首页 > 文献资料
-
非病毒载体介导pBMP-2转染MC3T3-E1细胞的体外成骨分化研究
目的：探讨非病毒载体GenEscortTM II介导质粒骨形态发生蛋白2（pBMP-2）转染对MC3T3-E1细胞增殖和体外成骨分化的影响。方法：以非病毒载体GenEscortTM II介导报告基因质粒增强型绿色荧光蛋白（pEGFP）转染MC3T3-E1细胞，优化转染条件，荧光显微镜和流式细胞仪评价转染效率。 pBMP-2转染MC3T3-E1细胞后，MTT法检测细胞增殖情况，染色法检测碱性磷酸酶（ALP）和茜素红S（ARS）的表达，Real-time PCR 分析成骨细胞标志基因ALP、骨涎蛋白（BSP）、Runt 相关转录因子2（Runx2）、骨钙素（OCN）和骨桥蛋白（OPN）的表达。结果： GenEscortTM II介导pEGFP转染MC3T3-E1细胞后，转染效率达35.02±4.42，MTT结果示基因转染对细胞增殖无影响（P>0.05）。pBMP-2转染组的ALP、ARS表达较pEGFP转染组和未转染组显著，同时Real-time PCR检测结果示，转染后6 d， pEGFP转染组和未转染组相比，pBMP-2转染组的成骨基因ALP、BSP、Runx2、OCN、OPN的表达量差异有显著性意义(P<0.05)。结论：非病毒载体GenEscortTM II介导BMP-2转染MC3T3-E1细胞可诱导其向成骨方向分化。
关键词： 非病毒载体 聚乙烯亚胺 MC3T3-E1细胞 骨形态发生蛋白2 成骨分化 -
聚乙烯亚胺及其配位聚合物凝胶在基因载体中的应用
聚乙烯亚胺(polyethylene imine,PEI)是目前非病毒转基因载体领域的研究热点,围绕其细胞毒性与靶向性问题的研究已取得较大进展.一些新的策略,包括对PEI进行靶向性、生物可降解性的结构改造及金属离子与PEI配位等,特别是金属离子与PEI配位共聚形成聚合物凝胶,将具有广阔的应用前景.
-
聚乙烯亚胺与壳聚糖在基因载体中的应用
基因治疗是攻克肿瘤有潜力的方法之一,其关键是寻找可靠而有效的转基因载体.经过各种生物或化学修饰的聚乙烯亚胺和壳聚糖基因载体因转染效率高、细胞毒性低、靶向性强而成为研究热点.针对聚乙烯亚胺、壳聚糖及其衍生物应用于基因载体中存在的问题,将高转染效率的聚乙烯亚胺与高生物相容性的壳聚糖结合,可能得到兼具两者优点的新型基因载体.
-
新生血管型老年性黄斑变性基因治疗非病毒载体研究进展
新生血管型老年性黄斑变性(AMD)致盲率高,危害大,缺乏良好的药物治疗手段.本文阐述了新生血管型AMD的治疗现状,分析了基因靶点及临床研究情况,并从阳离子脂质载体类和聚合物载体类两个主要方面,重点综述了基因治疗非病毒载体的研究进展,包括阳离子脂质体、聚乙烯亚胺纳米粒、聚赖氨酸纳米粒、树状大分子纳米粒、壳聚糖纳米粒等,以期对该疾病基因治疗的药剂学研究提供借鉴和参考.
-
具有双层结构和负电荷屏障载体的构建及其基因转染
用组氨酸分别修饰聚乙烯亚胺(PEI)和透明质酸,得到了聚乙烯亚胺-组氨酸(PEI-His)和透明质酸-组氨酸(HA-His).然后将PEI-His与增强型绿色荧光蛋白质粒DNA (pEGFP-N1)复合形成PEI-His/DNA复合物(PD复合物),并进一步在其表面吸附HA-His形成具有双层结构和负电屏障的(PEI-His/DNA)/HA-His复合物(HPD复合物),用于基因传递研究.透射电镜观察到HPD复合物为球形纳米粒子,水化后平均粒径约为142 nm,ζ电位为-28.9 mV.HPD复合物中加入10％胎牛血清后平均粒径为135 nm,ζ电位为-25.8 mV,提示其具有良好的血清稳定性.HPD复合物对pEGFP-N1的包载效率为(91.9+115)％,并可有效保护DNA不被DNase I降解.在PEI浓度5～20 μg/ml范围内,HPD复合物的细胞毒性明显低于PEI/DNA复合物,前者细胞存活率可维持在80％以上;同时,它可介导DNA进入细胞实现基因转染,转染效率为2.88％.
-
氧化还原调控的甲氧基聚乙二醇-二硫键-聚乙烯亚胺非病毒基因载体的研制
合成了氧化还原调控的甲氧基聚乙二醇-二硫键-聚乙烯亚胺[methoxy poly (ethylene glycol)-SS-polyethylenimine,mPEG-SS-PEI].采用薄层色谱验证了该聚合物中二硫键的存在.琼脂糖凝胶电泳结果显示,mPEG-SS-PEI-pEGFP复合物在含10％胎牛血清的DMEM细胞培养液中稳定.透射电镜观察表明,不含二硫键的mPEG-PEI及mPEG-SS-PEI 与pEGFP复合物的粒径均约为200 nm.体外转染试验中,荧光显微镜定性及流式细胞定量结果均表明,与mPEG-PEIpEGFP相比,mPEG-SS-PEI-pEGFP能显著提高对U87细胞的转染效率.原因是mPEG-SS-PEI-pEGFP复合物进入细胞后能在较高浓度谷胱甘肽的还原下脱去PEG,从而恢复PEI的质子泵效应.并且,聚合物中加入二硫键未显著增加PEG化PEI的体外细胞毒性.
-
PEG化聚乙烯亚胺作为非病毒基因给药载体的研究
采用不同比例的单甲氧基聚乙二醇-琥珀酰亚胺基丙酸盐(mPEG-SPA)对支链聚乙烯亚胺(PEI)进行修饰,考察了不同接枝率的mPEG-PEI与DNA复合物的粒径、ζ电位、包封率,及其对A549细胞的转染效率和细胞毒性.体外转染试验表明,低PEG接枝率的PEI转染效果与PEI相当,且细胞毒性大大降低.
-
聚乙烯亚胺衍生物作为非病毒基因载体的研究进展
综述了通过结构修饰获得的各类聚乙烯亚胺(PEI)衍生物,如PEG修饰、小分子PEI共聚、连接配体或其它高分子骨架物等,及其在基因转染和细胞毒性方面的研究进展.
-
聚乙烯亚胺介导BMP-7基因体内转染促进老年大鼠骨折愈合
目的:观察聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)作为基因载体介导BMP-7基因体内转染促进骨折愈合的效果.方法:20月龄雄性SD大鼠随机分为3组:BMP-7+PEI治疗组、生理盐水对照组及BMP-7对照组(n=20).所有大鼠建立右股骨干骨折模型,BMP-7+PEI治疗组于骨折断端经皮注射pcDNA3.1-BMP-7/PEI混合试剂,生理盐水及BMP-7对照组分别注射等量生理盐水及pcDNA3.1-BMP-7.治疗后2、4、8周观察X线片、H-E染色、Ⅰ型胶原免疫组化染色、生物力学和骨密度检测结果,判断骨折愈合情况.结果:X线及H-E染色结果表明,3组老年大鼠骨折后第8周均未获得愈合,但BMP-7+PEI治疗组骨痂生长情况优于生理盐水及BMP-7对照组,断端间出现部分骨性连接.Ⅰ型胶原染色表明,与生理盐水及BMP-7对照组相比,BMP-7+PEI治疗组Ⅰ型胶原染色深、分布范围较大.抗弯曲强度和骨密度检测结果表明,BMP-7+PEI治疗组各项指标均优于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05或0.01).结论:PEI介导BMP-7基因体内转染可有效促进老年大鼠骨折愈合.
-
新型低相对分子质量聚乙烯亚胺耦联载体(PEI-Bu)对大鼠原代骨髓间充质干细胞的基因转染效率及毒性评价
目的 构建新型低相对分子质量聚乙烯亚胺(PEI)耦联载体,评估其对原代大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)的细胞毒性及转染效率.方法 利用可降解的氨基甲酸酯化学键耦联相对分子质量为800的PEI制备低相对分子质量的PEI(PEI 800)衍生物纳米非病毒载体,命名为PEI-Bu；进一步对PEI-Bu压缩DNA的能力、体外降解效率及对原代BMSCs的细胞毒性和基因转染效率进行生物学评价.结果 PEI-Bu能有效压缩质粒DNA并形成稳定的复合物,所形成的复合物粒径约50 nm.与实验室常用的已商品化的相对分子质量为25 000的PEI(PEI 25 000)相比,PEI-Bu对大鼠原代BMSCs的细胞毒性较小,且基因转染效率更高.结论 作为一种新型的非病毒纳米载体,PEI-Bu能有效转染BMSCs,且安全性较高,具有进一步研发的价值.
-
透明质酸修饰的pH敏感载多柔比星纳米粒的制备及初步评价
研究了一种透明质酸(HA)修饰的pH敏感载多柔比星(DOX)纳米粒(HA/PEI-DOX,HPD)的制备过程,并对其理化性质和体外释药性质进行初步评价.首先合成pH敏感载多柔比星聚合物材料PEI-DOX,随后与HA通过静电相互作用自组装形成HPD.通过对其进行理化性质初步评价,确定的优处方纳米粒平均粒径为(101.6±2.9) nm,Zeta电位为(-24.4±0.89)mV.透射电镜观察其形态圆整.体外释放实验结果显示HPD具有一定pH敏感性.
-
双pH敏感载多柔比星纳米粒的制备及初步评价
研究制备了一种双pH敏感型载多柔比星(DOX)纳米粒,以期实现DOX肿瘤定位释放.利用pH敏感化学键腙键将聚乙烯亚胺(PEI)和DOX化学连接,合成材料PEI-DOX (PD).PD与pH敏感材料羧甲基壳聚糖(CMCS)静电相互作用形成双pH敏感载DOX纳米粒CMCS/PD(CPD).通过核磁共振氢谱确证PD结构.采用透射电镜及动态光散射粒径电位分析仪考察CPD的理化性质.通过不同pH条件下粒径与Zeta电位变化和体外释放实验考察CPD双pH敏感性.PD核磁图谱表明其成功合成.CPD呈球形或类球形,平均粒径和Zeta电位分别为(164.1 ±4.90) nm,-(13.0±1.56) mV.当pH由7.4降低至5.0时,CPD粒径与电位发生显著变化,表明CMCS可pH响应性与PD解离;在pH5.0时,CPD体外累积释放为(51.22±1.48)％,显著高于pH 7.4时[(26.24±0.49)％,P＜0.05],表明DOX的释放具有pH敏感性.该研究表明CPD具有双pH敏感性,为pH敏感肿瘤定位释放纳米载体的制备提供一种新思路.
-
悬浮培养昆虫细胞SF9瞬时表达重组蛋白的条件优化
瞬时基因表达(TGE)是一种省去筛选高表达细胞株步骤,快速获得重组蛋白质的技术.昆虫细胞作为一种广泛使用的蛋白表达系统,在国内外关于它的瞬时基因表达的研究比较少.这篇文章进行了以昆虫SF9细胞在悬浮培养条件下进行瞬时表达eGFP和肿瘤坏死因子受体融合蛋白(TNFR-Fc)的条件优化,以期为外源蛋白在昆虫细胞中瞬时表达打下基础.经优化后,转染效率达到37％,重组TNFR-Fc达到700μg/mL.
-
结构修饰的基于聚乙烯亚胺的载体在基因递送方面的研究进展
聚乙烯亚胺(Polyethylenimine,PEI)是阳离子聚合物非病毒基因转染载体的代表之一,具有转染效率高,易于从溶酶体中逃逸,易于化学修饰等优点.但PEI毒性大,靶向性低,不易在体内生物降解的缺点限制了其应用.因此,许多研究者致力于PEI的结构修饰,在一定程度上改善了PEI的缺点.该文综述了生物相容性材料修饰的基于PEI的载体、靶向因子修饰的基于PEI的载体及基于PEI的环境响应型可解聚载体在基因递送方面的研究进展,以期为合理设计基因递送体系提供新的思路和方法.
-
纳米载体PEI介导IGF1R-siRNA对A549肺癌细胞增殖活性影响的初步研究
目的 以纳米载体聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导人胰岛素样生长因子1受体(insulin-like growth factor 1 receptor,IGF1R)小干扰(small interfering RNA,siRNA)质粒转染A549肺癌细胞,并初步观察沉默IGF1R基因对A549肺癌细胞体外增殖活性的影响.方法 设计IGF1R小干扰序列,构建PSUPER-IGF1R-siRNA质粒,PEI介导转染A549肺癌细胞,台盼蓝染色法和MTT法测定细胞存活率.结果 测序结果显示构建质粒与基因库IGF1R基因序列一致.PEI介导PSUPER-IGF1R-siRNA质粒转染A549肺癌细胞后,台盼蓝染色法和MTT 法检测结果显示细胞存活率降低,与生理盐水组和pSUPER-EGFR质粒对照组间的差异有统计学意义(P<0.05).结论 pSUPER-IGF1R-siRNA质粒构建成功,PEI介导其转染A549肺癌细胞后对细胞有生长抑制作用.
-
聚乙烯亚胺介导的E1A基因对肝癌细胞的化疗增敏效应
目的 以自行合成的聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)纳米凝胶为载体转染E1A基因,并观察E1A基因对肝癌细胞体外生长的抑制作用及其对化疗药物的增敏效应,初步探讨其作用机制.方法 经PEI介导,将真核细胞高效表达E1A基因的重组质粒psv-E1A导入人肝癌H22细胞,RT-PCR证实其转染,G418筛选出阳性克隆细胞,观察EIA基因对该细胞系生长的抑制作用.用MTT法测定转染E1A基因前后,顺铂、泰素、5-氟尿嘧啶、博来霉素对肝癌H22细胞的效应.结果 质粒psv-E1A测序结果与基因库E1A基因序列完全相符.G418筛选出阳性克隆细胞.RT-PCR结果显示PEI能转染质粒psv-E1A并有稳定的表达.转染E1A基因后,H22-E1A细胞对顺铂、博来霉索、泰素的敏感性显著提高(P<0.01),而对5-氟尿嘧啶的敏感性无明显变化(P>0.05).结论 PEI能正常转染质粒psv-E1A, E1A基因能够明显抑制肝癌H22细胞的生长,并明显提高其对顺铂、博来霉索及泰素等化疗药物和放射线的敏感性.其机制可能与E1A基因改变肿瘤细胞的增殖状态和细胞周期时相有关.
关键词： E1A基因 基因转染 肝癌细胞 聚乙烯亚胺 四甲基偶氨唑盐微量染色法 -
线粒体靶向聚合物TPP-PEI-LND的构建及其特性
以低相对分子质量聚乙烯亚胺(PEI)为骨架,将线粒体靶向基团三苯基膦(TPP)和化疗药物氯尼达明(LND)以酰胺键接枝到PEI上,构建线粒体靶向聚合物TPP-PEI-LND.TPP-PEI-LND经1H NMR确证.采用透析法考察TPP-PEI-LND的体外释放.采用HeLa细胞研究TPP-PEI-LND的线粒体靶向能力和细胞毒性.结果显示,TPP-PEI-LND线粒体靶向聚合物制备成功,其释药行为呈现缓释特点,并可以靶向递送药物到达线粒体,显著增强药物对肿瘤细胞的疗效.
-
聚乙烯亚胺/DNA复合物处方工艺优化及体外转染效率
目的:考察聚乙烯亚胺(PEI)相对分子质量、氮磷比(N/P比)、溶剂、离子强度等对PEI/DNA复合物形成、表面性质以及细胞转染效率的影响.方法:制备不同相时分子质量PEI/DNA复合物,通过凝胶电泳和紫外吸收检测确定PEI与DNA的复合能力(N/P比),测定不同溶剂、离子强度下的粒径和Zeta电位,考察复合物在HepG2细胞中的转染情况.结果:PEI与DNA的复合能力与PEI的相对分子质量呈正相关,不同溶剂、离子强度会影响复合物的表面性质,以磷酸盐缓冲液(PBS)为溶剂、PEI(25 kD)为载体、N/P比为12～15时,PEI/DNA复合物细胞转染效率明显优于质粒DNA,仅略低于阳性对照组.结论:经优化的PEI/DNA复合物可显著提高DNA在细胞中的转染效率.
-
聚乙烯亚胺包裹的磁性纳米颗粒用于基因载体的实验研究
目的: 探讨聚乙烯亚胺(PEI)包裹的氧化铁磁性纳米颗粒中polyMAG-1000用于体外基因转导的可行性.方法: 用扫描电镜观测polyMAG-1000的粒径;观察在不同的酸碱度下,将polyMAG-1000与pEGFP-N1质粒DNA按不同的比例(v : w)混合后,观察polyMAG-1000结合和保护DNA的能力,并进行体外转染实验. 结果: polyMAG-1000的直径约100 nm,颗粒均匀,无论在酸性、中性和碱性条件下均能与质粒DNA稳定地结合;polyMAG-1000能把pEGFP质粒DNA导入肿瘤细胞中,进而表达绿色荧光蛋白.当polyMAG-1000与DNA比例为1 : 1时转染效率高;加与不加磁场转染效率比较,差异具有显著性意义. 结论: PEI包裹的氧化铁磁性纳米颗粒可用于体外基因转导,把PEI等基因导入载体与磁性纳米颗粒结合而形成的新型基因导入载体具有良好的应用前景.
-
氮磷比对PEI介导BMP-7基因转染骨髓间充质干细胞的影响
目的:研究氮磷比(N/P值)对非病毒基因载体聚乙烯亚胺(polyethylenimine,PEI)介导骨形态发生蛋白-7(bone morphogenetic protein-7,BMP-7)基因转染骨髓间充质干细胞(bone mesenchymal stem cells,MSC)的影响,优化PEI/DNA复合物制备参数,为其应用于骨组织工程提供实验基础.方法:制备不同N/P值的含BMP-7基因的PEI/DNA复合物,测定复合物的粒径、Zeta电位以及PEI保护DNA抵御DNA酶消化的能力,检测复合物对MSC细胞的毒性以及转染表达BMP-7蛋白量.结果:当N/P值在3-30范围时,形成微粒粒径稳定在100 ～ 150 nm;当N/P值在5～ 30范围时,Zeta电位稳定在30 ～ 40 mV.当N/P值＞3时,随着PEI的增加,PEI对DNA的保护功能增强.当N/P值为7～10时,可以获得高的基因转染效率.当N/P值大于10时,细胞毒性明显增加.结论:N/P值为7～ 10时,含BMP-7基因的PEI/DNA复合物细胞毒性小,转染效率高.
