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阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物诱导的人内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1mRNA表达影响及其机制的实验研究

徐尚华；王科峰；许昌声；谢良地

关键词：动脉粥样硬化糖基化终产物高级趋化因子CCL2 PPARγ NF-κB 阿托伐他汀

摘要： 目的观察阿托伐他汀对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGE)诱导的人脐静脉内皮细胞表达单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的影响,并探讨其作用机制.方法实验分组:(1)空白对照组.(2)牛血清白蛋白(BSA)对照组.(3)AGE诱导组:不同作用浓度的AGE(10-4、10-3、10-2及10-1g/L)与细胞共同培养24 h.(4) AGE+阿托伐他汀组:用不同作用浓度的阿托伐他汀(0.1、1、10 μmol/L)分别与细胞培养1 h,而后加入10-1 g/L AGE[根据(3)实验结果选取佳浓度]与细胞共孵育24 h.(5)PPAR-γ激动剂(15 d-PGJ2)组:15 d-PGJ2( 10 μmol/L)与细胞孵育1 h后加入10-1 g/L AGE再与细胞共孵育24 h.(6)PPAR-γ抑制剂(GW9662)组:GW9662(5000 g/L)与细胞孵育1 h后加入AGE(10-1 g/L)和阿托伐他汀(1 μmol/L)[根据(4)实验结果选取佳浓度]再与细胞共孵育24 h.胶原酶消化法获取人脐静脉内皮细胞.逆转录聚合酶链反应法分析细胞MCP-1和过氧化物酶增殖物活化受体γ(PPAR-γ)基因的表达.蛋白免疫印迹法测定细胞核因子-κB(NF-κB )p65表达水平.结果 (1)AGE(10-4、10-3、10-2及10-1 g/L)呈浓度依赖性提高人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA表达水平,分别是空白对照组的1.53倍、2.12倍、2.56倍及4.71倍;AGE浓度为10-4 g/L时,细胞MCP-1 mRNA表达明显高于空白对照组(0.26±0.02比0.17±0.04,P<0.01).(2)与AGE组比,阿托伐他汀(0.1、1、10 μmol/L)呈浓度依赖性抑制AGE诱导的人内皮细胞MCP-1 mRNA的表达;阿托伐他汀浓度为1 μmol/L时,细胞MCP-1 mRNA表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组(0.63±0.11比1.03±0.07,P<0.01).(3)AGE(10-1 g/L)组人脐静脉内皮细胞PPAR-γ mRNA的表达水平显著低于空白对照组(0.22±0.08比0.69±0.09,P<0.01),磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著高于空白对照组(0.78±0.06比0.31±0.01和1.61±0.16 比0.59±0.14,P均<0.01).(4)阿托伐他汀(1、10 μmol/L)组人脐静脉内皮细胞PPAR-γ mRNA表达水平显著高于AGE(10-1 g/L)组(0.59±0.02和0.61±0.06比0.22±0.08,P均<0.01);阿托伐他汀(1 μmol/L)组磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组(0.40±0.03比0.78±0.06和0.65±0.12比1.61±0.16,P均<0.01).(5)PPAR-γ激动剂(15 d-PGJ2)组细胞磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组 (0.21±0.01比0.78±0.06和0.67±0.14比1.61±0.16,P均<0.01),MCP-1 mRNA表达水平显著低于AGE(10-1g/L)组(0.17±0.02比0.93±0.12,P<0.01).(6)PPAR-γ抑制剂(GW9662)组细胞磷酸化和非磷酸化NF-κB p65蛋白表达水平显著高于AGE(10-1g/L)+阿托伐他汀(1 μmol/L)组(0.53±0.02比0.40±0.03和1.38±0.18比0.65±0.12,P均<0.01),MCP-1 mRNA表达水平显著高于AGE(10-1g/L)+阿托伐他汀(1 μmol/L)组(0.62±0.05比0.30±0.07,P<0.01).结论阿托伐他汀可通过提高AGE诱导的人脐静脉内皮细胞对PPAR-γ表达抑制细胞NF-κB信号途径,进而抑制AGE诱导的人脐静脉内皮细胞的炎性反应.

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