑膜细胞的增殖;运用免疫荧光法检测各组滑膜组织TRAIL、TNF-α蛋白的表达.结果 TFC可剂量依赖性地降低AA大鼠滑膜细胞的炎性增殖;TRAIL在模型组大鼠滑膜组织中的表达明显低于正常组;TFC各剂量组可上调TRAIL的过低表达,而TNF-α的检测结果与之相反.结论 以TNF-α为参照,TRAIL参与AA大鼠的发病过程,TFC可上调TRAIL蛋白的过低表达,这可能是其治疗AA的机制之一.
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二氟甲基鸟氨酸对2型糖尿病大鼠心肌肥厚 及内质网应激的影响
目的 研究二氟甲基鸟氨酸(difluoromethylornithine,DFMO)对2型糖尿病(T2DM)大鼠心肌肥厚的作用,以及对内质网应激蛋白GRP78和CHOP的影响.方法 采用高糖高脂膳食负荷链脲佐菌素(streptozotocin,STZ)单次腹腔注射,建立T2DM大鼠模型.实验大鼠分为正常对照组、T2DM模型组和DFMO治疗组,上述条件继续饲养12周.检测各组大鼠空腹血糖、心脏参数、心肌纤维化程度;测定MDA含量、SOD和T-AOC活性;检测GRP78和CHOP蛋白表达.结果 DFMO治疗后,降低T2DM大鼠空腹血糖和心脏参数(P<0.05),心肌间质纤维化程度下降(P<0.05),MDA含量降低,SOD和T-AOC活性增加.同时,DFMO治疗可以下调GRP78和CHOP蛋白表达水平(P<0.05).结论 DF-MO抑制T2DM大鼠心肌肥厚,机制与下调GRP78和CHOP蛋白表达,抑制内质网应激有关.
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淫羊藿次苷Ⅱ通过改善内质网应激和caspase-12 信号改善SHR大鼠左心室功能
目的 基于内质网应激与caspase-12信号,探索淫羊藿次苷Ⅱ(icarisideⅡ,ICSⅡ)改善自发性高血压大鼠(spontaneously hypertensive rats,SHRs)左心室功能的机制.方法 30只14周龄♂SHRs分为模型组、ICSⅡ低、中、高剂量(4、8、16 mg·kg-1)组及阳性药氯沙坦(20 mg·kg-1)组(n=6);同时,WKY作为空白对照组(n=6).在第26周给药结束后,麻醉大鼠,用小动物超声检测大鼠左心室功能;RT-PCR检测左心室GRP78 mRNA水平;Western blot检测左心室GRP78、cleaved-caspase-12/9/3蛋白水平.结果 与WKY组相比,SHR组大鼠左心室舒张末期的内径和后壁厚度增加,射血分数和短轴缩短率降低;GRP78 mRNA和蛋白水平上调,cleaved-caspase-12/9/3蛋白水平增加(P<0.05).与SHR组相比,ICSⅡ中、高剂量组及阳性药组左心室舒张末期的内径和后壁厚度降低(P<0.05),射血分数和短轴缩短率增加(P<0.05);GRP78 mRNA和蛋白水平下调,cleaved-caspase-12/9/3蛋白水平降低(P<0.05).结论ICSⅡ可改善SHRs左心室功能,其作用机制可能与改善内质网应激、下调升高的caspase-12信号有关.
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消退素D1抑制NLRP3信号通路对DSS结肠炎小鼠的影响
目的 探讨消退素D1(resolvin D1,RvD1)对实验性结肠炎小鼠肠道炎症的影响及可能机制.方法 将C57BL/6小鼠分为4组,包括正常组、RvD1对照组、葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)模型组、RvD1治疗组.实验结束后,分离小鼠小肠及结肠组织.测量疾病活动指数(DAI),病理学评分(HI),检测髓过氧化物酶(MPO)活性水平,伊文思蓝检测肠黏膜通透性,电镜检测肠上皮细胞连接及细胞因子水平.分析NLRP3炎症小体相关基因表达水平.结果 与正常组小鼠相比,模型组DAI评分、HI评分、MPO活性水平,以及结肠组织匀浆中促炎细胞因子的产生明显增加(P<0.05).RvD1组小鼠上述实验指标明显减低(P<0.05).模型组小鼠结肠组织NLRP3炎症小体表达水平增加(P<0.05);RvD1处理1周,小鼠结肠组织NLRP3通路相关蛋白表达水平降低(P<0.05).结论 RvD1具有改善DSS结肠炎小鼠肠道炎症的作用,其机制可能与抑制NLRP3炎性体信号通路有关.
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三叉神经痛大鼠三叉神经节中BDNF的表达变化
目的 观察脑源性神经生长因子(brain-derived neuro-tropic factor,BDNF)及其高亲和力受体TrkB在三叉神经痛(trigeminal neuralgia,TN)大鼠三叉神经节(trigeminal gangli-on,TG)中的表达变化.方法 TN大鼠模型由眶下神经慢性损伤压迫模型(ION-CCI)制备.♂SD大鼠随机分为假手术组(Sham组)和TN模型组.测定两组大鼠损伤侧机械阈值,应用实时荧光定量PCR、免疫组织化学技术和免疫荧光双标技术,检测损伤侧TG中BDNF及TrkB表达变化,并测定损伤侧TG中前炎症因子TNF-α、IL-1β的变化.结果建模2周后,与假手术组相比,TN组的机械痛阈明显下调,TG中BDNF及TrkB较假手术组明显升高,同时前炎症因子TNF-α、IL-1β水平也明显升高(P<0.05).结论 TN状态下,ION-CCI大鼠TG中BDNF及TrkB表达升高,可能参与TN的发病机制,促进了TN的痛觉传递.
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中药化学成分库中结肠癌BRAFV600E抑制剂的筛选
目的 筛选能抑制BRAFV600E CT26细胞株增殖的中药单体化合物.方法 通过慢病毒载体感染,构建BRAFV600E稳定表达的CT26细胞稳转株.MTT检测细胞增殖,划痕实验检测细胞迁移,蛋白印迹检测MEK/ERK信号通路蛋白表达.Discovery Studio筛选BRAFV600E高亲和中药单体化合物,并用MTT验证化合物抑制细胞增殖效果.结果 与野生型CT26细胞相比,BRAFV600E CT26细胞的增殖和迁移能力明显增强,MEK/ERK通路被进一步激活.芦荟素(aloin)、安格洛苷C(angoroside C)、杯苋甾酮(cyasterone)对BRAFV600E CT26细胞的抑制效果优于野生型CT26细胞(P<0.05),并能明显降低BRAFV600E的蛋白表达.结论 芦荟素、安格洛苷C、杯苋甾酮可能是结肠癌BRAFV600E突变的天然抑制剂.
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菊苣根、茎的乙醇提取物对金黄色葡萄球菌及 粪肠球菌抑菌差异性研究
目的 研究新疆出产的菊苣根、茎95％乙醇提取物对金黄色葡萄球菌和粪肠球菌抑菌效果,为明确菊苣较好的抑菌药效部位提供参考.方法 牛津杯法测定根、茎提取物的抑菌圈直径;倍半稀释法测定根、茎提取物对供试菌的小抑菌浓度(MIC);生长曲线法测定根、茎提取物对供试菌增殖的影响;酶标法测定细菌胞外溶液中碱性磷酸酶(AKP)浓度变化.结果 菊苣根、茎95％乙醇提取物对金黄色葡萄球菌和粪肠球菌均有明显抑制增殖的作用;菊苣根对两种菌小抑菌浓度均为64 g·L-1,菊苣茎对两种菌小抑菌浓度分别为50 g·L-1、64 g·L-1;菊苣茎95％乙醇提取物对金黄色葡萄球菌抑制作用较好,而菊苣根95％乙醇提取物则对粪肠球菌抑制作用更好;菊苣根乙酸乙酯萃取物对上述两种菌的抑菌效果皆优于95％乙醇提取物(P<0.01).结论 菊苣根、茎95％乙醇提取物均可明显抑制两种菌的增殖,且菊苣茎对金黄色葡萄球菌抑制作用更明显,菊苣根对粪肠球菌抑制效果较好;菊苣根佳抑菌药效为乙酸乙酯萃取部分.
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孕期炎症子代大鼠海马和皮层COX-2通路的改变
目的 观察并探讨孕期炎症子代大鼠海马和皮层环氧化酶2(cyclooxygenase 2,COX-2)及下游产物改变的机制.方法 ♀SD大鼠随机分为对照组和脂多糖(lipopolysaccha-ride,LPS)组,LPS组孕鼠在孕期d 11、14、18分别腹腔注射LPS 300μg·kg-1,对照组给予生理盐水.记录子鼠出生后d 3、10、20、30的体质量;d 30采用水迷宫实验、旷场实验和自发活动测试等,检测子鼠神经系统发育情况;采用苏木精-伊红染色,观察脑组织病理学改变;ELISA检测炎性因子的含量;Western blot检测COX-2的蛋白表达.结果 LPS组子鼠的体质量与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05);LPS组子鼠学习和记忆功能明显受损,水平运动和自发活动明显减少(P<0.05),海马和皮层的神经细胞核固缩明显(P<0.05,P<0.01);LPS组子鼠海马和皮层中PGD2、PGE2、PGI2、TNF-α、IL-6和IL-1β 的含量明显升高(P<0.05,P<0.01);LPS组子鼠海马和皮层中COX-2蛋白水平明显升高(P<0.01).结论 COX-2及下游通路改变可能与孕期炎症致子代大鼠脑损伤的机制有关.
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拮抗内源性孤啡肽可通过下调 microRNA-1途径抑制大鼠再灌注性心律失常
目的 研究内源性孤啡肽(N/OFQ)对大鼠再灌注性心律失常(RA)的影响,以及microRNA-1(miR-1)在其中的作用.方法 将SD大鼠随机分为3组,即假手术组(Sham组)、缺血/再灌注组(I/R组)及孤啡肽受体拮抗剂(UFP-101)预处理组(U+I/R组),每组8只.通过结扎左冠状动脉前降支制备大鼠缺血/再灌注模型,记录各组大鼠再灌注期间心律失常的发生情况并对其进行评分;采用qRT-PCR法检测miR-1、GJA1及KCNJ2基因表达水平;采用Western blot法检测Cx43、kir2.1蛋白表达情况.结果 拮抗内源性N/OFQ可明显降低大鼠RA及致心律失常评分(P<0.01).qRT-PCR及Western blot结果提示,与Sham组相比,I/R组miR-1表达增多(P<0.01),而Cx43及其mRNA表达下降(P<0.05),kir2.1表达下降(P<0.01);与I/R组比较,U+I/R组miR-1表达下降(P<0.05),Cx43及kir2.1表达增多(P<0.05).结论 内源性N/OFQ可上调miR-1,使Cx43及kir2.1蛋白表达受到抑制,从而导致缺血/再灌注性心律失常.
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红景天苷对CoCl2诱导PC12细胞低氧损伤的神经保护作用
目的 研究红景天苷对CoCl2诱导PC12细胞低氧损伤的神经保护作用,进一步探讨红景天苷抑制补体成分,以及对神经保护的作用机制.方法 CoCl2诱导PC12细胞低氧损伤模型,经不同浓度红景天苷作用后,利用caspase-3活性检测试剂盒检测caspase-3活性;qPCR检测Egr1、Egr4、C3等mRNA表达;Western blot检测Egr1、Egr4、C3等蛋白表达.PC12细胞低氧损伤后,C3a受体拮抗剂作用并同时给药,检测caspase-3活性、Egr1、Egr4的表达水平;siRNA干扰Egr4表达后,检测caspase-3活性及Bax、Bcl-xl、C3的表达水平.结果 红景天苷能明显降低CoCl2诱导PC12细胞低氧损伤模型的caspase-3活性及Bax、C3的蛋白表达,促进Bcl-xl、Egr1、Egr4的蛋白表达;C3a受体拮抗剂作用后,能够抑制caspase-3活性及Egr1、Egr4的表达;siRNA干扰Egr4表达后,能逆转caspase-3活性及Bax、Bcl-xl的表达水平,但对C3作用不明显.结论 红景天苷对CoCl2诱导PC12细胞低氧损伤模型具有神经保护作用,与红景天苷抑制补体成分C3,促进Egr4的表达水平,进而抑制细胞凋亡有关.
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VGX-1027抑制PM2.5介导的小鼠肺部炎症和气道高反应
目的 探讨VGX-1027能否抑制PM2.5介导的小鼠肺部炎症和气道高反应.方法 将成年健康C57BL/6小鼠随机分为对照组、VGX-1027(50 mg·kg-1)+PBS组、PM2.5组、VGX-1027(12.5 mg·kg-1)+PM2.5组、VGX-1027(25 mg·kg-1)+PM2.5组和VGX-1027(50 mg·kg-1)+PM2.5组.小鼠在鼻腔滴入PBS或PM2.5混悬液(7.8 mg·kg-1)前1 h,腹腔注射PBS或相应剂量的VGX-1027,每天1次,连续2 d.24 h后,测定小鼠气道高反应,支气管肺泡灌洗液(BALF)细胞计数,HE染色评估肺部炎症积分,ELISA检测BALF炎性因子水平,Western blot测定肺组织NF-κB蛋白的磷酸化水平,以及NLRP3和caspase-1的表达水平.结果 PM2.5鼻腔滴入引起明显的肺部炎症和气道高反应.12.5 mg·kg-1 VGX-1027不能抑制PM2.5介导的气道高反应和肺部炎症浸润;而25、50 mg·kg-1的VGX-1027明显抑制PM2.5介导的气道高反应和肺部炎症浸润,降低BALF中炎症细胞数量和炎性因子的水平;下调NF-κB蛋白的磷酸化水平,以及NL-RP3和caspase-1的表达水平.结论 VGX-1027可抑制PM2.5介导的小鼠肺部炎症和气道高反应.
