通络益肾方对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞MMP-9/TIMP-1和TGF-β1表达的影响
摘要： 目的 观察通络益肾方对高糖培养下大鼠肾小球系膜细胞增殖、细胞外基质调控系统MMP-9/TIMP-1、TGF-β1表达的影响,探讨其防治糖尿病肾病的可能机制.方法 以体外培养的大鼠肾小球系膜细胞为研究对象.将培养的肾小球系膜细胞分为空白对照组、高糖培养组(高糖组)、通络益肾方高、中、低剂量组及西药对照组,用大鼠含药血清给药,分别给予相应处理48 h后,采用四甲偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖,ELISA法检测细胞培养上清液TGF-β1、MMP-9和TIMP-1的水平.结果 与空白对照组比较,高糖组肾小球系膜细胞增殖明显(P＜0.01),上清液中TGF-β1和TIMP-1水平显著增加,MMP-9水平减少(均P＜0.01)；通络益肾方高、中、低剂量均能明显抑制肾小球系膜细胞增殖(P＜0.01或P＜0.05),下调TGF-β1和TIMP-1表达,上调MMP-9表达(P＜0.05或P＜0.01),尤以高剂量组效果佳,呈剂量依赖性；西药对照组上述指标表达水平和中药中剂量组相当(P＞0.05).结论 通络益肾方可能通过抑制肾小球系膜细胞增殖和下调TGF-β1、促进细胞外基质的降解而拮抗糖尿病肾病肾小球硬化,发挥其肾保护作用.
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肉苁蓉微型饮片切制工艺优化
目的 优化肉苁蓉饮片的切制工艺.方法 采用正交试验的方法,以饮片截面直径、厚度、软化时间、干燥温度为影响因素,休止角、浸出物、毛蕊花糖苷、松果菊苷、异类叶升麻苷、含有量为评价指标,优化饮片切制工艺.结果 佳切制工艺为饮片截面直径3～4 mm,厚度1～2 mm,软化时间2h,干燥温度70℃.结论 该方法合理可行,适用于肉苁蓉饮片的切制及应用.
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肾衰康灌肠液含药血清对HK-2细胞缺氧/复氧损伤的预防作用
目的 考察肾衰康灌肠液含药血清对人肾小管上皮细胞(HK-2)缺氧/复氧损伤的预防作用.方法 家兔灌肠给药后采血,离心取血清,分为空白组、PBS组及含药血清高、中、低剂量组.各组血清预培养HK-2细胞24h后,将细胞随机分为对照组、PBS组及含药血清高、中、低剂量组,二氯化钴(CoCl2)进行缺氧/复氧造模,CFSE/PI染色、Annexin V-FITC/PI双染色、流式细胞分析检测造模后细胞凋亡/死亡率,ROS荧光探针检测观察含药血清对空白组、模型组、预防组细胞ROS水平的影响,PCR技术测定PBS组、含药血清组细胞AKT、NF-κB、MAPK mRNA表达.结果 与对照组、PBS组比较,含药血清组细胞死亡率明显降低,以高剂量组显著,并表现出明显的凋亡/死亡率抑制作用.造模后,预防组细胞ROS升高水平明显低于模型组,而且恢复至正常水平时间明显缩短.含药血清组AKT、NF-κB、MAPK mRNA表达先下降(0～4 h)再逐渐上升(4～12h),并对NF-κB、MAPK mRNA表达呈现一定剂量依赖性,与PBS组比较有显著差异(P＜0.05).结论 肾衰康灌肠液含药血清可预防HK-2细胞缺氧/复氧损伤,其机制可能与抑制细胞氧化应激、减少细胞ROS过量聚积有关.
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丹皮酚对四氯化碳诱导急性肝损伤小鼠的保护作用
目的 研究丹皮酚对四氯化碳诱导急性肝损伤小鼠的保护作用.方法 36只小鼠随机分为空白组、对照组、模型组(10％四氯化碳,5μL/g)及丹皮酚低、中、高剂量组(50、100、150 mg/kg),每组6只.给药24 h后,测定小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)活性及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)水平,HE染色观察小鼠肝组织形态变化及肝损伤情况,检测小鼠肝组织半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)活性.结果 与模型组比较,丹皮酚组显著降低ALT、AST、MDA、Caspase-3活性及TNF-α、IL-6水平(P＜0.05,P＜0.01),改善肝组织形态学病变,提高SOD、GSH-Px、CAT活性(P＜O.05,P＜0.01).结论 丹皮酚对四氯化碳诱导急性肝损伤小鼠具有保护作用,其机制可能与抗脂质过氧化、减少炎症细胞因子产生、抑制肝细胞凋亡有关.
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参葵通脉颗粒含药血清对H2O2致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用
目的 观察参葵通脉颗粒含药血清对H2O2致乳鼠心肌细胞损伤的保护作用.方法 H2O2与心肌细胞共孵育刺激细胞损伤后,弃去细胞培养上清液,换用参葵通脉颗粒含药血清培养液共培养.分光光度法检测乳鼠心肌细胞培养液中LDH、CK-MB、MDA水平,酶联免疫法检测细胞内ATP水平,Western blot检测细胞中p-AMPKoα、AMPKoα、GLUT4、FAT/CD36、CPT-1表达.结果 与模型组比较,参葵通脉颗粒组LDH、CK-MB、MDA水平显著降低(P＜0.05),ATP水平及p-AMPKα/AMPKα、GLUT4、FAT/CD36、CPT-1表达显著升高(P＜0.05).结论 参葵通脉颗粒对H2O2致乳鼠心肌细胞损伤具有良好保护作用,其机制可能与调控糖脂代谢酶、改善心肌细胞能量代谢障碍有关.
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中药炮制药性变化论
本研究对中药炮制技术和理论形成以及发展脉络进行概括,重点对炮制引起中药药性的变化理论进行梳理,形成了药性变化理论.总结为中药炮制四大传统理论,即中药生熟论、中药制药论、辅料作用论、药性变化论.对中药炮制的现代研究趋势进行展望,并提出加强对中药炮制转化,也就是中药炮制过程中化学成分变化的研究,将是解析中药炮制原理的必需途径.
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灯盏花素口崩片的稳定性
目的 研究灯盏花素口崩片的稳定性.方法 口崩片采用市售包装(聚氯乙烯泡罩),在影响因素试验[高温60℃、高湿(90±5)％、强光(4 500-±500) lx]中放置10 d,加速稳定性试验[温度(40±2)℃、相对湿度(75±5)％]中放置6个月,长期稳定性试验[温度(25±2)℃、相对湿度60± 10)％]中放置18个月,检测其性状、崩解时限、溶出度、含有量变化.结果 与0天(0月)比较,3个试验中各项指标均基本无变化.结论 灯盏花素口崩片有效期暂定为18个月.
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喀什小檗果实水提物对大鼠离体胸主动脉环的舒张作用
目的 研究喀什小檗果实水提物对SD大鼠离体胸主动脉环的舒张作用.方法 采用离体血管灌流实验方法,观察喀什小檗果实水提物(10～5 000 mg/L)对SD大鼠离体胸主动脉环张力的影响.结果 喀什小檗果实水提物对内皮完整和去内皮的离体血管环均有浓度依赖性的舒张作用,当质量浓度在1000～5 000 mg/L时差异有统计学意义(P＜0.01).结论 喀什小檗果实水提物具有非内皮依赖性的舒张血管作用.
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银杏叶注射液对丙泊酚麻醉后高龄大鼠认知功能障碍的影响
目的 探讨银杏叶注射液对丙泊酚麻醉后高龄大鼠认知功能障碍的影响.方法 大鼠腹腔注射丙泊酚(6 mL/kg)麻醉建立认知功能障碍模型.80只大鼠随机分为空白组、模型组、预防组(麻醉前3d开始腹腔注射银杏叶注射液,2 mL/kg)、治疗组(麻醉后开始腹腔注射银杏叶注射液,2 mL/kg),每组20只,每天给药1次,连续3d.观察大鼠Morris水迷宫逃避潜伏期,检测血清IL-1β、IL-I0水平.结果 银杏叶注射液能明显缩短逃避潜伏期,降低IL-1β、IL-IO水平.结论 银杏叶注射液可改善丙泊酚麻醉后高龄大鼠认知功能障碍.
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白藜芦醇苷对心脏缺血再灌注损伤大鼠的保护作用
目的 探讨白藜芦醇苷对心脏缺血再灌注损伤大鼠的保护作用.方法 建立大鼠离体心脏缺血再灌注损伤模型,作为模型组;白藜芦醇苷预处理,作为处理组;同时设置对照组.测定左室发展压力(LVDP)、心率(HR)、左心室大收缩速率(+dp/dt)、左心室大舒张速率(-dp/dt),TTC法测定心肌梗死面积,TUNEL法检测细胞凋亡率,Western blot法检测Cleaved Caspase-3水平,硫代巴比妥酸法测定丙二醛(MDA)水平,黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)活性.结果 与模型组比较,处理组LVDP、HR、+dp/ dt、-dp/ dt、SOD活性显著升高(P＜0.0l),心肌梗死比例、细胞凋亡率、Cleaved Caspase-3水平、MDA水平显著降低(P＜0.01).结论 白藜芦醇苷可能通过影响氧化应激损伤和心肌细胞凋亡来对心脏缺血再灌注损伤大鼠发挥保护作用.
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竹节参总皂苷对自然衰老大鼠脂肪组织炎症的改善作用
目的 探讨竹节参总皂苷对自然衰老大鼠脂肪组织炎症的改善作用.方法 48只2月龄大鼠随机分成自然衰老组及竹节参总皂苷低、中、高剂量组(10、30、60 mg/kg),每组12只,待大鼠长至18月龄后,再取12只2月龄大鼠作为正常对照组,竹节参总皂苷组大鼠从18月龄开始灌胃给药,连续4个月,每星期停药1d.HE染色观察脂肪组织形态学变化,RT-PCR法检测脂肪组织白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素-1β (IL-1β)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)mRNA表达,Western blot检测脂肪组织IL-1β、TNF-αr、Toll样受体4(TLR4)、NF-KB、pNF-κB蛋白表达.结果 自然衰老组大鼠脂肪细胞排列紊乱,炎症细胞浸润明显增加,坏死及变大的脂肪细胞增多,经竹节参总皂苷处理后上述病理变化得到明显改善.与自然衰老组比较,竹节参总皂苷组IL-6、IL-lβ、MCP-1、TNF-α mRNA表达,以及IL-1β、TNF-α、TLR4、NF-KB、pNF-KB蛋白表达均有一定程度下调,以中、高剂量组更显著(P＜0.05).结论 竹节参总皂苷可改善自然衰老大鼠脂肪组织炎症,其机制可能涉及TLR4/NF-KB信号通路.
