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TLR7基因多态性与尖锐湿疣易感性及复发的相关性研究
目的 探讨TLR7基因多态性与尖锐湿疣易感性及复发的相关性.方法 采用Snapshot方法对140例尖锐湿疣患者及105例对照组外周静脉血中TLR7 rs179008、rs2302267和rs864058基因多态性进行了检测,并对尖锐湿疣组及对照组间上述基因位点的基因频率差异进行x2检验,同时对治疗后6个月复发及无复发的尖锐湿疣患者间进行了基因频率差异的x2检验,P＜0.05为差异有统计学意义.结果 TLR7rsl79008和rs864058仅在复发的尖锐湿疣组患者中各检测出1例杂合突变.尖锐湿疣组TLR7 rs2302267基因中TT,TG和GG分别为109、22和9例,对照组分别为98、5和2例,尖锐湿疣组突变基因G频率显著高于对照组,差异有统计学意义(x2=13.33,P＜0.01),而且复发尖锐湿疣组突变基因G频率显著高于无复发尖锐湿疣组,差异有统计学意义(x2=5.83,P＜0.05).结论 TLR7 rs2302267基因多态性不仅与尖锐湿疣易感性相关,而且与尖锐湿疣治疗后的复发相关.
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桑菊饮含药血清对小鼠巨噬细胞Toll样受体表达的影响
目的:研究桑菊饮对小鼠肺巨噬细胞株RAW264.7表达Toll样受体(TLR)的影响.方法:用桑菊饮含药血清作用于正常RAW264.7细胞,24 h后以荧光定量PCR方法测定TLR-1～TLR-9 mRNA的表达,探讨桑菊饮对Toll样受体表达的影响.结果:桑菊饮含药血清在一定剂量(7.7 g·kg-1·U-1)时,可以促进TLR-4和TLR-7的表达,而对TLR-1,TLR-2,TLR-3,TLR-5,TLR-6,TLR-8和TLR-9的表达没有明显影响.结论:桑菊饮的药效学作用可能与促进Toll样受体某些亚型表达有关.
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TOLL样受体7基因rs2897827多态性影响汉族女性中风风痰瘀阻证的发生风险
目的:研究TLR7基因rs2897827多态性与中风风痰瘀阻证、气虚血瘀证的易感性的关联.方法:纳入595例中风患者(风痰瘀阻证311例、气虚血瘀证284例)、605例对照者,采用实时荧光定量PCR技术检测TLR7基因表达水平,以此分析中风中医证型与TLR7基因表达水平的关系.采用Sequenom MassARRAY中通量分型方法进行基因分型.结果:①中风风痰瘀阻证和气虚血瘀证的TLR7 mRNA显著高于对照组(P＜0.05,P＜0.01).②TLR7基因rs2897827多态性与女性中风风痰瘀阻证的发生风险显著关联(加性模型:OR=2.08,95％CI[1.12,3.89],P=0.021;等位模型:OR=1.98,95％CI[1.09,3.62],P=0.023).结论:TLR7基因rs2897827多态性可能影响汉族女性中风风痰瘀阻证的发生.
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疏风宣肺方、解表清里方药对流感病毒小鼠TLR7、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达的影响
目的 观察疏风宣肺和解表清里方药对流感病毒亚甲型肺适应株(FM1)感染小鼠肺组织细胞Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7)、髓样分化因子88(myeloid differentiation factor 88,MyD88)、激活核因子Kappa B(nuclear factor-kappaB,NF-κB) mRNA及蛋白表达的影响.方法 选择108只小鼠,随机分为9组:正常组,模型组,磷酸奥司他韦胶囊组[西药组,2.5 g/(mL·d)],疏风宣肺方(中药1)高、中、低剂量组[3.762、1.881、0.941 g/(kg·d)],解表清里方(中药2)高、中、低剂量组[4.368、2.184、1.092 g/(kg·d)],每组12只.将各组小鼠用乙醚轻度麻醉,正常组以0.05 mL生理盐水滴鼻,其余各组以0.05 mL 4LD50流感病毒FM1稀释液滴鼻感染小鼠.造模成功率100%.感染后2 h灌胃给药.正常组、模型组灌胃蒸馏水,0.2 mL/次,1次/d,连续干预4天.采用RT-PCR反应测定肺组织TLR7、MyD88、NF-κB mRNA表达,采用Western blot法测定肺组织TLR7、MyD88、NF-κB蛋白表达水平.结果 与正常组比较,模型组TLR7、MyD88、NF-κB mRNA表达升高(P <0.01);与模型组比较,西药组,中药1高、中、低剂量组TLR7、MyD88、NF-κB mRNA及蛋白表达降低(P <0.05,P <0.01),中药2高、中剂量组TLR7、NF-κB mRNA及蛋白表达降低(P <0.05,P <0.01),中药2高、中剂量组MyD88 mRNA表达降低(P <0.05),中药2中剂量组MyD88蛋白表达降低(P <0.05),中药2低剂量组TLR7、NF-κB蛋白表达降低(P <0.05).与西药组比较,中药1低剂量组MyD88蛋白表达降低(P <0.05),中药1中、低剂量组NF-κB蛋白表达降低(P <0.01);中药2高、中、低剂量组TLR7 mRNA及蛋白表达降低(P <0.05,P <0.01),MyD88蛋白表达降低(P <0.01),中药2低剂量组NF-κB mRNA及蛋白表达降低(P <0.05,P <0.01).结论 疏风宣肺方各剂量和解表清里中剂量能通过调节MyD88依赖的TLR信号传导通路下调NF-κB活性,发挥抗流感病毒的作用.疏风宣肺方效果优于解表清里方.
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TLR7在结核分枝杆菌感染中的作用研究进展
结核病是由结核分枝杆菌(Mycobacterium tuberculosis,MTB)引起的威胁人类健康的全球致死性疾病之一.Toll样受体7(Toll like receptors 7,TLR7)是一种模式识别受体,主要识别单链RNA,参与胞内感染,同时也参与胞内病原体MTB所介导的免疫.以下就TLR7在MTB感染中介导的信号通路、作用机制及用于治疗的潜在价值作一综述.
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慢性丙型肝炎患者外周血Toll样受体3和7与Ⅰ型干扰素基因表达的研究
目的 观察慢性丙型肝炎(CHC)患者外周血单个核细胞(Peripheral blood mononuclear cells,PBMC)中Toll样受体3(Toll like receptor 3,TLR3)和7(TLR7),以及Ⅰ型干扰素α(Interferonα,IFN-α)和β(IFN-β) mRNA的表达,探寻CHC治疗的新方法.方法 选择2013年9月至2014年5月武汉大学人民医院收治住院的30例CHC患者,并选择同期体检的健康人群30名作为健康对照组.采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测肝功能指标;用实时荧光定量PCR检测TLR3、TLR7、IFN-α和IFN-β mRNA表达,并用2-△△Ct方法计算相对表达量.两样本均数比较采用t检验,TLR mRNA与IFNmRNA表达、肝功能指标及HCV RNA载量之间的相关性采用Pearson相关性分析.结果 健康对照组的基因表达量为1,CHC组TLR3、TLR7、IFN-α和IFN-β mRNA的相对表达量分别为0.086、0.633、0.145和0.423,两组间比较差异均有统计学意义(=4.25,2.39,2.37和2.80,P值均＜0.01).Pearson相关性分析显示,TLR3和TLR7 mRNA表达量与IFN-β mRNA表达量呈正相关性(r=0.381和0.487,P值均＜0.05),但与IFN-α mRNA表达量、HCV RNA载量、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平无相关性(P值均＞0.05).结论 CHC患者TLR3、TLR7mRNA以及IFN-α、IFN-β mRNA表达均降低,且TLR3和TLR7mRNA表达与IFN-β mRNA呈正相关,提示可通过提高TLR受体的表达为CHC的治疗提供新的方法.
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HCV感染小鼠小胶质细胞后TLR7mRNA和IL-6表达
目的 通过观察丙型肝炎病毒(HCV)感染小鼠小胶质细胞BV2后Toll样受体(TLR)7 mRNA及白细胞介素(IL)-6水平的动态变化,探讨HCV对中枢神经系统(CNS)的免疫发病机制.方法 用20%(体积分数)的HCV阳性血清感染BV2细胞,在感染后6、12、24、48 h收集细胞,应用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和ELISA法检测TLR7 mRNA和IL-6表达,同时设空白对照组和正常血清组.结果 3组BV2细胞中均有TLR7 mRNA表达;HCV阳性血清感染BV2细胞后TLR7 mRNA表达随时间延长而逐渐增高,其中在12、24、48 h时表达水平均较其他两组增高(P<0.05).IL-6表达在HCV阳性血清组也逐渐增高,48 h时与空白对照组、正常血清组48 h时比较差异有统计学意义(P<0.05).结论 BV2细胞可以表达TLR7 mRNA,HCV感染能上调BV2细胞TLR7 mRNA和IL-6表达.TLR7可能参与了HCV对CNS的病理生理过程.
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TLR7激动剂的三维药效团模型研究
本研究选择了5个TLR7激动剂作为训练集,使用Discovery Studio软件包构建了TLR7激动剂的药效团模型.终获得的优药效团模型Hypo2由一个氢键受体、一个氢键给体和两个疏水中心组成,对训练集和测试集具有较好的预测能力.此外,将Hypo2作为提问结构搜索由79个不同活性的TLR7激动剂(0.2-5000 nM)组成的化合物库,该模型能有效将数据库中高活性的TLR7激动剂识别为目标化合物.分子对接研究进一步验证了该药效团模型的合理性.本研究获得的TLR7激动剂药效团模型有助于发现新型TLR7激动剂.
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Toll样受体7激动剂对脓毒症小鼠肝损伤时JNK信号通路的影响
目的 评价Toll样受体7(TLR7)激动剂对脓毒症小鼠肝损伤时c-jun氨基末端激酶(JNK)信号通路的影响.方法 清洁级健康雄性成年C57BL/6小鼠180只,10～14周龄,体重20～26g.采用随机数字表法分为3组(n=60):假手术组(S组)、脓毒症组(Sep组)和TLR7激动剂组(GDQ组).采用盲肠结扎穿孔法制备小鼠脓毒症模型,GDQ组制备模型前24 h时腹腔注射TLR7激动剂1.5 g/kg.分别于术后6、12和24 h时每组取10只处死取肝,采用Western blot法检测IL-6和IL-10的表达,术后24 h时采用免疫组化法检测JNK的表达,光镜下观察肝组织病理学结果.余小鼠术后14 d时观察存活情况,计算14d生存率.结果 与S组比较,Sep组和GDQ组小鼠14 d生存率降低,术后6、12和24 h时肝IL-6、IL-10和JNK表达上调(P＜0.05);与Sep组比较,GDQ组小鼠14 d生存率升高,术后6、12和24 h时肝IL-6、IL-10和JNK表达下调(P＜0.05).GDQ组肝病理学损伤较Sep组减轻.结论 TLR7激动剂可通过阻断JNK信号通路减轻脓毒症小鼠的肝损伤.
关键词： Toll样受体7 脓毒症 原癌基因蛋白质c-jun 肝脏 -
Toll样受体7及9在系统性红斑狼疮患者外周血B淋巴细胞内的表达及意义
目的 了解Toll样受体(TLR)7及9在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血B淋巴细胞内的表达情况及其意义.方法 流式细胞术检测50例SLE患者及30名健康人外周血B淋巴细胞内TLR7及9的表达水平.并将其与有关临床及实验窜指标进行相关性分析.结果 SLE患者B淋巴细胞内TLR7+及9+细胞所占比例均高于对照组.TLR7与患者红细胞沉降率(ESR)、SLE疾病活动指数(SLEDAI)呈正相关,与C3呈负相关.TLR9与患者尿蛋白、SLEDAI呈正相关.结论 TLR7及9在SLE患者B淋巴细胞内表达上调,且与病情有一定的相关性.
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干燥综合征患者外周血TLR7表达的临床意义
目的 探讨Toll样受体7(TLR7)在干燥综合征(SS)患者外周血单个核细胞(PBMC)中的表达意义.方法 收集35例SS患者和35例健康体检者全血,采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)检测TLR7的mRNA的相对表达量.酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血浆中TNF-α、IL-10的表达.结果 SS患者TLR7mRNA的表达量[(2.28±0.54)2-(△△ct)]显著高于对照组.而血浆中的TNF-α含量(中位数为5.6 ng/L)显著升高(P＜0.05),IL-10(中位数为0.5 ng/L)的变化不显著(P＞0.05).结论 SS患者TLR7 mRNA表达显著升高,可能在其发病过程中起一定的作用.
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JMJD3参与IFN-α和TLR7诱导的B细胞活化及凋亡
目的：探索组蛋白去甲基化酶JMJD3对B细胞活化和凋亡的影响。方法：磁珠分选纯化正常人及 SLE 患者外周血B细胞，用IFN-α、R848或IFN-α+R848处理纯化的B细胞，流式细胞仪检测CD86+或CD69+的细胞百分率以及CD86+Annexin V+或CD69+Annexin V+的细胞百分率；实时定量PCR和Western blot方法检测JMJD3的表达。结果：获得的B细胞纯度高达95％；IFN-α能够增强TLR7对B细胞的活化和凋亡；IFN-α也增加TLR7信号诱导的B细胞表达JMJD3，且JMJD3高表达依赖于MAPK通路，而不是NF-κB信号通路；SLE患者外周血B细胞高表达JMJD3，且JMJD3抑制剂能够抑制IFN-α+R848诱导的CD19+B细胞活化及凋亡。结论：JMJD3参与IFN-α和TLR7诱导的B细胞活化及凋亡，提示 JMJD3抑制剂可能具有缓解SLE症状的作用。
关键词： B细胞 干扰素-α Toll样受体7 组蛋白去甲基化酶JMJD3 -
重组Toll样受体7真核表达质粒的构建及其对髓样树突状细胞免疫功能的影响
目的 构建重组Toll样受体7(Toll-ike receptor 7,TLR7)真核表达质粒,并分析其对髓样树突状细胞(dendriticcell,DC)免疫功能的影响.方法 用C57BL/6小鼠脾细胞制备原代DC,提取DC总RNA,以其逆转录合成的cDNA为模板扩增TLR7基因,克隆至载体pcDNA3.1(+)中,构建真核表达质粒pcDNA3.1-TLR7.经脂质体Lipofeetamine2000将真核表达质粒转染至小鼠DC,经G418筛选阳性克隆.分别采用Real-time PCR及Western blot法检测转染细胞中TLR7基因mRNA转录及蛋白的表达水平;同时采用流式细胞术及细胞因子试剂盒检测转染细胞表面共刺激分子CD80、CD86和MHCⅡ的表达及分泌白细胞介素-6(interleukins-6,IL-6)、肿瘤坏死因子-α(tumor necrosisfactor-α,TNF-α)的水平.结果 经PCR及双酶切鉴定证明重组真核表达质粒pcDNA3.1-TLR7构建正确.转染12、24、48及72 h的DC中均可见TLR7基因的转录及蛋白的表达,且48 h时的转录及表达水平高.转染48 h后,DC表面共刺激因子CD80、CD86和MHCⅡ的表达水平及其分泌IL-6和TNF-α的水平均显著提高(P＜0.05).结论 成功建立了重组TLR7真核表达质粒,且其可明显提高DC的免疫功能.
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Toll样受体7作为新靶点在过敏性及自身免疫性疾病中的研究进展
Toll样受体(Toll-like receptors,TLRs)属于模式识别受体(pattern recognition receptors,PRRs)家族,通过迅速识别入侵微生物病原相关分子模式(pathogen-associated molecular patterns,PAMP)激活下游信号传导途径,引发机体的免疫反应,是连接固有免疫与适应性免疫的桥梁.目前在人类发现10种不同TLRs,分别命名为TLR1 ～TLR10.近年的研究显示,TLR7与过敏性疾病、自身免疫性疾病—过敏性哮喘、系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)等有密切的联系.TLR7的激活状态影响上述疾病的发生、发展和预后.这些证据预示TLR7可能作为潜在靶点为哮喘和SLE的治疗提供新的方向.
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Toll 样受体7及Ⅰ型干扰素通路在系统性红斑狼疮中的作用研究
探讨Toll样受体7(TLR7)及Ⅰ型干扰素(IFN-α)通路在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用.采用实时荧光定量PCR方法检测42例SLE患者和34例正常人外周血TLR7mRNA以及4个干扰素调节基因mRNA的表达水平,同时观察TLR7mRNA的表达量与SLE疾病活动相关指标和干扰素积分(IFN score)的关系.结果,SLE患者外周血TLR7mRNA的表达水平显著增高;TLR7mRNA的表达水平与SLEDAI积分,肾脏损伤指数、抗双链DNA(dsDNA)抗体、抗RNA相关抗体水平及干扰素积分呈正相关;与补体C3、C4、白细胞数呈负相关.TLR7-IFN-α通路可能参与了SLE的病理过程.
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Toll样受体7激动剂在肝脏疾病中的研究
Toll样受体7(TLR7)是参与固有免疫的一类重要蛋白分子,也是连接固有免疫与适应性免疫的桥梁.TLR7被激活后可通过不同信号通路对肝脏疾病产生作用.近年TLR7激动剂在肝脏疾病中的研究和应用不断增多.本文就TLR7激动剂在不同肝脏疾病中的研究进展作一综述.
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Toll样受体7基因多态性与肠道病毒71型感染引起的手足口病的相关性
目的 探讨TLR7基因单核苷酸多态性(SNP)与肠道病毒71(EV71)型感染的相关性及其产生的机制.方法 应用TaqMan探针基因分型技术,对775例EV71感染者(轻症439例,重症336例)和748名健康对照SNP位点rs179019和rs3853839进行基因分型,比较其等位基因频率的差异;检测相关SNP位点不同基因型携带者PBMC中TLR7 mRNA、α干扰素和IL-6表达水平.基因频率采用Logistic回归分析.结果 重症组女性rs3853839基因型GC和CC的频率明显高于轻症组(rs3853839 GC:OR=0.36,95%CI为0.14~0.82, P=0.01;rs3853839 CC:OR=0.19,95%CI为0.11~0.69,P=0.01).重症组男性rs3853839基因型C的频率也明显高于轻症组(OR=0.35,95%CI为0.19~0.63, P=0.01).rs3853839基因型CC女性携带者TLR7 mRNA水平明显低于基因型GC和GG(CC比GG:P=0.005;CC 比GC:P=0.016),rs3853839基因型C男性携带者也低于其基因型G(C比G:P=0.004);TLR7激动剂的刺激下,rs3853839基因型CC的女性携带者PBMC中α干扰素表达水平明显低于基因型GG和GC(CC比GG:P=0.001;CC比GC:P=0.011),而其IL-6表达水平也明显低于基因型GG和GC(CC比GG:P=0.001;CC比GC:P=0.026);男性rs3853839的基因型C携带者α干扰素和IL-6表达水平均明显低于基因型G携带者(α干扰素:P=0.003;IL-6:P=0.018).结论 TLR7基因rs3853839等位基因C是儿童EV71重度感染的危险因素,可能与其特异的细胞因子表达水平有关.
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Toll样受体4和Toll样受体7在儿童原发性肾病综合征患儿肾组织中的表达及意义
目的：探讨Toll样受体（TLR）4、TLR7在儿童原发性肾病综合征（PNS）不同肾脏病理类型中的表达及临床意义。方法纳入110例确诊且经肾活检的PNS患儿，采用免疫组化方法检测肾组织中的TLR4、TLR7，以21例肾母细胞瘤患儿的正常肾组织为对照，分析比较PNS患儿与对照儿童间以及不同病理分型PNS患儿间，肾组织TLR4、TLR7表达的差异。结果不同病理类型PNS患儿和对照组之间肾小管中TLR4、TLR7表达的差异均有统计学意义（P<0.01），其中肾小管TLR4表达水平以MCD型高，其次MN型、MsPGN型、FSGS型，两两比较差异均有统计学意义（P<0.05）；而肾小管TLR7表达水平以MsPGN型高，其次为MN型、MCD型、FSGS型，两两比较差异也均有统计学意义（P<0.05）。结论 TLR4、TLR7在PNS患儿肾组织中表达增高，且其表达水平可能与病理类型相关。
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Toll样受体7及9在慢性粒细胞白血病患者浆细胞样树突状细胞内的表达
目的:研究Toll样受体7(Toll-like receptor 7,TLR7) mRNA及TLR9 mRNA在慢性粒细胞白血病(chronic myeloidleukemia,CML)患者外周血浆细胞样树突状细胞(plasmacytoid dendritic cell,pDC)内的表达及pDC分泌干扰素-α(interferon-α,IFN-α)的能力.方法:收集兰州大学第二医院血液科2010年11月至2011年7月间收治的30例CML患者(初诊未治组15例,缓解组15例)和体检中心的15例健康对照者,运用免疫磁珠法分选外周血pDC,利用real time-PCR检测pDC内TLR7及TLR9 mRNA表达水平.CpG ODN 2216刺激pDC24 h后,ELISA检测上清液中IFN-α水平.结果:初诊组CML患者外周血pDC内TLR7 mRNA表达水平显著低于缓解组[(0.34±0.11)vs(0.93±0.21),P＜0.05],初诊CML患者TLR9 mRNA表达水平显著低于缓解组[(0.44±0.15)vs (0.94±0.18),P＜0.05].CpG ODN 2216刺激后,初诊组pDC产生的IFN-α明显低于缓解组及健康对照组[(408.61 ±77.11)vs(611.39±84.86)、(651.67±93.39) ng/L,P＜0.05].结论:CML患者pDC内TLR7和TLR9 mRNA明显降低可能是pDC功能缺陷的主要原因,提示TLR7和TLR9可能参与CML的发病.
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1,25-二羟维生素D3对其诱导的树突状细胞上Toll样受体7表达的抑制作用
目的 探讨Toll样受体7(TLR7)在1,25-二羟维生素D3(1,25-(OH)2D3)抑制树突状细胞(DC)成熟中可能的机制.方法 体外扩增小鼠骨髓来源的DC,采用流式细胞术和混合淋巴细胞反应检测1,25-(OH)2D3对DC表型和功能的影响;利用RT-PCR半定量方法测定1,25-(OH)2D3对DC的TLR7表达的影响.结果 1,25-(OH)2D3处理后,DC表达CD86和MHCⅡ的荧光强度均明显降低;对T细胞的刺激能力较对照组明显减弱,差异有统计学意义(P＜0.05);与对照组比较,1,25-(OH)2D3可以明显下调TLR7的表达(P＜0.05).结论 1,25-(OH)2D3可能通过影响TLR7的表达来抑制DC细胞的成熟,从而使DC具有耐受性特征.
关键词： 树突状细胞 1 25-二羟维生素D3 Toll样受体7
