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异黄酮对前列腺癌细胞及PTEN基因的影响
目的通过大豆异黄酮抑制前列腺癌PC-3和LNCaP细胞生长和相关基因表达的影响,探讨大豆异黄酮类抑制前列腺癌的机制.方法对染料木黄酮和大豆甙元作用后的雄激素非依赖型前列腺癌(PC-3)、雄激素依赖型前列腺癌LNCaP细胞的存活率、细胞毒作用、细胞周期和PTEN基因的mRNA表达等进行了研究.结果染料木黄酮和大豆甙元对PC-3、LNCaP细胞抑制效应具有时间和剂量依赖性,具有诱导凋亡和引起坏死效应;染料木黄酮能诱导PC-3和LNCaP细胞的(PTEN)表达,而大豆甙元只能诱导LNCaP细胞PTEN表达.结论PTEN基因表达的变化可能在染料木黄酮和大豆甙元抑制PC-3和LNCaP细胞中具有重要的意义.染料木黄酮和大豆甙元抑制PC-3和LNCaP细胞可能存在多种作用途径.
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DAB2IP表达载体的构建及其对前列腺癌细胞LNCaP DNA合成及凋亡的影响
目的 构建表达载体pEGFP-N1-DAB2IP,观察DAB2IP在前列腺癌细胞LNCaP中高表达后对细胞凋亡及DNA合成的影响.方法 PCR扩增DAB2IP基因全长,经EcoR Ⅰ和Sal Ⅰ双酶切后T4 DNA连接酶连接,DH5α转化,用酶切及测序签定来确定构建的质粒正确.用对照载体pEGFP-N1和pEGFP-N1-DAB2IP转染前列腺癌细胞LNCaP,荧光显微镜下观察转染效率,Western blot检测DAB2IP蛋白的表达,应用BrdU/PI掺入法检测DAB2IP对细胞DNA合成的影响,应用Annexin V-FITC/PI双染法检测两组细胞凋亡情况.结果 pEGFP-N1-DAB2IP表达载体经酶切和测序鉴定正确,并成功转染LNCaP细胞,Western blot显示转染后DAB2IP的蛋白表达水平明显升高.BrdU/PI掺入法检测:pEGFP-N1组BrdU+细胞比例:0.66±6％,pEGFP-N1-DAB2IP组BrdU+细胞比例:0.45±3％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05),提示DAB2IP能抑制LNCaP细胞的DNA合成.细胞凋亡检测:pEGFP-N1组凋亡细胞比例:7.44±0.68％,pEGFP-N1-DAB2IP组:17.98±1.5％,两组比较差异有统计学意义(P＜0.05),提示DAB2IP能诱导前列腺癌细胞LNCaP的凋亡.结论成功构建了表达载体pEGFP-N1-DAB2IP,并在前列腺癌细胞LNCaP中成功高表达DAB2IP,DAB2IP高表达后能抑制LNCaP DNA合成并诱导细胞的凋亡.
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双氢睾酮与比鲁卡胺对前列腺癌LNCaP细胞系HMGN5基因和AR基因转录和表达的影响
目的 探讨双氢睾酮(DHT)对前列腺癌LNCaP细胞系HMGN5基因和AR基因转录和表达的影响.方法 用添加10%碳吸附胎牛血清的RPMI-1640(无酚红)培养基培养LNCaP细胞系24 h后,加入不同浓度DHT(0、0.1、1、10、50、100 nmol/L)和比卡鲁胺(Casodex)(20 μmol/L).定量反转录qRT-PCR检测LNCaP细胞中HMGN5和AR mRNA水平,免疫印迹法检测HMGN5和AR蛋白表达情况.结果用不同浓度DHT和Casodex培养激素依赖性前列腺LNCaP细胞系24 h后,随着DHT浓度升高,LNCaP细胞中HMGN5和AR mRNA水平表达增高,组间差异有统计学意义.AR蛋白表达增高,HMGN5蛋白表达无明显差异.结论 DHT增强了雄激素依赖性前列腺癌LNCaP细胞系中HMGN5 mRNA的表达,这种作用可以被比卡鲁胺减弱.
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小檗胺和氟他胺联合应用对前列腺癌LNCaP细胞株的抑制作用
增殖抑制作用具有协同性.
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SATB1在人不同前列腺癌细胞系中表达的实验研究
目的:探讨SATB1与前列腺癌增殖及侵袭发生的关系.方法:体外培养前列腺癌细胞系(LNCaP、PC3、DU145),MMT法检测其增殖能力;Tanswell细胞侵袭实验检测其侵袭能力;RT-PCR检测其SATB1 mRNA的表达情况;Western blot检测其SATB1蛋白质的表达.结果:前列腺癌细胞PC3和DU145的增值能力及侵袭能力比LNCaP强(P＜0.01),PC3和DU145细胞中SATB1 mRNA及蛋白质表达水平均显著高于LNCaP细胞(P＜0.01).结论:SATB1在前列腺癌表达水平可能与前列腺癌的增殖和侵袭正相关.
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依立雄胺对前列腺癌细胞(LNCaP)前列腺特异性抗原和Bcl-2蛋白体外表达的抑制作用
目的为研究依立雄胺治疗前列腺癌的可能性及可能机制,探讨依立雄胺体外对人激素依赖型前列腺癌细胞(LNCaP)生长及前列腺特异性抗原(PSA)与Bcl-2蛋白表达的作用.方法用5,15和45 μmol*L-1的依立雄胺作用LNCaP细胞3 d或7 d后,相差显微镜进行细胞形态学观察;台盼蓝染色活细胞计数,绘制7 d的生长曲线;应用流式细胞仪分析依立雄胺对LNCaP细胞凋亡的影响;应用免疫组化ABC比较经依立雄胺作用后LNCaP细胞PSA与Bcl-2蛋白的表达强度.结果 45 μmol*L-1的依立雄胺作用LNCaP细胞3 d后,可使其明显的皱缩脱壁,部分细胞膜破裂.在5,15和45 μmol*L-1的依立雄胺作用7 d后,可明显抑制LNCaP细胞的生长,抑制率分别达40.0%,47.4%和54.3%;流式细胞仪分析显示上述浓度的依立雄胺可诱导细胞凋亡,凋亡率分别为3.5%,15.8%和25.0%,而对照组为2.2%;免疫组化分析表明依立雄胺可降低LNCaP细胞PSA和Bcl-2蛋白的表达.结论在上述浓度下依立雄胺可特异性的抑制LNCaP细胞的生长和PSA与Bcl-2蛋白的表达而诱导细胞凋亡.
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阳离子脂质体-小干扰RNA复合物的处方优化及其治疗前列腺癌的体外研究
目的 研究小干扰RNA(siRNA)的新型阳离子脂质体的制备,考察此脂质体-小干扰RNA复合物对LNCap细胞中靶mRNA的沉默效应.方法 采用逆向蒸发法制备新型阳离子脂质体,并加入鱼精蛋白和小牛胸腺DNA以增加其对小干扰RNA的压缩,评价其理化性质;以LNCap细胞为模型,以lipofectamine 2000作为阳性对照,用RT-PCR方法研究脂质体-小干扰RNA复合物对前列腺癌细胞中靶基因Plk-1的沉默效应.结果 制备的脂质体(2,3-二油氧基丙基)三甲基氯化铵胆固醇的佳比例为3∶1,粒径为(117±4.3) nm,Zeta电位为(47±3.6) mV;新型阳离子脂质体小干扰RNA复合物的入胞效率显著提高,荧光显微镜显示LNCap细胞内小干扰RNA含量明显升高.结论 本实验所制备的阳离子脂质体具有较高转染效率,脂质体-小干扰RNA复合物的沉默效果显著.此新型阳离子脂质体有望成为小干扰RNA等基因治疗药物的高效传递系统.
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非那雄胺抑制前列腺癌细胞LNCaP增殖的基因芯片观察
目的探讨非那雄胺抑制前列腺癌细胞增殖的分子机制,筛选特异性的治疗靶点.方法利用基因芯片技术检测非那雄胺作用前列腺癌细胞株前后LNCaP差异表达的基因.结果非那雄胺能够显著抑制前列腺癌细胞株LNCaP的增殖,在96条基因中受非那雄胺作用有差异表达的基因有29条,其中表达上调的基因有11条,下调的基因有18条.结论非那雄胺抑制LNCaP增殖可能涉及多基因、多通路的共同作用.
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雄激素受体抑制剂对大鼠成骨细胞的作用分析
目的 分析雄激素受体抑制剂对大鼠成骨细胞的作用.方法 采用LNCaP人前列腺癌细胞建立原发性裸鼠前列腺癌模型,其中实验组21只应用雄性激素受体抑制剂——比卡鲁胺进行饲喂给药,对照组7只注射生理盐水,另选择未荷瘤裸鼠6只为空白组,比较给药前后3组裸鼠血清睾酮、雄激素、骨源性碱性磷酸酶(BALP)和抗酒石酸酸性磷酸酶5b(TRAP-5b)水平.结果 LNCaP人前列腺癌细胞荷瘤小鼠及空白组裸鼠生长情况均正常,精神状态较好,均无实验过程中死亡.于实验组比卡鲁胺给药1周后,3组各项指标比较差异均无统计学意义(P>0.05);比卡鲁胺给药4周后,实验组睾酮水平明显低于对照组和空白组(P<0.05),雌激素水平高于对照组和空白组(P<0.05),3组BALP和TRAP-56比较差异均无统计学意义(P>0.05).结论 雄性激素受体抑制剂可以治疗及缓解前列腺癌症状,但同时可引起患者骨质疏松的不良反应,应合理适量使用.
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维生素E琥珀酸酯对顺铂抑制LNCaP细胞PSA分泌和诱导细胞凋亡的影响
[目的]从细胞水平研究维生素E琥珀酸酯(VES)对顺铂(CP)引起的前列腺癌(LNCaP)细胞的增殖抑制和凋亡诱导作用,并分析其对前列腺特异性抗原(PSA)表达的影响.[方法]VES、CP及二者联合分别作用LNCaP 24 h或48 h,采用MTT法测定其对细胞生长的抑制作用,用荧光染色和透射电镜等形态学方法检测细胞凋亡,并用酶免疫法检测前列腺癌细胞特异性抗原(PSA)的表达情况.[结果]CP、VES和二者合用的IC50 分别为1.92 mg·L-1、16.7 mg·L-1 和1.02 mg·L-1;CP 4 mg·L-1、VES 25 mg·L-1和二者合用的凋亡率分别为37.2 %、57.4%和77.8%;VES 可以加强CP抑制LNCaP细胞分泌PSA的作用.[结论]VES可增强CP抗LNCaP细胞的作用.
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雄激素非依赖性前列腺癌LNCaP-AI细胞亚系模型的建立
目的 利用雄激素递减法建立雄激素非依赖性前列腺癌(AIPC)细胞亚系模型LNCaP-AI.方法 利用活性炭/葡聚糖处理的血清模拟去雄激素环境培养LNCaP细胞,逐渐递减培养基中雄激素10 d,然后在无雄激素环境中继续培养6个月,培养出能够在无雄激素环境中生长的LNCaP-AI细胞亚系.采用MTT和ELISA法检测LNCaP-AI细胞在去雄激素环境下的增殖能力和前列腺特异性抗原(PSA)的水平.结果 LNCaP细胞在去雄激素环境培养初期生长缓慢,细胞形态呈神经内分泌样改变,经过6个月的连续无雄激素培养,细胞恢复以前的形态和生长.MTT检测表明LNCaP-AI细胞能够在去雄激素环境中生长,通过ELISA检测PSA的分泌提示LNCaP-AI细胞能够在去雄激素环境中恢复分泌PSA的功能.结论 激素递减法成功的建立了AIPC细胞亚系模型LNCaP-AI,利用该模型能够模拟前列腺癌由雄激素依赖发展为雄激素非依赖的过程.
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PPARγ激动剂罗格列酮诱导人前列腺癌细胞系LNCAP凋亡的作用
目的:探讨罗格列酮(ROZ)对体外培养细胞系LNCAP增殖及凋亡的作用.方法:20、50、100 μmol/LROZ作用LNCAP细胞24 h、48 h、72 h后,MTT法检测ROZ对LNCAP细胞生长的影响.采用末端脱氧核苷酸转移酶原位标记(TUNEL法)和流式细胞术检测细胞凋亡情况.Western Blot检测LNCAP细胞中Casepase-3表达水平的变化.结果:ROZ(20μmol/L至100μmol/L)对前列腺癌细胞有显著的增殖抑制作用,以100μmol/L浓度为明显.ROZ(100μmol/L)作用72h后高增殖抑制率达78.58%.流式细胞仪检测结果显示,LNCAP细胞凋亡数目随药物浓度的增加呈递增趋势;100μmol/LROZ作用72h后凋亡细胞数达48.11%.与此一致,TUNEL染色阳性细胞数目在ROZ处理组显著增多,Western Blot检测显示,ROZ显著增加LNCAP细胞中Caspase-3蛋白表达水平.结论:ROZ在体外对前列腺癌细胞系LNCAP有明显的增殖抑制及促进凋亡作用,有望成为前列腺癌患者新的治疗方法.
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α-维生素E的派生物,RRR-α-tocopheryloxybutyric acid对前列腺癌细胞的生长抑制作用
Aim:To investigate the activity of RRR-α-tocopheryloxybutyric acid (TOB), an ether analog of RRR-α-tocopheryl succinate (VES), in prostate cancer cells. Methods: VES and TOB were used to treat prostate cancer LNCaP, PC3,and 22Rv1 cells and primary-cultured prostate fibroblasts. The proliferation rates were determined by MTT assay,the cell viabilities were determined by trypan blue exclusion assay, and the cell deaths were evaluated by using Cell Death Detection ELISA kit. The protein expression levels were determined by Western blot analysis. Results: The MTT growth assay demonstrated that TOB could effectively suppress the proliferation of prostate cancer cells, but not normal prostate fibroblasts. Mechanism dissections revealed that TOB reduced cell viability and induced apoptosis in prostate cancer cells similar to VES. In addition, both TOB and VES suppressed prostate-specific antigen (PSA) at the transcriptional level leading to reduced PSA protein expression. Furthermore, vitamin D receptor (VDR) expression increased after the addition of TOB. Conclusion: Our data suggests that the VES derivative, TOB, is effective in inhibiting prostate cancer cell proliferation, suggesting that TOB could be used for both chemopreventive and chemotherapeutic purposes in the future.
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低剂量阿霉素联合TRAIL诱导人前列腺癌细胞LNCAP凋亡的实验研究
亡的敏感性.结论 低剂量阿霉素(0.86 μmol/L)可以增强TRAIL对LNCAP细胞的凋亡诱导效应.
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睾酮对前列腺癌LNCaP细胞雄激素反应性基因表达的影响
目的检测睾酮作用下雄激素依赖性前列腺癌细胞LNCaP中雄激素反应性基因(ARGs)的表达情况.方法检测不同浓度的睾酮对雄激素依赖性前列腺癌细胞LNCaP增殖的影响,采用基因芯片确定LNCaP细胞中受睾酮调控的基因.结果低浓度的睾酮促进LNCaP细胞的生长,并呈剂量依赖性,相反较高浓度的睾酮能够抑制LNCaP的增殖.在96个与前列腺癌有关的基因中,受睾酮刺激有19个基因表达上调,8个基因表达下调.结论睾酮诱导的雄激素反应性基因在前列腺癌的发展中起非常重要的作用,基因芯片有助于高通量分析基因表达水平的变化,为前列腺癌的研究提供了非常理想的工具.
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核酸适配体修饰的前列腺癌靶向载体的体内外评价
目的:构建具有前列腺癌靶向作用纳米基因载体聚酰氨胺-聚乙二醇-适配体(PAMAM-PEG-A10-3.2),考察靶向载体合成效果,携载基因能力,入细胞机制,体内外靶向等特性.方法:用核磁共振(NMR)鉴定PAMAM-PEG-A10-3.2结构;激光粒度仪测定复合物粒径和zeta电位;透射电镜(TEM)观察纳米复合物形态;竞争性抑制实验用于考察纳米复合物入细胞机制;pEGFP-N2-luc质粒(pDNA)考察纳米复合物体外靶向性;LNCaP裸鼠移植肿瘤小鼠,考察纳米复合物体内靶向性.结果:结果显示,PAMAM-PEG-A10-3.2合成成功,可以包裹NC-miRNA,形成稳定的纳米复合物.TEM见纳米复合物成球形.靶向载体主要通过受体介导内吞入胞.体外基因转染实验显示,靶向纳米复合物可以增加对前列腺癌细胞表面特异性膜抗原(PSMA)高表达细胞(LNCaP) 的转染效率,LNCaP裸鼠移植肿瘤小鼠活体成像显示,靶向载体具有良好的前列腺癌靶向性.结论:PAMAM-PEG-A10-3.2对PSMA高表达的前列腺癌细胞具有良好的体内外靶向性.
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雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI的建立
目的:建立雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI.方法:长期在去雄激素的血清环境下培养雄激素依赖性LNCaP细胞,培养出能够适直无雄激素环境的LNCaP-AI细胞亚系.MTT、RT-PCR、免疫荧光方法观察LNCaP-AI细胞在无雄激素环境下的增殖能力和表达及分泌前列腺特异性抗原(PSA)的水平.结果:LNCaP前列腺癌细胞在无雄激素中培养3个月后逐渐适应了无雄激素的环境,成为雄激素非依赖的LNCaP-AI细胞亚系.LNCaP-AI细胞在无雄激素的环境下迅速增殖,能够分泌PSA,但其PSA mRNA的表达水平是正常生长LNCaP细胞的44%.结论:成功构建雄激素非依赖性前列腺癌细胞亚系模型LNCaP-AI,可以模拟前列腺癌由雄激素依赖发展为雄激素非依赖的过程.
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苦参碱对前列腺癌细胞增殖及雄激素受体功能的抑制作用
目的:探讨苦参碱(matrine)对雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP)的增殖及雄激素受体(androgen receptor,AR)表达的抑制作用. 方法:分别用0.5、1.0、1.5、2.0、3.0 g/L浓度的苦参碱作用于LNCaP细胞12、24、36 h后MTT法检测细胞生长活性;台盼蓝拒染法测定细胞生长曲线;24 h后流式细胞仪测定细胞周期变化;24 h后Western印迹法检测细胞内AR的表达. 结果:苦参碱能抑制LNCaP细胞的生长,呈剂量与时间依赖性,不同浓度苦参碱组之间与不同作用时间组之间的差异均有显著性意义(P＜0.01).苦参碱诱导LNCaP细胞出现剂量依赖性G2/M期阻滞(P＜0.01);细胞内AR的表达随苦参碱剂量依赖性减少(P＜0.01). 结论:苦参碱通过下调细胞内AR表达和阻滞细胞周期进展来抑制LNCaP细胞的体外生长.
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姜黄素对雄激素依赖性前列腺癌细胞的诱导凋亡作用
目的:探讨姜黄素对雄激素依赖性前列腺癌细胞株(LNCaP)的诱导凋亡作用. 方法:分别用10、25、50、75、100 μmol/L浓度的姜黄素作用于LNCaP细胞,5、12、24 h后MTT法检测细胞生长活性;24 h后流式细胞仪测定细胞周期及细胞凋亡的变化,透射电镜观察细胞超微结构变化;5 h后Western印迹法检测细胞内IκBα的表达. 结果:姜黄素能显著抑制LNCaP细胞的生长,呈剂量与时间依赖性,不同浓度姜黄素组之间与不同作用时间组之间的差异均有显著性意义(P均<0.05).姜黄素诱导LNCaP细胞出现剂量依赖性G2/M期阻滞(P<0.01),各浓度组凋亡细胞比例均显著高于空白对照组(P均<0.05),差异有显著性意义;姜黄素作用24 h后LNCaP细胞出现凋亡的形态学改变;不同浓度姜黄素作用后,LNCaP细胞内IκBα的表达无变化. 结论:姜黄素能显著抑制LNCaP细胞的体外生长,并促进其凋亡.
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罗默碱抗前列腺癌活性的实验研究
目的:构建体外、体内模型,探讨罗默碱抗前列腺癌活性. 方法:检测罗默碱对多种前列腺癌细胞(DU145、LNCaP、PC-3和22RV1)增殖、凋亡和迁移的影响,筛选敏感肿瘤细胞系,构建裸鼠荷瘤模型,进一步验证罗默碱的体内抗肿瘤药效. 结果:罗默碱对DU145、LNCaP、PC-3和22RV1细胞增殖和迁移均具有不同程度的抑制作用,对其细胞凋亡亦具有不同程度的诱导作用,其中以LNCaP细胞为敏感.裸鼠荷LNCaP肿瘤模型中,罗默碱单独干预组肿瘤重量[(1.99±0.95)g]显著低于对照组[(2.95±1.04)g],P＜0.01;而高剂量罗默碱(30 mg/kg)和紫杉醇联合干预组肿瘤重量[(0.90±0.16)g]均显著小于其他3组(P＜0.05或P＜0.01).罗默碱单独干预组裸鼠的心脏脏器系数(0.58 ±0.06)、肝脏脏器系数(6.20±0.42)和肾脏脏器系数(1.49±0.33)均不同程度低于紫杉醇单独干预组(0.66 ±0.04、6.99 ±0.72和1.95 ±0.34,P均＜0.05),脾脏脏器系数(0.54±0.11)和胸腺脏器系数(0.06 ±0.01)显著高于紫杉醇单独干预组(0.41 ±0.09、0.05 ±0.01,P均＜0.05).病理结果显示罗默碱干预组及联合给药组中肿瘤恶变程度和肿瘤转移程度低于对照组,罗默碱干预组及联合给药组中小鼠内脏损伤明显小于紫杉醇组水平. 结论:罗默碱发挥一定的抗前列腺肿瘤功效,同时联合化疗药给药时可以降低其毒性.
