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毒物代谢酶的基因多态性与慢性苯中毒易感性
目的 探讨毒物代谢酶CYP2E1、MPO、NQO1、GSTT1和GSTM1基因多态性与慢性苯中毒遗传易感性之间的关系.方法 选择100名慢性苯中毒工人为病例组及90名同期接苯但无苯中毒表现的同工种工人为对照组,应用PCR-RFLP及多重PCR方法判定CYP2E1、MPO、NQO1、GSTT1和GSTM1基因基因型.结果 携带NQO1 C609T T/T基因型(纯合突变型)个体发生苯中毒的危险性是具有C/T基因型(杂合型)和C/C基因型(野生型)个体的2.82倍(95% CI:1.42～5.58,P＜0.05),是具有C/C基因型(野生型)个体的2.94倍(95% CI:1.25～6.90,P＜0.05);携带GSTT1缺失型(null)基因型个体发生苯中毒的危险性是具GSTT1非缺失型(non-null)基因型个体的1.91倍(95% CI:1.05～3.45,P＜0.05).未发现CYP2E1、MPO、GSTM1基因型与苯中毒之间的关系.同时携带NQO1 C609T纯合突变型(T/T)、GSTT1缺失型(null)与GSTM1缺失型(null)个体接苯时发生苯中毒的危险性高,是NQO1 C609T杂合型(C/T)和野生型(C/C)、GSTT1非缺失型(non-null)与GSTM1非缺失型(non-null)个体的20.41倍(95% CI:3.79～111.11,P＜0.01).结论 基因之间的交互作用在苯中毒的发生中起重要作用.同时携带NQO1 C609T纯合突变基因型(T/T)、GSTT1缺失基因型(null)和GSTM1缺失基因型(null)个体发生苯中毒的风险大,可考虑作为苯中毒的重要生物标志物.
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代谢酶的基因多态性与慢性苯中毒遗传易感性的病例-对照研究
目的苯的慢性毒性主要来源于其在体内的代谢产物,即参与苯代谢的主要酶.
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NQO1基因多态性与慢性苯中毒遗传易感性的研究
目的 探讨NQO1基因多态性与慢性苯中毒遗传易感性之间的关系.方法选择100名慢性苯中毒工人为病例组及90名同期接苯但无苯中毒表现的同工种工人为对照组,应用PCR-RFLP方法判定NQO1基因型.结果携带NQ01 C609T T/T基因型(纯合突变型)个体发生苯中毒的危险性是具有C/T基因型(杂合型)和 C/C基因型(野生型)个体的2.82倍(95% CI:1.42～5.58),是具有C/C基因型(野生型)个体的2.94倍 (95%CI:1.25-6.90);并存在携带NQO1 C609T T/T基因型(纯合突变型)个体发生苯中毒的危险性高于携带NQO1 C609T C/T基因型(杂合型)个体、更高于C/C基因型(野生型)个体的趋势(χ2trend=6.01,P=0.014).结论携带NQO1 C609T 纯合突变基因型(T/T)个体接苯时发生苯中毒的危险性增高,考虑此基因可作为易感性生物标志物,用于苯作业工人上岗前的筛检.
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山菠菜三萜组分在体外及体内对Ⅱ相解毒酶的调控作用机制
目的:研究山菠菜三萜组分体外及体内对Ⅱ相酶的活力及其蛋白表达的影响.方法:体外采用正常人支气管上皮(NHBE)细胞模型,体内采用昆明(KM)小鼠模型,以1-氯-2,4-二硝基苯(CDNB)比色法检测GST活力,NADPH与2,6-二氯靛酚钠(DCIP)测试NQO1活力,5,5-二硫二硝基苯甲酸(DTNB)比色法测定GSH含量,Western blot测定NQO1蛋白的表达.结果:山菠菜三萜组分能增加NHBE细胞和KM小鼠肺脏内GST和NQO1的酶活力并增加GSH的含量,在体外增加NQO1和Nrf2的蛋白表达.结论:山菠菜三萜组分可以通过调节体内外Ⅱ相解毒酶的酶活力及蛋白表达来实现癌化学预防.
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骨髓增生异常综合征患者GSTT1、GSTM1基因分布频率和NQO1基因多态性分析
目的探讨谷胱甘肽S转移酶(GST)基因T1、M1(GSTT1、GSTM1)和苯醌氧化还原酶基因(NQO1 C609T)多态性与骨髓增生异常综合征(MDS)易感性及MDS染色体核型异常的关系.方法用多重PCR方法检测52例MDS患者和241名与患者无血缘关系的正常人GSTT1和GSTM1基因型,用PCR-限制性片段长度多态性(RFLP)方法分析NQO1C609T基因型.结果与正常人对照组相比,MDS患者GSTT1和GSTM1无效型(null)比例明显增高(P值均＜0.01),其比值比(OR)分别为2.873(95%可信区间:1.491～5.537)和3.591(95%可信区间:1.717～7.508).染色体核型正常的MDS患者GSTT1无效型比例较正常人对照组显著增高(OR=5.336,P＜0.01),而GSTM1无效型比例与正常人对照组比较差异无统计学意义.染色体核型异常的MDS患者GSTM1无效型比例较正常人对照组显著增高(OR=3.740,P＜0.01),而GSTT1无效型比例与正常人对照组比较差异无统计学意义.MDS患者的NQO1C609T各基因型与正常人对照组差异无统计学意义.结论GSTT1和GSTM1基因无效型可能与MDS发生相关,对判断MDS患者是否出现染色体核型异常有一定意义.
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穿心莲内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用
目的 探讨穿心莲内酯对脂多糖诱导RAW264.7细胞炎症反应的抑制作用及其作用机制.方法 采用噻唑蓝比色(MTT)法分析穿心莲内酯对RAW264.7细胞活力的影响.通过脂多糖处理RAW264.7细胞24 h建立细胞炎症模型,造模前1 h用穿心莲内酯2.5、5、10、20μmol/L预处理.荧光定量PCR法检测RAW264.7细胞内相关抗氧化应激酶基因和iNOS水平.穿心莲内酯单独处理RAW264.7细胞24 h,Western blotting法检测Keap1/Nrf2/HO-1信号通路相关蛋白和Keap1、Nrf2、HO-1蛋白水平.免疫荧光检测转录因子Nrf2在胞质及核内的分布情况.结果 与对照组比较,穿心莲内酯剂量相关性地抑制RAW264.7细胞活力,差异具有统计学意义(P<0.05、0.01、0.001).穿心莲内酯显著抑制脂多糖诱导RAW264.7细胞的iNOS水平(P<0.001),增加相关抗氧化酶基因HO-1、NQO1 mRNA水平.穿心莲内酯抑制Keap1表达,增加Nrf2和HO-1蛋白水平的表达.结论 穿心莲内酯可抑制脂多糖诱导的炎症反应,其作用机制可能与激活Keap1/Nrf2/HO-1信号通路从而调控抗氧化酶HO-1、NQO1 mRNA表达水平相关.
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蒿鳖养阴软坚方通过激活Nrf2/NQO1信号通路抑制肝纤维化发生
目的:探讨蒿鳖养阴软坚方通过激活Nrf2/NQO1信号通路对四氯化碳复合因素所致大鼠肝纤维化的抑制作用.方法:选用健康Wistar大鼠作为研究对象,将大鼠随机分为正常组、模型组、低剂量组、中剂量组、高剂量组和秋水仙碱组.除正常组大鼠外,其余大鼠均给予自制高脂饲料饲养,每周两次皮下注射40％CCl4花生油混合溶液,隔日灌胃给予30％乙醇,各给药组每日灌胃给药的同时给予正常组和模型组以等容积的蒸馏水,直至造模时间(共6周)结束后,乌拉坦麻醉大鼠并收集肝组织标本,比色法检测肝组织中羟脯氨酸(Hyp)的含量,免疫组织化学法检测各组大鼠肝组织中Nrf2和NQO1的分布情况,Western blot法检测各组大鼠肝组织中Nrf2和NQO1的表达水平.结果:与正常组相比,模型组Hyp含量明显升高(P＜0.05);各给药组的Hyp含量显著低于模型组,且肝组织中Nrf2和NQO1的表达水平显著升高(P＜0.05).结论:蒿鳖养阴软坚方可以通过激活Nrf2/NQO1通路,上调Nrf2和NQO1的表达,降低肝组织中Hyp的含量,从而发挥抑制由四氯化碳复合因素所致大鼠肝纤维化的作用.
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NQO1 C609T基因多态性与结直肠癌易感性关系的Meta分析
目的：用Meta分析评价NQO1基因C609T多态性与结直肠癌易感性关系。方法：检索知网、万方等数据库，收集符合要求的文献，计算合计的OR值及95%可信区间，并评估发表偏倚。结果：杂合基因型CT和突变纯合基因型TT均增加结直肠癌的发病风险。亚洲人携带CT和TT基因型是结直肠癌的危险因素；以医院为基础的病例对照研究中携带CT和TT基因型是结直肠癌的危险因素。结论：携带CT和TT基因型个体发生结直肠癌的风险增高。
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结直肠癌患者NQO1蛋白检测的临床意义及疾病预后价值分析
目的:本研究旨在检测结直肠癌患者肿瘤组织中NQO1蛋白表达水平及其对患者疾病预后价值分析.方法:采用实时定量PCR(Q-PCR)方法检测NQO1 mRNA表达情况,采用Western blotting和免疫组化方法检测NQO1蛋白表达情况,采用siRNA技术干扰结直肠癌细胞系SW480 NQO1表达.结果:与正常组相比,siRNA组在24h、48h、72h细胞活力均降低(P<0.05).与非肿瘤组织相比,结直肠癌组NQO1 mRNA和蛋白的表达量均升高(P<0.05).结直肠癌患者样本为肿瘤组织NQO1阳性率高于临近非肿瘤组织(P<0.05).NQO1表达与结直肠癌患者肿瘤转移、乙型肝炎病毒(HBV)感染、淋巴结肿瘤转移(TNM)分期及肿瘤直径密切相关(P<0.05).NQO1阳性结直肠癌患者的总生存期、无疾病生存期均低于阴性患者(P<0.05).结论:结直肠癌患者肿瘤组织中NQO1蛋白表达上调,且其表达与肿瘤恶性状态密切相关,参与结直肠癌细胞的侵袭和转移,可作为结直肠癌患者疾病预后标志物.
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醌氧化还原酶1 C609T基因多态性与大肠癌关系
目的 探讨NQO1基因C609T变异与大肠癌易感性的关系.方法 采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)基因分型技术,对268对大肠癌患者和对照者NQO1基因cDNA609位点多态性进行测定.结果 病例组中基因型为C/C、C/T、T/T的分别有68,149,69例,分别占23.77%,52.10%和24.13%;对照组分别有116,126,44人,占40 56%,44.06%和15.38%;3种基因型频率在2组中分布差异均有统计学意义(P＜0.05);以C/C基因型作为参照基因型,C/T和T/T 2种基因型的调整OR分别为2.06(95%CI=1.37～3.10)和2.64(95%CI=1.57-4.44);NQO1 C609T变异基因型与吸烟、饮用水及食物类型存在交互作用而增加个体患大肠癌的危险.结论 携带NQO1 C609T,变异基因型个体患大肠癌的风险增加,且该变异基因型与环境因素具有协同致癌作用.
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全氟辛烷磺酸促大鼠肝脏 NQO1 甲基化作用
目的 探讨基因启动子甲基化水平与全氟辛烷磺酸(PFOS)诱导的肝毒性早期过程相关性.方法 在雌性SD大鼠受孕后2～21 d采用PFOS (0.1、0.6、2.0 mg/kg)灌胃染毒;在子鼠出生后21 d收集肝脏组织样本,用亚硫酸氢钠测序聚合酶链式反应法(BSP)结合质粒克隆后测序,检测烟酰胺腺嘌呤二核苷酸:醌氧化还原酶1(NQO1)和肉毒碱棕榈酰转移酶1A(CPT1A)基因启动子区域甲基化状态.结果 与对照组(0％)比较,高剂量PFOS组子鼠肝脏NQO1基因甲基化状态有所上升,-573、-523、-507 3个位点分别升高了10％,而中低剂量组无变化(均为0％);CPT1A基因启动子区域甲基化状态无明显变化.结论 出生前暴露于PFOS的子鼠肝脏中NQO1基因启动子甲基化水平升高.
关键词： 全氟辛烷磺酸(PFOS) 大鼠 NQO1 启动子甲基化 孕期暴露 -
重度子痫前期患者胎盘组织中Nrf2和NQO1的表达
目的 探讨重度子痫前期患者妊娠晚期胎盘组织中Nrf2和NQO1的表达情况及其与重度子痫前期发病的关系.方法 选择重度子痫前期和正常妊娠晚期行剖宫产术的孕产妇各30例,应用Real-Time PCR法和免疫组化法分析两组孕产妇妊娠晚期胎盘组织中Nrf2和NQO1的表达情况.结果 与正常组相比,重度子痫前期组胎盘组织中Nrf2和NQO1 mRNA的表达水平均降低,差异有统计学意义(P＜0.05).Nrf2主要在滋养层细胞的细胞质中表达,细胞核少见表达;NQO1蛋白在滋养层细胞的细胞质中表达.Nrf2和NQO1在重度子痫前期组胎盘组织滋养层细胞中的阳性表达率分别为46.7％和43.3％,低于正常组的76.7％和70.0％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 胎盘组织中Nrf2和NQO1的表达水平下降可能参与了子痫前期的发病过程.
关键词： 子痫前期 Nrf2-ARE通路 NQO1 -
miR-200调控NQO1信号通路诱导三阴性乳腺癌远处转移
[目的]探讨miR-200通过NQO1信号通路促进三阴性乳腺癌发生远处转移的机制.[方法]采用基因芯片扫描技术分析与miR-200表达密切相关的下游分子,并以损伤愈合实验验证miR-200在乳腺癌转移过程中的作用机制.[结果] miR-200的表达与NQO1密切相关,在过表达miR-200的细胞系下调NQO1后,乳腺癌细胞迁移能力明显受到抑制.[结论]miR-200通过NQO1信号通路促进乳腺癌远处转移.
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NQO1与肿瘤
NQO1为体内一种重要的Ⅱ相反应酶,通过去电子还原反应参与机体内外源物质代谢过程.NQO1与醌类物质解毒,抗癌药物生物激活,p53蛋白稳定性调节及TNF-a诱导凋亡效应密切相关,从而在细胞的转化、凋亡及保护中发挥重要作用.其cDNA 609位点上存在C/T间多态性,使突变型产物发生氨基酸替换,失去酶活性,从而使这一位点多态性与多种肿瘤易感性间存在密切联系.本文着重从以上几方面探讨NQO1与肿瘤间的关系.
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NQO1高表达提示宫颈癌预后不良
目的：探讨NQO1蛋白在宫颈癌中的表达及其临床意义。方法免疫组化检测NQO1蛋白在123例宫颈癌标本的表达并比较其与临床病理学参数的相关性，Kaplan－Meier分析NQO1表达对患者无病生存期（ DFS）和总生存期（ OS）的影响，Cox分析宫颈癌的预后风险因素。结果 NQO1蛋白在宫颈癌中呈胞浆染色，其表达率明显高于正常宫颈组织，且NQO1高表达率与肿瘤组织分化、临床分期、淋巴结转移和HPV感染明显相关；NQO1高表达患者的DFS和OS均明显低于低表达者；NQO1高表达是宫颈癌患者预后不良的独立风险因素。结论 NQO1高表达可能是评估宫颈癌预后不良的生物学指标。
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大鼠创伤性脑损伤后Nrf2通路相关因子的表达
目的 观察大鼠创伤性脑损伤后脑组织内核因子E2相关性因子2(Nrf2)及该通路下游分子血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO1)的表达.方法 采用改良Feeney自由落体模型制作大鼠脑外伤模型,对照组仅开骨窗不制作脑外伤.采用Western Blot法检测脑外伤24h后损伤灶周围脑组织细胞核内Nrf2蛋白含量,RT-PCR法检测HO-1 mRNA、NQO1mRNA水平.结果 脑外伤后脑组织细胞核内Nrf2蛋白含量显著增加,HO-1 mRNA、NQO1 mRNA水平亦明显增加(均P＜0.01).结论 脑外伤后脑组织内Nrf2通路被激活.
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三阴型乳腺癌中NQO1蛋白过表达的临床病理意义
目的 探讨醌氧化还原酶[NAD (P) H:quinone oxidoreductase-1,NQO1]在三阴型乳腺癌(triple-negative breast cancer,TNBC)中过表达的临床病理意义.方法 应用免疫荧光染色法观察NQO1蛋白在MDA-MB-468细胞中的表达定位,并应用免疫组化SP两步法检测NQO1蛋白在87例TNBC组织、45例导管内原位癌(ductal carcinoma in situ,DCIS)组织以及36例癌旁非瘤乳腺上皮组织中的表达,同时分析其过表达与TNBC临床病理特征间的关系.结果 NQO1蛋白主要表达于TNBC细胞胞质中.在TNBC组织中,NQO1蛋白的阳性率和强阳性率分别为75.9％ (66/87)和62.1％ (54/87),显著高于DCIS组织和癌旁非瘤乳腺上皮组织(P均＜0.01).NQO1蛋白表达水平与TNBC患者的临床分期和淋巴结转移情况密切相关(P均＜0.05),但与患者年龄、绝经情况、肿瘤大小及组织分化程度无关(P均＞0.05).结论 NQO1蛋白在TNBC组织中明显高表达,其表达水平与TNBC患者预后密切相关,有望成为TNBC治疗的新分子靶标.
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千金藤碱对结肠癌细胞5-氟尿嘧啶耐药性的逆转作用和对HO-1和NQO1表达的影响
目的:探讨千金藤碱(Cepharanthine,CEP)逆转人结肠癌耐药细胞株Lovo/5-FU对5-氟尿嘧啶(5-fluorouracil,5-FU)的耐药性以及对HO-1和NQO1表达的影响.方法:采用药物浓度梯度递增法诱导建立结肠癌耐药细胞亚系LoVo/5-FU;用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测千金藤碱和化疗药物对结肠癌细胞的细胞毒性；RT-PCR和Western blot技术检测NQO1和HO-1基因的mRNA和蛋白表达水平.结果:LoVo/5-FU细胞对包括5-FU在内的4种化疗药物产生耐药性,其中对5-FU耐药性高,是LoVo细胞的18.82倍；千金藤碱对LoVo和LoVo/5-FU细胞增殖均有抑制作用,其浓度超过20-25 μg·mL-1时为明显,但是对2种细胞的抑制效果无明显差别(P＞0.05)；千金藤碱(2.5-10.0 μg·mL-1)可降低LoVo/5-FU细胞5-FU的IC50值(P＜0.05-0.01),在此浓度范围内,IC50值降低的程度与剂量成正相关；LoVo/5-FU细胞中HO-1和NQO1的mRNA和蛋白表达水平明显高于LoVo细胞(P＜0.05-0.01),10.0 μg·mL-1千金藤碱与5-FU联合处理后,LoVo/5-FU细胞中两个基因的表达水平明显降低(P ＜0.05-0.01).结论:千金藤碱可抑制结肠癌细胞增殖,增加结肠癌耐药细胞株Lovo/5-FU对5-FU的敏感性,原因可能与其抑制结肠癌细胞中HO-1和NQO1的表达水平有关.
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RNAi沉默Nrf2基因增强煤焦沥青烟提取物对BEAS-2B细胞的毒性作用
目的:探讨RNA干扰(RNAi)技术沉默Nrf2基因对煤焦沥青烟提取物(CTPE)致人支气管上皮细胞(BEAS-2B)发生恶性转化过程中的作用,为肺癌的发生机制提供线索.方法:应用RNAi技术建立Nrf2基因沉默的BEAS-2B细胞稳定表达株;设立二甲基亚砜(DMSO)阴性对照组、苯并(a)芘[B(a)P]阳性对照组、CTPE组、RNAi组;采用软琼脂克隆形成实验分析细胞恶变情况;采用RT-PCR法检测Nrf2和NQO1 mRNA的表达;Western blot法检测Nrf2和NQO1蛋白的表达.结果:20代以后,B(a)P组、CTPE组和RNAi组的克隆形成率高于DMSO组(P＜0.001);而RNAi组的克隆形成率高于B(a)P组和CTPE组(P＜0.001).B(a)P组和CTPE组Nrf2 mRNA和蛋白表达水平均较DMSO组增加(P ＜0.001),B(a)P组、CTPE组和RNAi组NQO1 mRNA和蛋白水平均较DMSO组上调,RNAi组的表达量低于B(a)P组和CTPE组(P ＜0.001);诱导后(CTPE组)第10代、20代、30代细胞中Nrf2与NQO1的蛋白表达呈正相关(r=0.913,P＜0.001).结论:Nrf2可能通过上调NQO1的表达对抗CTPE对BEAS-2B细胞的毒性作用从而抑制细胞恶化;Nrf2和NQO1在BEAS-2B细胞癌前病变阶段已呈现较明显表达,这可能有助于接触CTPE高危人群罹患肺癌的预警及筛查.
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Sulforaphane Protects Astrocytes Against Oxidative Stress and Delayed Death Caused by Oxygen and Glucose Deprivation
氧化应激是缺血再灌注后星形胶质细胞损伤和死亡的重要分子机制之一,可能成为有效的干预靶点.下述治疗策略可减轻缺血再灌注条件下产生的多种反应性氮氧化合物损伤.这种方法可通过使用化学试剂或适当条件促进转录活化因子NRF2从细胞浆转入细胞核,并与抗氧化基因反应位点结合,来诱导缺血再灌注后损伤细胞的Ⅱ期基因反应.本研究将验证如下假说:NRF2基因表达通路激活剂sulforaphane能对体外无氧无糖环境处理的培养皮质星形胶质细胞起神经保护作用.将皮质星形胶质细胞暴露于无氧无糖环境(OGD)4 h,于干预前48 h或干预后给予5 μM sulforaphane(NRF2基因表达通路激活剂)培养48 h ,两种培育条件下细胞死亡均明显减少.免疫细胞化学结果表明干预前给予sulforaphane处理,细胞中DNA/RNA氧化标志物8-hydroxy-2-deoxyguanosine的表达在恢复给氧4 h后降低,两种培育条件下胞浆内及胞核内NRF2的免疫反应均增强且NQO1(NRF2转录活化基因产物)的表达和酶活性均增强.本研究提示sulforaphane可通过激活NRF2抗氧化基因表达通路,减少体外缺氧再灌注后星形胶质细胞的死亡.
