老年患者大肠埃希菌菌株亲缘性分析
摘要： 大肠埃希菌已成为医院感染的重要病原菌.尽管国内已有关于大肠埃希菌部分耐药基因的报道,但鲜见菌株亲缘性分析.笔者对20株老年患者大肠埃希菌分离株进行了29种耐药基因(TEM、SHV、CTX-M-1群、CTX-M-2群、CTX-M-9群、OXA-1群、OXA-2群、OXA-10群、PER、GES、VEB/CEF、CARB、DHA、ACT/MIR、LAT/CMY、rmtA、aac(3')-Ⅱ、aac (6")-I b、ant(3")-I、ant(2")-I、catB、cmlA、sull、dfrA1、dfrA12、dfrAl7、int I 1、merA和(npA)与2种毒力基因(CNF-1和CNF-2)检测,并以这31种基因为分子标记,对检测结果作样本聚类分析,讨论菌株亲缘性,现报道如下.
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骨髓检查在艾滋病合并播散性马尔尼菲青霉菌感染早期诊断中的应用
目的 探讨骨髓检查在艾滋病合并播散性马尔尼菲青霉菌感染早期诊断中的价值.方法 对73例临床疑似播散性马尔尼菲青霉菌感染的艾滋病患者进行外周血及骨髓涂片检查,并进行外周血和骨髓真菌双相培养.结果 73例患者中有44例经外周血和骨髓真菌双相培养确诊为马尔尼菲青霉菌感染,其骨髓象的共同特征为:骨髓增生活跃或明显活跃;多数粒细胞有胞浆颗粒增粗、增多及空泡等改变,细胞核左移;组织细胞增多、胞体增大;浆细胞比例增高.其中12例患者在骨髓涂片中发现组织细胞胞质内吞噬成群桑葚样马尔尼菲青霉菌病原体,或单个吞噬,或病原体散在游离于细胞外;个别病例以粒系细胞增生为主,于中性粒细胞及单核细胞内吞噬单个或多个病原体,并在4例患者外周血涂片中发现中性粒细胞及单核细胞内吞噬单个或多个马尔尼菲青霉病原体.结论 骨髓检查在艾滋病合并播散性马尔尼菲青霉菌感染的早期诊断中有重要价值,比常规真菌双相培养法可提早7～10 d确诊,为抗真菌治疗赢得宝贵时机,可有效降低患者的病死率.
关键词： 获得性免疫缺陷综合征 马尔尼菲青霉菌 骨髓检查 真菌培养 -
多重耐药肺炎克雷伯菌支气管肺泡灌洗液分离株耐药元件检测分析
目的 分析1株多重耐药肺炎克雷伯菌耐药基因的存在状况及耐药机制.方法 采用聚合酶链反应(PCR)及序列分析的方法对2012年2月分离白苏州大学附属儿童医院儿科重症监护病房患儿支气管肺泡灌洗液中的1株多重耐药肺炎克雷伯菌进行β-内酰胺酶类、氨基糖苷类、喹诺酮类获得性耐药相关基因、膜孔蛋白基因ompK35、ompK36及PBP2编码基因检测.结果 该株多重耐药肺炎克雷伯菌耐β-内酰胺类药物获得性耐药基因检出 TEM-1和SHV-1;氨基糖苷类药物获得性耐药基因检出 aac(6′)-I b,无16S rRNA甲基化酶基因检出;膜孔蛋白编码基因ompK35和ompK36均呈阴性;碳青霉烯类药物作用靶位PBP2编码基因测序与敏感株相比仅有9个同义突变,但氨基酸序列不变.与敏感株相比,该菌株无氟喹诺酮耐药决定区(QRDR)突变.结论 该株多重耐药肺炎克雷伯菌耐β-内酰胺类、氨基糖苷类及碳青霉烯类药物与细菌产2种β-内酰胺类获得性耐药基因、1种氨基糖苷类获得性耐药基因、膜孔蛋白基因缺陷和PBP2基因同义突变相关.
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侵袭性肺部真菌感染的诊疗情况分析
目的 调查浙江省丽水市中心医院侵袭性肺部真菌感染(IFPI)的诊断与治疗情况.方法 以IFPI诊断和治疗指南为依据,分析79例诊断为IFPI患者的诊疗情况.结果 确诊为IFPI且治疗有效的为6例;临床诊断病例30例,其中21例治疗后症状无明显改善,6例治疗效果明显,3例死亡;拟诊病例35例,25例临床抗真菌治疗无明显疗效,3例疗效显著,7例未进行抗真菌治疗;误诊误治8例.确诊病例病原菌以曲霉和隐球菌感染为主,抗真菌治疗时间为3～6个月.结论 临床IFPI的诊断与治疗尚需进一步规范.
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慢性丙型肝炎患者外周血Toll样受体3和7与Ⅰ型干扰素基因表达的研究
目的 观察慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中Toll样受体3(Toll like receptor 3,TLR3)和7(TLR7),以及Ⅰ型干扰素α(Interferonα,IFN-α)和β(IFN-β) mRNA的表达,探寻CHC治疗的新方法.方法 选择2013年9月至2014年5月武汉大学人民医院收治住院的30例CHC患者,并选择同期体检的健康人群30名作为健康对照组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝功能指标;用实时荧光定量PCR检测TLR3、TLR7、IFN-α和IFN-β mRNA表达,并用2-△△Ct方法计算相对表达量.两样本均数比较采用t检验,TLR mRNA与IFNmRNA表达、肝功能指标及HCV RNA载量之间的相关性采用Pearson相关性分析.结果 健康对照组的基因表达量为1,CHC组TLR3、TLR7、IFN-α和IFN-β mRNA的相对表达量分别为0.086、0.633、0.145和0.423,两组间比较差异均有统计学意义(=4.25,2.39,2.37和2.80,P值均＜0.01).Pearson相关性分析显示,TLR3和TLR7 mRNA表达量与IFN-β mRNA表达量呈正相关性(r=0.381和0.487,P值均＜0.05),但与IFN-α mRNA表达量、HCV RNA载量、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平无相关性(P值均＞0.05).结论 CHC患者TLR3、TLR7mRNA以及IFN-α、IFN-β mRNA表达均降低,且TLR3和TLR7mRNA表达与IFN-β mRNA呈正相关,提示可通过提高TLR受体的表达为CHC的治疗提供新的方法.
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慢性阻塞性肺疾病急性加重期患者下呼吸道感染的革兰阴性菌分布及耐药性分析
目的：探讨慢性阻塞性肺疾病急性加重（ AECOPD ）下呼吸道感染的革兰阴性菌分布及对常用抗菌药物的耐药性。方法连续收集浙江省台州医院2013年1月至2014年12月收治的742例AECOPD 合并下呼吸道感染患者的痰液样本，用Vitek 2 Compact 系统联合纸片扩散法对菌株进行鉴定和药敏试验，用改良Hodge试验和乙二胺四乙酸（ EDTA ）协同试验筛选耐碳青霉烯类药物菌株。采用WHONET5．6和SPSS 20．0软件对相关数据进行统计分析。结果共分离出革兰阴性菌593株，其中非发酵菌367株（367／593，61．89％），肠杆菌科细菌220株（220／593，37．10％），其他革兰阴性菌6株（6／593，1．01％）。非发酵菌中，分离的主要菌株分别为鲍曼不动杆菌（186株）、铜绿假单胞菌（99株）、嗜麦芽窄食单胞菌（33株）和洋葱伯克霍尔德菌（22株），对氨苄西林、氨苄西林／舒巴坦、头孢唑林、头孢曲松、头孢替坦和呋喃妥因耐药率均较高，为67．20％～100．00％。另外，耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌对其他β-内酰胺类、氟喹诺酮类、氨基糖苷类、复方磺胺甲噁唑和米诺环素等抗菌药物的耐药率显著高于非耐碳青霉烯类菌株，差异有统计学意义（ P＜0.05或＜0．01）；嗜麦芽窄食单胞菌和洋葱伯克霍尔德菌仅对左氧氟沙星、复方磺胺甲噁唑和米诺环素等少数抗菌药物敏感。肠杆菌科细菌中，分离的主要菌株分别是肺炎克雷伯菌（89株）、大肠埃希菌（80株）和阴沟肠杆菌（25株），三种肠杆菌科细菌对氨苄西林几乎完全耐药，对哌拉西林／他唑巴坦、头孢哌酮／舒巴坦、阿米卡星和碳青霉烯类药物耐药率低，均＜15％，且产超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌对氨苄西林／舒巴坦、大部分头孢类药物（除头孢替坦和头孢哌酮／舒巴坦）、庆大霉素、妥布霉素、氟喹诺酮类、氨曲南、复方磺胺甲噁唑和米诺环素呈中、高度耐药，耐药率均≥50％，其耐药率均高于非产ESBLs 菌株，差异有统计学意义（P＜0．05或＜0．01）。结论 AECOPD下呼吸道革兰阴性菌感染以非发酵菌和肠杆菌科细菌为主，其中耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌和铜绿假单胞菌、产ESBLs肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌感染耐药现象尤为严重。
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《中华临床感染病杂志》2015年（第8卷）征订启事
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IFNL3/IFNL4多态性与HIV-1患者应用高效抗逆转录病毒治疗的相关性研究
目的 分析干扰素λ3基因(IFNL3)/干扰素λ4基因(IFNL4)单核苷酸多态性(SNPs)对HIV-1感染患者应用高效抗逆转录病毒治疗(HAART)的影响.方法 收集2015年6月至12月浙江大学医学院附属第一医院应用HAART≥1年的63例HIV-1成年患者.采用定量聚合酶链反应(qPCR)定量检测患者血浆HIV-1 RNA、外周血单个核细胞(PBMC)的HIV-1 DNA水平和外周血SNPs.应用磁珠法检测血浆炎性细胞因子水平,并采用流式细胞仪检测外周血CD4 +T和CD8 +T淋巴细胞计数.根据抗病毒治疗应答情况将患者分为HIV-1 RNA低表达组(<100拷贝/mL)和高表达组(≥100拷贝/mL);根据淋巴细胞计数将患者分为CD4 +T淋巴细胞低表达组(<250个/μL)和高表达组(≥250个/μL);根据外周血HIV-1 DNA水平将患者分为HIV-1 DNA低表达组(<100拷贝/106个细胞)和高表达组(≥100个拷贝/106个细胞).分析IFNL3/IFNL4的SNPs、炎性细胞因子在HIV-1 RNA、HIV-1 DNA和CD4 +T淋巴细胞各亚组的分布和水平,以及SNPs与炎性细胞因子的关系.采用SPSS 18.0软件对数据进行分析.结果 rs368234815、rs8099917和 rs4803223在HIV-1 RNA低表达组和高表达组的分布差异具有统计学意义(χ2=0.043、0.047和0.032,P值均<0.05).IL-10在HIV-1 RNA低表达组较高表达组下降(U=4.00,P<0.05);IL-13水平在HIV-1 RNA高表达组和HIV-1 DNA高表达组较相对应组下降(U=0.00和2.00,P<0.05);IL-21水平在HIV-1 RNA高表达组及CD4 +T淋巴细胞低表达组较相对应组下降(U=3.00和2.00,P<0.05); IL-28A水平则在HIV-1 RNA高表达组、HIV-1 DNA高表达组和CD4 +T淋巴细胞低表达组均下降(U=3.00、0.50和3.00,P<0.05或 <0.01).此外,rs368234815与 IL-21相关(H =6.690,P <0.05),IL-21在rs368234815ΔG/ΔG[131.88(2.66,174.00)]亚型的表达高于 TT/TT[6.79(2.81, 26.48)](P <0.05);rs4803223与IFN-γ相关(H=6.690,P<0.05),IFN-γ在GG亚型[62.26(19.45,96.49)]中的表达要高于GA亚型[6.98(2.19, 99.14)](P<0.05).结论 IFNL3/IFNL4的rs368234815, rs8099917和rs4803223可能与HIV-1患者应用HAART治疗效果、炎性因子表达相关,并可能影响HAART疗效.
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不同人乳头状瘤病毒检测方法对宫颈高度病变的诊断价值
目的 评价杂交捕获Ⅱ代(HC-Ⅱ)与聚合酶链反应(PCR)技术对人乳头状瘤病毒(human papillomavirus,HPV)DNA检测及宫颈高度病变的诊断价值.方法 选取宫颈薄层液基细胞学检查(TCT)异常的200例妇女为研究对象,同时用HC-Ⅱ、导流杂交基因芯片技术(HybriMax)、实时荧光定量PCR法(FQ-PCR)和流式荧光杂交法检测宫颈细胞HPV DNA.以病理组织学检测结果为金标准,比较4种检测方法对宫颈上皮内瘤变(CIN)≥Ⅱ的诊断效果.采用SPSS 13.0软件进行统计学处理.结果 HybriMax、FQ-PCR、流式荧光法和HC-Ⅱ对200例HPV DNA阳性检出率分别为72.5%(145/200)、71.5%(143/200)、70.0%(140/200)和69.0%(138/200).4种HPV DNA检测方法对不同程度宫颈病变的HPV检测阳性率差异无统计学意义(x2=0.252、0134、0.012和0.027,P值均＞0.05),但在诊断CINⅡ及以上病变的敏感度、约登指数和阴性预测值等方面比较差异有统计学意义(x2=7.923、7.819和8.108,P＜0.05).结论 对组织病理学诊断结果为CINⅡ及以上的宫颈病变,HC-Ⅱ的诊断价值优于PCR方法.
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肿瘤坏死因子α-308基因多态性与中心静脉导管相关脓毒症易感性与感染程度的关系
目的 探讨肿瘤坏死因子α基因启动子308位点(TNF-α-308)多态性与中心静脉导管相关脓毒症(CRS)的易感性和严重程度的关系.方法 选取自2015年1月至2017年5月开化县人民医院收治的105例CRS患者(CRS组),根据是否并发多器官功能障碍综合征(MODS)分为CRS并发MODS组(34例)和CRS非MODS组(71例).同时选取同期210例导管无相关感染患者(病例对照组)和105例健康体检者(健康对照组)为研究对象,应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)对TNF-α-308进行基因分型,分析TNF-α-308基因多态性与CRS易感性和严重程度的关系.采用SPSS 16.0软件对数据进行分析.结果 CRS组、病例对照组和健康对照组三组间的TNF-α-308位点GG、GA、AA基因型频率和G、A等位基因频率比较,差异均无统计学意义(χ2=2.262和0.907,P值均>0.05).CRS并发MODS组TNF-α-308位点基因型频率与CRS非MODS组、病例对照组、健康对照组相比,GG基因型频率明显降低,GA、AA基因型频率明显升高(χ2=8.809、7.700和9.220,P值均<0.05).CRS并发MODS组TNF-α-308位点等位基因频率与CRS非MODS组、病例对照组、健康对照组相比,G等位基因频率明显降低,A等位基因频率明显升高(χ2=9.823、8.624和7.654,P值均<0.05).CRS非MODS组的TNF-α-308位点基因型频率(χ2=0.852和0.975,P值均>0.05)和等位基因频率(χ2=1.022和0.535,P值均>0.05)与病例对照组、健康对照组相比,差异均无统计学意义.CRS 并发 MODS 组 TNF-α-308的 GA +AA 基因型比值比为2.664(95%CI 1.259~5.639);A等位基因比值比为2.440(95%CI 1.326~4.490).结论 TNF-α-308位点基因多态性不是CRS的易感因素,但与CRS并发MODS相关.
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慢性乙型肝炎病毒感染合并肺结核患者抗结核治疗中肝损伤的防治研究
目的 评估恩替卡韦对慢性HBV感染合并肺结核患者抗结核治疗中肝损伤的防治效果.方法 连续收集2011年1月至2012年5月广州市第八人民医院及广州市胸科医院慢性HBV感染合并初治肺结核患者102例.所有病例分为3组:A组33例,采用恩替卡韦联合抗结核治疗；B组29例,采用拉米夫定联合抗结核治疗；C组40例,为单纯抗结核治疗组.观察3组患者肝损伤、中止治疗发生率以及治疗前后肝功能和HBV DNA的变化情况.采用SPSS 13.0软件进行统计学分析.结果 A组2例(6.1％),B组6例(20.6％),C组22例(55.0％)出现肝损伤,3组间肝损伤发生率比较差异有统计学意义(x2=22.126,P＜0.01),但A组与B组的肝损伤发生率比较差异无统计学意义(x2=3.024,P＞0.05).A组1例(3.0％),B组3例(10.3％),C组15例(37.5％)在观察期间中止抗结核治疗,3组中止治疗发生率差异有统计学意义(x2=16.008,P＜0.01),但A组与B组之间的差异无统计学意义(x2=1.410,P＞0.05).A组和B组患者接受抗结核治疗前后肝功能均无明显变化,C组接受抗结核治疗后ALT、AST水平均较A组和B组明显升高(Z=18.306,16.821,P＜0.01).治疗前3组间HBV DNA水平差异无统计学意义(Z=0.460,P＞0.05),治疗后A组与B组的HBV DNA水平明显下降,3组间比较差异有统计学意义(Z =23.213,P＜0.01).其中,治疗1个月后,A组病毒载量较B组下降明显(Z =8.109,P＜0.01).结论 早期使用恩替卡韦抗病毒治疗可明显减少慢性HBV感染合并肺结核患者抗结核治疗过程中肝损伤的发生,确保抗结核治疗与抗HBV治疗顺利进行.
