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铁皮石斛制剂免疫调节作用研究
铁皮石斛(Dendrobium officinale)为兰科石斛属多年生附生草本植物铁皮石斛的干燥茎,因表皮呈铁绿色而得名,主要分布于西南和江南各省.是《中华人民共和国药典》中被收载的5种石斛属植物之一.其具有益胃生津、滋阴清热之功效.以铁皮石斛为主(其主要有效成分为铁皮石斛多糖),以红参、麦冬、五味子为副制成水煎浓缩制剂,通过细胞免疫、体液免疫、巨噬细胞吞噬能力及NK细胞活性实验,探索其免疫调节作用机制,为铁皮石斛的进一步开发利用提供依据.
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MTS-PMS法测定脾细胞增殖及NK细胞活性的实验条件优化
四唑蓝比色法(MTT法)是检测小鼠脾淋巴细胞增殖实验比较常用的方法.但采用该方法检测悬浮生长细胞增殖活性时,取出培养上清液时容易将培养的细胞一同去除,导致误差,对形成的甲瓒产物需加入二甲基亚砜(DMSO)溶解后方可测定,操作步骤不易执行,造成实验结果不稳定,实验耗时长.MTS-PMS法检测细胞生长活力是美国学者Buttke[1]于1993年建立的.MTS [3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-5(3-羧甲酯基l)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑,内盐]是新合成的四唑氮衍生物,和MTT属于同类物质,其应用原理也相同.将MTS-PMS直接加入板孔的培养基中,孵育一段时间后,吸光度值可用酶标仪直接测得[纠,因而减少了实验误差,提高了数据的稳定性.本实验拟采用MTS-PMS法,以小鼠淋巴瘤细胞(YAC-1)和小鼠肝癌细胞(H22)作为靶细胞,探讨测定NK细胞活性的佳实验条件,为NK细胞活性检测提供更为稳定的实验方法.
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菲克口服液抑制肿瘤作用的试验
利用食物中所含有的营养素和(或)生理活性物质来抑制肿瘤的生长,减轻患者的痛苦,是目前众多营养学家及毒理学家研究的热点.菲克口服液就是一种以无花果水提取液为主要成分的饮品.为探讨其抑制肿瘤作用,我们进行了部分的抗肿瘤作用的试验研究.
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硫酸氨基葡萄糖对正常小鼠免疫功能的影响
目的 了解硫酸氨基葡萄糖对正常小鼠免疫功能的影响.方法 将ICR雌性小鼠按体重随机分成低、中、高(150、300、900mg/kg bw)3个剂量组和对照组.连续灌胃30天后,进行脾指数、胸腺指数、细胞免疫、体液免疫、NK细胞、单核-巨噬细胞及NK细胞活性的测定.结果高剂量组小鼠的胸腺指数显著高于对照组(P<0.05);中、高剂量组小鼠迟发型超敏反应(DTH)应激能力、血清溶血素水平及抗体生成能力明显高于对照组(P<0.05);高剂量组小鼠的NK细胞的活性显著高于对照组(P<0.05);硫酸氨基葡萄糖对小鼠脾淋巴细胞的增殖转化能力、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率、碳廓清吞噬指数均无影响.结论 硫酸氨基葡萄糖从细胞免疫功能、体液免疫功能及NK细胞活性方面能增强正常小鼠的免疫功能.
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31例乳腺癌患者外周血T淋巴细胞及NK活性检测分析
目的:本实验旨在比较乳腺癌患者细胞免疫功能与正常人群的差异,以了解细胞免疫功能对肿瘤患者治疗及预后的影响.方法:对31例乳腺癌患者外周血T淋巴细胞及NK活性进行检测,并测定了部分患者T淋巴细胞亚群变化,比较其与正常人群对照组的差别.结果:肿瘤患者二项指标均低于正常对照组,CD3、CD4阳性细胞数减少,CD8数增加,Th/Ts比例下降或倒置.结论:肿瘤患者均存在不同程度的免疫抑制或功能缺陷.
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枸杞籽油和亚麻籽油混合物对小鼠增强免疫功能的影响
目的 研究枸杞籽油和亚麻籽油混合物对小鼠免疫力的增强作用.方法 选用200只健康ICR小鼠随机分为5大组,每大组40只小鼠按体质量随机分为4小组,即枸杞籽油和亚麻籽油混合物低、中、高剂量组(0.25、0.50、1.50 g/kg BW)和对照组.连续经口灌胃30天后,检测枸杞籽油和亚麻籽油混合物对小鼠免疫器官脏体比、细胞免疫、体液免疫、单核-巨噬细胞吞噬功能和NK细胞活性等指标的影响.结果 与对照组比较,中、高剂量组能明显提高小鼠迟发型变态反应能力及NK细胞活性,差异有统计学意义(P＜0.05),高剂量组能明显提高血清半数溶血值、抗体生成细胞数,差异有统计学意义(P＜0.05).各剂量组对小鼠胸腺/体质量比值、脾脏/体质量比值、单核-巨噬细胞碳廓清能力、淋巴细胞转化能力及巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力均无明显影响,差异无统计学意义(P＞0.05).结论 枸杞籽油和亚麻籽油混合物具有增强小鼠免疫力的功能.
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芪苓解浊颗粒剂治疗解脲支原体感染及其对机体外周血NK细胞活性的影响
非淋菌性尿道炎(NGU)是当前为常见的性传播疾病之一,其主要由沙眼衣原体引起,其次是支原体[1].其中,支原体以解脲支原体(ureaplasma urealyticum,UU)的分离率高,占病例总数的20%～40%[2],而且与泌尿生殖系统疾病密切相关.
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穴位埋线配合隔姜灸治疗脾肾阳虚型慢性疲劳综合征的疗效分析及其对T淋巴细胞亚群和NK细胞活性的影响
目的:观察穴位埋线配合隔姜灸与常规针刺对比治疗脾肾阳虚型慢性疲劳综合征的临床疗效差异及其对T淋巴细胞亚群和自然杀伤细胞(NK)细胞活性的影响.方法:将60例脾肾阳虚型慢性疲劳综合征患者随机分为埋线隔姜灸组与常规针刺组,每组30例.埋线隔姜灸组采用穴位埋线配合隔姜灸治疗,穴位埋线穴取关元、肾俞、脾俞、足三里、气海,每周治疗1次;隔姜灸穴取关元、气海、足三里,每3天治疗1次,均连续1个月.常规针刺组采用常规针刺,穴取关元、肾俞、脾俞、足三里、气海,每天治疗1次,每周治疗6次,休息1d,连续1个月.观察两组患者治疗前后的临床症状积分、疲劳量表-14积分、疲劳评定量表积分、实验室指标及临床疗效.结果:(1)两组治疗后临床症状积分、疲劳量表-14积分和疲劳评定量表积分均较本组治疗前降低,差异均有统计学意义(均P<0.05);治疗后,埋线隔姜灸组临床症状积分、疲劳量表-14积分和疲劳评定量表积分均低于常规针刺组,差异均有统计学意义(均P<0.05);(2)两组治疗后血清CD+4/CD+8、NK%、CD+3%、CD+4%均高于治疗前,差异均有统计学意义(均P<0.05);治疗后埋线隔姜灸组血清CD+4/CD+8 、CD+3%、CD+4%均高于常规针刺组,差异均有统计学意义(均P<0.05);(3)治疗后,埋线隔姜灸组总有效率为96.7%(29/30),常规针刺组总有效率为93.3%(28/30),差异无统计学意义(P>0.05).结论:穴位埋线配合隔姜灸能够有效改善症状,调节脾肾阳虚型慢性疲劳综合征患者T淋巴细胞亚群水平及NK细胞活性,是治疗脾肾阳虚型慢性疲劳综合征的有效方法.
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益气生津方对大鼠免疫机能的影响
目的:研究益气生津方对正常和运动性疲劳大鼠免疫机能的影响.方法:采用递增时间游泳训练4周、建立Wistar大鼠运动疲劳模型,观察低、中、高3个不同剂量的益气生津方对正常和运动疲劳大鼠CD4、CD8、IL-1、IL-6IgG、IgA和IgM水平、NK细胞活性的影响.结果:益气生津方可显著提高CD4、IgG、IgA和IgM水平、NK细胞活性,并降低运动疲劳所导致的IL-6应激性的升高.结论:益气生津方可以改善大鼠的免疫机能,并对运动疲劳大鼠的免疫应激有保护作用.
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中药制剂及外源性细胞因子对化疗损伤小鼠细胞因子及NK细胞活性的影响
目的研究人参养荣片组方、单味药(人参、当归、黄芪、白术)及单独注射G-CSF对化疗损伤小鼠细胞因子及NK细胞活性的影响.方法酶标双抗体夹心法测定用药后各组小鼠血清中细胞因子(IL-6、IL-12、EP0、G-CSF)含量;小鼠胸腺细胞增殖法(MTT法)测定血清及巨噬细胞培养上清中IL-1含量;NK细胞杀伤靶细胞K562(MTT法)测定NK细胞活性.结果人参可升高血清G-CSF、IL-12,当归可升高巨噬细胞培养上清IL-1及血清IL-12,二者均可增强NK活性;黄芪、白术均可使血清中IL-1、IL-6含量升高.人参养荣片可以将化疗损伤小鼠IL-1、IL-6、IL-12、EPO、G-CSF及NK细胞活性调整至正常水平,但不是单味药作用的累加.注射外源G-CSF 后G-CSF、IL-12、NK细胞活性略有升高,IL-1、IL-6、EP0的变化不明显.结论中草药拮抗化疗损伤可能是通过调节多种细胞因子实现的.
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流式细胞术检测NK细胞活性在获得性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症诊断中的应用
本研究目的旨在建立一种准确、稳定的NK细胞杀伤活性检测方法,应用于获得性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症诊断.21例疑似患者及20例健康对照者纳入本研究.根据HLH-2004标准将疑似患者分为确诊组和排除组,将pEGFP-NI质粒转染人NK细胞的天然靶细胞K562,经过G418筛选后进一步单克隆,得到稳定、均一表达绿色荧光蛋白的EGFP-K562细胞,将EGFP-K562细胞与人外周血单个核细胞按10:1的比例混合孵育2小时后,用碘化丙啶(PI)标记,用流式细胞仪分析呈红、绿色荧光的细胞数,后计算NK细胞的杀伤效率;同时采用LDH释放法测定外周血NK细胞对单纯K562细胞的杀伤活性,并进行比较.结果表明:获得了稳定表达绿色荧光蛋白的EGFP-K562细胞;流式细胞仪检测表明健康人NK细胞杀伤率与病人组之间存在明显差异,流式细胞仪技术检测NK细胞杀伤活性与传统LDH释放法检测NK细胞杀伤活性具有显著相关性.结论:EGFP-K562细胞株作为靶细胞用于流式细胞术检测NK细胞杀伤活性,无需预先染色和标记靶细胞,操作简便、省时、稳定、重复性高,可应广泛应用于获得性噬血细胞性淋巴组织细胞增多症诊断.
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免疫球蛋白样抑制性受体KIR基因与HLA-Cw的匹配对NK细胞活性的影响
本研究探索自然杀伤(natural killer,NK)细胞表面杀伤细胞免疫球蛋白样抑制性受体(killer immunoglobulin-like inhibition receptor,KIR)基因与HLA-Cw配体匹配对NK细胞活性的影响.对27名健康人取新鲜外周血20 ml,用NK细胞免疫磁珠分选试剂盒负向分选高纯度NK细胞.对30例初治确诊急性髓系白血病(AML)患者取新鲜骨髓液10 ml,分离单个核细胞作为靶细胞.流式细胞仪检测NK细胞CD158a,CD158b表达水平.取健康人和患者的外周血各2 ml,以PROTRANS法抽提DNA,采用序列特异性引物PCR-SSP分型技术分别检测HLA-Cw、KIR基因.MTT法检测KIR与HLA-Cw基因不同组合的NK细胞对AML患者白血病细胞的杀伤率.结果表明:分选后的NK细胞,纯度为(90.8±6.08)%.NK细胞KIR基因与靶细胞HLA-Cw等位基因的匹配数少则NK细胞的杀伤效应强,0个等位基因匹配的杀伤率为(50.66±8.40)%,1个匹配与2个匹配的杀伤率分别为(38.28±6.71)%,(19.74±4.15)%,(F=20.226,P<0.001).NK细胞的KIR表达水平与杀伤作用也有一定的联系(F=16.276,P值<0.001).结论:NK细胞对AML白血病细胞的杀伤作用与抑制性KIR/HLA-Cw的匹配数及KIR的表达相关,匹配越少、KIR表达越低,杀伤率越高.
关键词： 免疫球蛋白样抑制性受体 NK细胞活性 CD158 HLA-Cw -
NK细胞活性在诊断继发性噬血细胞综合征中的意义探讨
本研究探讨继发性噬血细胞综合征(hemophagocytic syndrome,HPS)患者外周血NK细胞活性水平及其在早期诊断中的意义.采用LDH释放法检测16例凝似HPS患者和25名正常健康人外周血NK细胞的活性,并将确诊继发性HPS患者的NK细胞活性与正常人NK细胞活性进行比较.结果表明:16例疑似HPS患者中有8例终确诊为继发性HPS,其NK细胞活性均明显低于正常对照组,两者相比差异有显著统计学意义(P＜0.001),且已确诊患者的NK细胞活性在疾病早期即出现异常.结论:NK细胞活性的检测对于HPS的早期诊断可能具有重要意义.
关键词： 继发性噬血细胞综合征 NK细胞活性 早期诊断 -
可溶性IL-2受体及NK细胞活性在噬血细胞性淋巴组织细胞增多症中的意义
本研究通过检测噬血细胞性淋巴组织细胞增多症(HLH)患者外周血中可溶性IL-2受体(sCD25)及NK细胞活性,探讨它们在HLH中的意义.应用酶联免疫吸附法检测20例HLH患者、15例正常对照者、20例急性髓系白血病(AML)患者及20例系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血血清sCD25水平；用流式细胞术CD107a标记法及传统的LDH释放法检测HLH组及正常对照组外周血NK细胞活性.结果显示:HLH组血清sCD25水平较正常对照组、AML组及SLE组均明显升高(P＜0.001)；HLH组NK细胞活性明显低于正常对照组(P＜0.05)；将流式细胞术CD107a标记法与传统的LDH释放法检测NK细胞活性进行相关分析,该两种检测方法之间具有显著相关性(r=0.73,P＜0.05).结论:血清sCD25及外周血NK细胞活性检测是HLH重要的辅助诊断指标,流式细胞术CD107a标记法检测NK细胞活性简单、稳定、重复性高,有助于HLH的临床诊断.
关键词： sCD25 NK细胞活性 噬血细胞性淋巴组织细胞增多症 -
曲马多和吗啡术后镇痛对肿瘤病人免疫功能的影响
目的:探讨曲马多、吗啡术后镇痛对肿瘤病人免疫功能的影响.方法:选取子宫颈癌病人30例,常规全麻下行子宫颈癌根治手术,术后随机分成两组(T组和M组),分别给予曲马多和吗啡进行术后镇痛,于术前、术毕给予镇痛药前和给予镇痛药2h后抽取病人静脉血测定血清T淋巴细胞增殖率、NK细胞活性及病人VAS评分.结果:两组病人均达到满意的镇痛效果,术毕两组病人T淋巴细胞增殖率均明显下降(P＜0.05),M组持续到术后2h,而T组则于术后2h恢复到术前水平,两组间有显著差异(P＜0.05).给予镇痛药2h后NK细胞活性,M组无明显变化而T组则有明显增高.结论:曲马多用于术后镇痛更有利于病人免疫功能的恢复.
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美洲大蠊提取物CⅡ-3对肝癌H22荷瘤小鼠作用研究
目的 美洲大蠊提取物CⅡ-3在体内外有抑制肿瘤生长和改善免疫功能的作用.本研究在前期研究的基础上观察CⅡ-3单药对比联合环磷酰胺(cycolophosphamide,CTX)对小鼠肝癌H22移植性实体瘤的治疗效果,探讨C Ⅱ-3在肿瘤治疗中的作用.方法 建立Balb/c小鼠H22腋下实体瘤模型,并将80只小鼠随机分为对照组、CTX组(20 mg/kg)、CTX +CⅡ-3联合给药组(CTX 20 mg/kg,CⅡ-3 50、100和200 mg/kg)、CⅡ-3给药组(50、100和200 mg/kg).连续给药12 d后,测定其抑瘤率脏器指数,外周血细胞数量,T、B淋巴细胞转化功能及NK细胞杀伤活性.结果 对照组的瘤块质量为(1.21±0.28) g,CTX组为(0.73±0.27) g,CTX联合C Ⅱ-3低、中、高剂量给药后的瘤块质量为(0.40±0.21)、(0.43±0.11)和(0.41±0.19) g,C Ⅱ-3低、中、高剂量组的瘤块质量分别为(0.93±0.39)、(0.94±0.31)和(0.96±0.16) g,与对照组和CTX组相比,联合给药组肿瘤生长速度明显减慢,差异有统计学意义,F=8.916,P<0.05.CTX组白细胞的数量为(1.56±0.64)×109 L-1,CTX联合C Ⅱ-3低剂量组为(4.47±0.91)×109 L-1,显著改善外周血象,F=2.476,P<0.05.对照组小鼠肝脏指数为(6.101±0.412) mg/10 g,CTX组为(5.112±0.463) mg/10 g,中剂量C Ⅱ-3联合CTX给药后肝脏指数可高达(5.882±0.548) mg/10 g,减轻了CTX对肝脏的损伤,F=4.225,P<0.01.对照组小鼠脾脏指数为(0.659±0.148) mg/10 g,CTX组的脾脏受到严重损伤,其指数为(0.314±0.092) mg/10g,联合给药后可以显著地减轻CTX对脾脏的损伤,其指数为(0.569±0.033) mg/10 g,F=5.667,P<0.05;对照组小鼠的胸腺指数为(0.060±0.018) mg/10 g,给予CTX后小鼠的脏器受到严重的损伤,胸腺指数为(0.024±0.004) mg/10 g,C Ⅱ-3联合CTX给药后胸腺指数为(0.056±0.014) mg/10 g,减轻了CTX对胸腺的损伤,对胸腺有一定的保护作用,F=4.729,P<0.05.荷瘤小鼠在给予CTX治疗后,T、B淋巴细胞的转化功能及NK细胞杀伤力显著地降低(P<0.05,P<0.01),C Ⅱ-3联合CTX可提高T、B淋巴细胞的转化功能及NK细胞杀伤力(P<0.05,P<0.01),从而增强机体的免疫功能.结论 C Ⅱ-3联合CTX治疗H22荷瘤小鼠可提高抑瘤率,具有提高CTX治疗效果的作用,其增效作用是通过提高T、B淋巴细胞的转化功能及NK细胞杀伤力实现的.除此之外C Ⅱ-3还具有减毒作用,其减毒作用是通过改善白细胞、红细胞和血小板的数量,提高脏器指数实现的.
关键词： 美洲大蠊提取物CⅡ-3 免疫调节 淋巴细胞转化 NK细胞活性 -
茶多酚对肝癌高危人群T淋巴细胞亚群和NK细胞活性的影响
目的:探讨长期服用茶多酚(green tea polyphenols,GTP)对肝癌高危险人群T淋巴细胞亚群和NK细胞活性的影响.方法:以服用GTP和安慰剂满3年的1 200名肝癌高危险人群为对象,采用SP一步染色法抽样检测淋巴细胞亚群、MTT法抽样检测NK细胞活性.结果:服用GTP人群的CD3、CD4、CD4/CD8及NK细胞活性均显著高于服用安慰剂的对照人群,P<0.05.CD8则明显低于对照人群,P<0.05.结论:长期服用GTP可影响肝癌高危险人群T淋巴细胞亚群和NK细胞活性, 可能与预防人类肝癌的作用机制有关.
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紫杉醇脂质体联合卡铂与紫杉醇联合卡铂治疗头颈部肿瘤的临床疗效
目的 探讨紫杉醇脂质体联合卡铂与紫杉醇联合卡铂治疗头颈部肿瘤的临床疗效.方法 选取2012年12月至2015年12月间安徽医科大学附属巢湖医院收治的96例头颈部肿瘤患者为研究对象,采用随机数表法分为观察组(采用紫杉醇脂质体联合卡铂)与对照组(采用紫杉醇联合卡铂),每组48例.比较两组患者化疗结束后临床疗效、自然杀伤(NK)细胞活性和不良反应发生情况.结果 化疗结束后,观察组患者临床治疗有效率和疾病控制率分别为45.8％和81.3％;对照组患者临床治疗有效率和疾病控制率分别为31.3％和72.9％,两组组间比较,差异均无统计学意义(均P ＞0.05).观察组患者NK细胞活性高于对照组患者,差异有统计学意义(P＜0.05).观察组患者Ⅲ级和Ⅳ级不良反应发生率分别为10.4％和2.1％,低于对照组患者的20.8％和10.4％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 紫杉醇脂质体相较紫杉醇治疗头颈部肿瘤疗效更好,对NK细胞活性影响更小,不良反应更低.
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肺癌病人自然杀伤细胞活性改变与HLA Ⅰ类无关联
目的研究发现控制自然杀伤(NK)细胞低活性的基因与HLA Ⅰ类基因相关联.在此基础上,检测肺癌病人NK细胞活性和HLA Ⅰ类抗原,以期发现肺癌的HLA Ⅰ类基因分布的特点及其与NK细胞活性的关系.方法采用国际标准的微量细胞毒分型方法对46例肺癌病人和34例正常人对照进行HLA-A、-B分型;采用乳酸脱氢酶释放法测定其NK细胞活性;数据的统计学处理采用t′检验及卡方检验或Fisher精确概率法.另外,46例肺癌病人与已知其单倍型的96例正常人进行了传统的疾病关联分析.结果发现肺癌病人的NK细胞活性(41.87±25.44)明显低于对照组(62.65±47.50),t′=2.32,P<0.05.肺癌病人NK细胞活性下降与HLA的型别分布无关,肺癌与HLA-A,-B抗原均无显著关联.结论肺癌的发生及其自然杀伤细胞活性下降与HLA Ⅰ类无关联.
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恶性血液病治疗前后T细胞亚群和NK细胞活性测定分析
目的检测46例恶性血液病患者化疗前后外周血T细胞亚群及NK细胞活性,观察胸腺肽免疫功能.方法应用单克隆抗体和流式细胞仪.结果 (1)恶性血液病患者各项免疫活性细胞表达均低于对照组;(2)晚期和复发型恶性血液病患者各项免疫指标均低于初发型恶性血液病;(3)AL各项免疫指标明显低于其它恶性血液病;(4)治疗后A、B两组比较;A组的NK细胞活性明显高于B组,A组治疗后CD3、CD4、CD4/CD8、NK细胞活性明显高于治疗前.结论 T细胞亚群、NK细胞活性在恶性血液病患者中受到抑制并随病情程度而进一步加剧,其中AL患者受抑更甚,胸腺肽能明显提高恶性血液病患者的细胞免疫功能,尤其对NK细胞,它是一种低毒高效的生物反应调节剂.
关键词： 恶性血液病:T细胞亚群 NK细胞活性 胸腺肽
