首页 > 文献资料
-
壬基酚对原代培养大鼠间质细胞3β-HSD活性的影响
目的 探讨壬基酚对体外培养大鼠leydig细胞3β-HSD的影响.方法 建立体外培养大鼠leydig原代培养的方法,染壬基酚(0、0.1、1.0和10 μmol/L)24 h后,ELISA方法检测细胞上清液中睾酮及细胞内3β-HSD的含量,并运用反转录-聚合酶链反应( RT-PCR)的方法检测leydig细胞内3β-HSD mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,在设计剂量范围内,随着染壬基酚剂量的加大,细胞培养液中睾酮3β-HSD的含量逐渐降低.1.0和10 μmol/L时,差异具有统计学意义(P＜0.05).细胞内3β-HSD含量不断降低,1.0和10 μmol/L时,细胞内该酶的降低有统计学意义(P＜0.05).3β-HSD的mRNA的表达水平逐渐降低,1.0和10μmol/L时,差异具有统计学意义(P＜0.05).结论 壬基酚可下调3β-HSD的mRNA的表达水平,降低细胞内3β-HSD的含量,抑制体外培养leydig细胞睾酮的合成.
关键词： 壬基酚 睾丸间质细胞 3β-羟基类固醇脱氢酶 睾酮 -
MnCl2对体外培养Leydig细胞3β-HSD的影响
目的 探讨锰对体外培养Leydig细胞3β-HSD的影响.方法 建立体外培养大鼠Leydig细胞的原代培养方法,染锰(0、10、30和100 μmol/L)24 h后,原子吸收光谱法检测细胞内外锰的含量,ELISA方法检测细胞培养上清液中睾酮及细胞内外3β-HSD的含量,并运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测Leydig细胞3β-HSD mRNA的表达水平.结果 与对照组相比,在设计剂量范围内,随着染锰剂量加大,细胞培养上清液中睾酮及细胞内Mn的含量逐渐增加,30、100 μmol/L时,有统计学意义(P＜0.05).细胞内外3β-HSD的含量及3β-HSD mRNA的表达水平均在染锰10μmol/L时升高,之后不断降低,100 μmol/L时,有统计学意义(P＜0.05).结论 在该实验条件下,MnCl2可以改变3βHSD基因表达及蛋白合成,影响体外培养Leydig细胞合成睾酮.
关键词： 氯化锰 睾丸间质细胞 睾酮 3β-羟基类固醇脱氢酶 -
双酚A对体外培养小鼠睾丸睾酮合成的影响及机制
目的 探讨睾丸体外培养模型下双酚A(BPA)暴露对小鼠睾丸睾酮合成及基因表达的影响.方法 采用睾丸器官体外培养方法,将睾丸随机分为DMSO溶剂对照组和4个BPA剂量染毒组(终浓度为10-7、10-6、10-5和10-4 moL/L).分别培养24、48和72h,每24h通气一次.HE染色光镜下观察睾丸组织形态学变化,放射免疫法检测培养液睾酮浓度,免疫组化法检测睾丸组织相关蛋白表达.实时荧光定量PCR检测睾丸组织相关基因表达水平.结果 10-4 moL/L剂量组支持细胞数目减少,部分间质细胞核固缩或呈絮状改变；随着时间的延长睾酮分泌逐渐减少,与DMSO对照组相比,10-5 moL/L剂量组在48h时睾酮合成增加(P＜0.05),其余各剂量组睾酮分泌降低,以10-4 mol/L剂量组较明显(P＜0.01)；睾酮合成相关酶3β-羟基类固醇脱氢酶(3βHSD)、胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、细胞色素P45017a羟化酶(P450c17)及波形蛋白(Vimentin)的基因及蛋白表达水平下降.结论 BPA能通过抑制3βHSD、P450scc、P450c17及Vimentin等相关酶的表达,干扰间质细胞睾酮的合成.
关键词： 双酚A 睾丸 睾酮 3β-羟基类固醇脱氢酶 -
哮喘大鼠肾上腺皮质功能的变化及补肾定喘汤对其影响
目的:研究哮喘大鼠肾上腺皮质功能的变化及补肾定喘汤对其的影响.方法:用卵蛋白致敏SD大鼠的方法建立哮喘模型,随机分为模型组、必可酮组、补肾定喘汤组并设正常对照组.用放射免疫分析法测定血浆皮质酮;用酶组织化学测定肾上腺琥珀酸脱氢酶(SDH)、3 β-羟基类固醇脱氢酶(3 β-HSD)的活性.结果:哮喘模型组血浆皮质酮降低(P＜0.01),肾上腺SDH、3 β-HSD活性下降(P＜0.05),补肾定喘汤组血浆皮质酮水平升高(P＜0.01),肾上腺SDH、3 β-HSD活性增强(P＜0.05).结论:哮喘大鼠存在肾上腺皮质功能减退,补肾定喘汤能兴奋肾上腺皮质功能.
关键词： 哮喘 皮质酮 3β-羟基类固醇脱氢酶 琥珀酸脱氢酶 补肾定喘汤 -
3β-羟基类固醇脱氢酶在甾体激素生成组织中的功能
3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-hydroxysteroid dehydrogenase,3β-HSD)是一类依赖于NAD+/NADP+接受质子的氧化还原酶.在胆固醇转化为类固醇激素中起限速酶作用,在体内广泛分布.3β-HSD催化环戊烷并多氢菲结构3号位CH-OH转化为C=O,是参与肾上腺糖皮质激素合成中唯一非细胞色素P450家族中的酶;3β-HSD催化孕烯醇酮生成孕酮、17α-羟孕烯醇酮转化为17α-羟孕酮、雄烯二醇生成睾酮等多步化学反应.3β-HSD通过参与细胞内甾体激素生成,进而在生殖系统中发挥功能.此外,3β-HSD在脑、脂肪组织中也有较强表达,本文就3β-HSD在甾体激素生成组织中的功能及其临床意义进行总结.
关键词： 3β-羟基类固醇脱氢酶 甾体激素生成组织 睾丸 脂肪组织 脂肪分解 -
肾上腺皮质细胞的单层培养方法
目的: 体外单层培养大鼠肾上腺皮质细胞,以便为肾上腺皮质细胞的有关实验提供必要条件.方法: 采用胶原酶Ⅱ、透明质酸酶消化等步骤分离Wistar大鼠的肾上腺皮质细胞;分离的细胞于含15% NBS的DMEM培养基、37℃、5% CO2的环境中培养,3β-羟基类固醇脱氢酶特异染色鉴定.结果: 培养的肾上腺皮质细胞呈梭形,胞体较大、有少量突起,3β-羟基类固醇脱氢酶特异染色后胞体显著着蓝色.肾上腺皮质细胞不呈典型的"S"形增殖趋势,适于作原代培养.上皮样细胞和成纤维样细胞同时存在.结论: 通过细胞形态观察及特异酶染色鉴定,本文培养的细胞为大鼠肾上腺皮质细胞.
关键词： 肾上腺皮质细胞 单层培养 3β-羟基类固醇脱氢酶 -
双酚A对SD大鼠睾酮含量及P450 scc和3β-HSD蛋白表达的影响
目的 研究双酚A对雄性大鼠睾丸间质细胞内睾酮含量及睾酮合成关键酶P450scc和3β-HSD表达的影响,探讨双酚A对睾酮的作用机制.方法 选择成年雄性SD大鼠48只,随机分为4组:对照组及染毒低剂量组(2 mg·kg-1·d-1)、中剂量组(20 mg·kg-1·d-1)、高剂量组(200 mg·kg-1·d-1).连续灌胃8周.测定不同剂量组大鼠的血清睾酮含量,免疫组化方法检测睾丸间质细胞上P450scc和3β-HSD蛋白的表达.结果 染毒中剂量组和高剂量组睾酮含量明显低于对照组(P<0.05),并有随染毒剂量增加而睾酮含量降低趋势;免疫组化图像分析结果显示:P450scc和3βΗSD在各染毒组平均吸光度值均数皆小于对照组,中剂量组和高剂量组与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05).结论 双酚A可以抑制睾丸间质细胞合成睾酮,并抑制睾酮合成关键酶P450scc和3βHSD在睾丸间质细胞的表达.
关键词： 双酚A 睾酮 3β-羟基类固醇脱氢酶 P450胆固醇侧链裂解酶 -
3β-羟基类固醇脱氢酶基因的克隆表达及其性质研究
目的:构建3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)异源表达系统,进一步探究其酶学性质.方法:通过分子生物学方法克隆来源于Mycobacterium neoaurum菌株的3β-羟基类固醇基因,构建重组质粒,运用HPLC方法检测酶反应体系的产物.结果:本实验构建了表达载体pet28a-hsd.优化诱导表达条件,发现3β-HSD异源表达的适温度为16℃～25℃,37℃时蛋白表达为包涵体.此外,同一温度下不同IPTG浓度诱导的表达结果差异不大.利用纯化后的蛋白进行酶特性的研究,结果表明在3β-HSD酶反应体系中,30℃达到较高的酶活性;pH 7.5～9.0之间,酶活力较强,pH低于7.0时,酶活性明显下降;有机助溶剂DMSO对酶反应有抑制作用;Fe3+和Cu2+对酶反应有抑制作用.结论:本实验探究了分枝杆菌中3β-羟基类固醇脱氢酶的相关性质,为进一步研究该酶在类固醇代谢中的功能提供基础.
关键词： 3β-羟基类固醇脱氢酶 类固醇 酶活性 -
大鼠睾丸间质细胞体外培养不同时间3β-羟基类固醇脱氢酶的表达
目的 探讨通过差速贴壁法获得的7天龄、3周龄大鼠睾丸间质内细胞的细胞群体构成、体外培养不同时间3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)的表达水平变化.以及细胞睾酮分泌功能变化.方法 联合应用胶原酶消化、不锈钢滤网过滤及差速贴壁法获得7天龄、3周龄雄性Wistar大鼠睾丸间质组织内细胞,贴壁细胞以DMEM/F12培养液培养,分别对原代培养2 h、4 d细胞进行3β-HSD免疫化学染色及流式细胞分析,原代培养细胞同时给予人绒毛膜促性腺激素(HCG)刺激,测定HCG刺激组和非刺激组各代细胞培养液上清中睾酮水平及其对HCG刺激的反应.结果 7天龄、3周龄鼠差速贴壁法获得的睾丸间质内细胞群经流式细胞鉴定,3β-HSD阳性细胞所占比例分别为(5.4±1.2)%、(59.2±3.2)%;培养4 d后,两组3β-HSD阳性细胞比例分别为(93.6±1.2)%、(95.4±3.2)%.两组原代培养细胞均有睾酮生成功能,在HCG刺激下睾酮分泌均明显上升,7天龄组培养细胞睾酮分泌高峰迟于3周龄组.结论 差速贴壁法获得的7天龄、3周龄大鼠睾丸间质细胞群中均含有部分Leydig于细胞(Stem Leydig cells,SLCs),SLCs在体外培养过程中逐渐分化,表达3β-羟基类周醇脱氢酶,并产生睾酮.
关键词： 睾丸间质细胞 差速贴壁法 睾酮 3β-羟基类固醇脱氢酶 组织工程 -
大鼠睾丸间质细胞中NO供体调控睾酮分泌的机制
目的 研究一氧化氮(NO)供体(硝普钠,SNP)对大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮的影响及其机制.方法 大鼠睾丸间质细胞原代培养12 h后,用不同浓度的SNP(0,10-8,10-8,10-4mol/L)分别处理4、8、12 h,用化学发光法检测细胞上清睾酮(T)水平的变化;western blot法分析间质细胞内3β-HSD(3β-羟基类固醇脱氢酶)和annexin 5(膜联蛋白5)的变化.结果 10-4mol/L的SNP处理间质细胞8 h后,睾酮水平较对照组上升23%(P<0.05);10-6mol/L的SNP处理12 h后,睾酮水平较对照组上升28%(P<0.05),10-4 mol/L的SNP处理12 h,较对照组升高37%(P<0.05).western blot结果显示,SNP的刺激对3β-HSD表达无显著影响.不同浓度SNP刺激间质细胞4 h和8 h后,annexin 5表达量与对照组比较无显著差异(P>0.05);10-6mol/L的SNP刺激12 h后,annexin 5表达量达到高水平,较对照组升高55%(P<0.05);10-4mol/L的SNP处理12 h,armexin 5表达量较对照组升高48%(P<0.05).结论 SNP在低浓度范围内促进大鼠睾丸间质细胞分泌睾酮,且睾酮的分泌时SNP具有时阃和剂量的依赖性;SNP刺激睾酮分泌的过程并非通过3β-HSD介导,但可能与armexin 5表达有关.
关键词： 一氧化氮 硝普钠 睾丸间质细胞 3β-羟基类固醇脱氢酶 膜联蛋白5 -
邻苯二甲酸二乙基己酯对新生小鼠睾丸及 Leydig细胞影响的实验研究
目的:探讨邻苯二甲酸二乙基己酯(DEHP)对新生小鼠睾丸及Leydig细胞形态结构及功能的影响.方法:DEHP分别以低、中、高3组剂量[100、200、500 mg/(kg·d)]灌胃作用于怀孕12 d到产后3 d(GD12～PND3)的KM母鼠,观察DEHP对新生雄性仔鼠体重、睾丸重量、Leydig细胞形态结构和3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)活性、酶反应面积的影响.结果:DEHP作用于母鼠后,其雄性子代幼鼠体重和睾丸重量减轻,睾丸Leydig细胞形态、超微结构发生改变;高剂量组Leydig细胞数量明显增多;低、中剂量组睾酮合成关键酶3β-HSD酶活性下降,酶反应面积减小,但高剂量组在仔鼠出生后15 d时酶活性降低[(吸光度值(0.154±0.011)vs空白对照组(0.222±0.013),P＜0.01],而酶反应面积增大[(6 303.0±745.6)μm2 vs空白对照组(5 091.4±214.4)μm2,P＜0.01)].结论:DEHP能影响新生雄性小鼠体重、睾丸重量、Leydig细胞的形态结构和3β-HSD活性,具有抗雄激素效应.
关键词： 邻苯二甲酸二乙基己酯 胚胎 Leydig细胞 3β-羟基类固醇脱氢酶 小鼠 新生 -
大鼠睾丸间质细胞中促性腺激素释放激素激动剂调控睾酮合成的机制
目的:研究促性腺激素释放激素(GnRH)激动剂(GnRHa)对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成的调控机制.方法:原代培养大鼠睾丸间质细胞,GnRHa(10-7 mol/L)分别处理问质细胞6、12、24、36、48 h后,Westem blot方法分析3β-羟基类同醇脱氧酶(313-HSD)蛋白的变化;MEK1/2抑制剂PD98059(50μmol/L)和GnRHa共作用于问质细胞后,分析3β-HSD蛋白表达和睾酮水平的变化.结果:GnRHa处理间质细胞不同时间后,结果显示3β-HSD蛋白的表达对GnRHa的刺激具有时间依赖性.GnRHa处理12 h后,3β-HSD蛋白表达与对照组相比显著上升45%(P<0.05),24 h达到高水平,升高1.0倍(P<0.05):48 h后3β-HSD恢复至正常水平.加入PD98059后,显著抑制了GnRHa对3β-HSD的刺激作用,3β-HSD水平下降了61%(与GnRHa组相比,P<0.05),睾酮水平也随之显著下降45%(与GnRHa组相比,P<0.05).结论:GnRHa可能通过细胞外信号调节激酶(ERK1/2)途径调控大鼠睾丸间质细胞3β-HSD的表达,进而促进睾酮的合成.
-
膜联蛋白5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-羟基类固醇脱氢酶表达的影响
目的 先前研究发现促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone, GnRH)刺激Leydig细胞后,膜联蛋白5(annexin 5)及睾酮水平同时增加,推测annexin 5和睾酮之间可能存在某种内在的联系,3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)是间质细胞的标记酶.文中旨在研究annexin 5对大鼠睾丸间质细胞睾酮分泌及3β-HSD表达的影响. 方法原代培养大鼠睾丸间质细胞,用不同浓度的annexin 5(0、10-10、10-9、10-8mol/L)处理间质细胞24h和用10-9mol/L的annexin 5处理细胞不同时间(6、12、24、36h),收集培养液,用化学发光法测定培养液中的睾酮含量;Western blotting方法分析睾丸间质细胞中3β-HSD的表达变化. 结果 不同浓度的annexin 5处理间质细胞24h后,与对照组比较,终浓度为10-10mol/L和10-9mol/L时,睾酮水平分别升高了18%[(14.38±0.30)nmol/L vs (12.12±0.74)nmol/L](P<0.01)和26%[(15.25±0.47)nmol/L vs (12.12±0.74)nmol/L](P<0.01);浓度为10-8mol/L时,睾酮水平虽也有升高趋势,但无显著性差异;而Western blotting结果显示,浓度为10-9mol/L时,3β-HSD表达量升高了63%(2.19±1.00 vs 1.34±0.19,P<0.05),浓度为10-10mol/L和10-8mol/L时,3β-HSD表达量无显著性差异;睾酮分泌与3β-HSD的表达呈显著正相关(r=0.430,P<0.05).10-9mol/L的annexin 5处理细胞不同时间,与对照组相比,6h和12h后睾酮的分泌虽有升高,但无统计学意义(P＞0.05);24h后睾酮的分泌量显著升高了18%[(12.59±0.41)nmol/L vs (10.70±0.09)nmol/L](P<0.01);而处理36h后,睾酮分泌量下降了21%[(14.44±1.65)nmol/L vs (17.46±0.31)nmol/L](P<0.01). 结论 在大鼠睾丸间质细胞中,annexin 5对睾酮分泌具有调节功能且呈剂量和时间依赖性;3β-HSD是该调节过程中的关键酶之一.
关键词： 膜联蛋白5 间质细胞 睾酮 3β-羟基类固醇脱氢酶 -
多囊卵巢综合征孕妇胎盘类固醇的研究
目的 评估多囊卵巢综合征(PCOS)孕妇胎盘类固醇硫酸酯酶(STS)、3 β-羟基类固醇脱氢酶1型(3β-HSD-1)和P450芳香化酶(P450arom)活性.方法 研究对象为足月分娩的20例PCOS孕妇和30例健康对照孕妇.分娩后采集胎盘组织和脐带血样本.孕34周时采集母体血液样本.评估胎盘组织中STS、3 β-HSD-1和P450arom活性.测定血液样本内孕酮、硫酸脱氢异雄酮(DHEAS)、脱氢表雄酮(DHEA)、雄烯二酮、睾酮、雌酮、雌二醇和总雌三醇含量.结果 与健康对照组孕妇比较,PCOS孕妇胎盘组织中3β-HSD-1含量较高,而P450arom活性较低.此外,PCOS孕妇雄烯二酮和睾酮浓度比对照组孕妇高(P=0.016和0.025).相较于对照组女性新生儿,PCOS组女性新生儿脐带血内雄烯二酮较低,而雌三醇浓度较高(P=0.038和0.031).结论 PCOS孕妇胎盘组织内参与类固醇合成的两个重要酶活性发生改变,3β-HSD-1升高,而P450降低,该变化可引起怀孕期间雄激素分泌增加.
关键词： 多囊卵巢综合征 胎盘 3β-羟基类固醇脱氢酶 P450芳香化酶 -
邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯对原代培养小鼠胚胎睾丸Leydig细胞功能影响研究
目的探讨邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯[Di(2-ethylhexyl)phthalate, DEHP]对体外培养的小鼠胚胎睾丸间质细胞(Leydig细胞)3β-羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)活性及睾酮合成的影响.方法小鼠胚胎Leydig细胞原代培养.DEHP染毒剂量分别为25、50、100、200 mg/L,通过检测睾酮合成关键酶3β-HSD活性、放免法测定培养液中睾酮浓度,研究DEHP对Leydig细胞功能影响.结果小鼠胚胎Leydig细胞分离培养后,纯度和存活率分别达(81.17±2.32)%、(80.88±2.80)%.DEHP(25 mg/L)处理12 h,或DEHP(50 mg/L)处理6 h后,实验组与对照组比较3β-HSD酶活性明显降低(P《0.05),随着时间延长和药物浓度增加差异更显著(P《0.01).DEHP50、100 mg/L实验组,在12、24 h的睾酮水平明显低于对照组(P《0.05)或(P《0.01),存在时间-效应关系;DEHP 200 mg/L实验组在6、12、24 h与对照组比较均有非常显著差异(P《0.01),并可观察到Leydig细胞明显的形态学改变.结论 DEHP能影响原代培养小鼠胚胎Leydig细胞3β-羟基类固醇脱氢酶活性,并抑制睾酮合成,存在时间-效应和剂量-效应关系.
-
DEHP对3β-羟类固醇脱氢酶表达水平的影响
目的:研究邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对MCF-7细胞中3β-羟类固醇脱氢酶(3β-HSD)表达的影响.方法:采用不同浓度(0.05、0.1、0.2、0.4、0.8 mmol/L) DEHP对体外培养的MCF-7细胞分别染毒12、24和48 h,或同一浓度(0.8 mmol/L)染毒不同时间(3、6、12、24、48 h)后,荧光定量PCR检测各组MCF-7细胞3β-HSD mRNA表达水平,Western blot检测3β-HSD蛋白表达水平.结果:DEHP 0.1～0.8 mmol/L分别染毒细胞12～48 h,3β-HSD mRNA表达水平均较对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.01);DEHP0.05 mmol/L染毒细胞48 h,3β-HSD mRNA表达水平比对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.05).DEHP 0.8 mmol/L染毒细胞6～48h,3β-HSD mRNA表达水平均较对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.01).DEHP 0.2～0.8 mmo]/L染毒细胞24 h,3β-HSD蛋白表达水平较对照组升高,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜O.01).结论:DEHP可引起3β-HSD mRNA和蛋白表达水平升高,推测DEHP可能通过影响类固醇激素合成过程中3β-HSD表达水平的变化,从而产生生殖毒性作用.
-
邻苯二甲酸二（2-乙基己）酯对雄性大鼠激素相关基因表达水平的影响
目的：探讨邻苯二甲酸二(2-乙基己)酯(DEHP)对雄性大鼠睾丸中激素相关基因表达水平的影响，为研究DEHP生殖毒性提供科学依据。方法：40只5周龄雄性SPF级SD大鼠，随机分为对照组(玉米油)、DEHP低剂量组(100 mg/kg)、DEHP中剂量组(500 mg/kg)和DEHP高剂量组(1500 m g/kg)，每组10只，每天灌胃染毒1次，每周5次，连续染毒6周。于末次染毒24 h 后处死动物，实时荧光定量PCR法测定睾丸组织内类固醇快速调节蛋白(StAR)、3β-羟基类固醇脱氢酶(3-HSD)、17-羟基类固醇脱氢酶(17-HSD)、促性腺激素释放激素(GnRH)及雌激素受体(ERα、ERβ)的基因表达水平。结果：与对照组比较，、β基因表达水平在DEHP各剂量组均明显升高，差异均具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)；17β-HSD基因表达水平在DEHP高剂量组升高(P<0.01)，而低剂量组和中剂量组则无明显改变(P>0.05)；ERα基因表达在DEHP高剂量组升高(P<0.01)；ERβ基因表达在DEHP低剂量组和中剂量组下降(P<0.01)，但在DEHP高剂量组升高(P<0.01)；GnRH基因表达水平在DEHP中剂量组和高剂量组均显著下降，差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论：DEHP染毒可引起雄性大鼠激素相关基因表达水平改变，干扰雄性激素的合成，可能导致生殖障碍。βββStAR 3-HSD
