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新生隐球菌AD血清型是新生变种?
新生隐球菌根据传统的分类方法和以往的观点,血清型AD型新生隐球菌一直被视为新生隐球菌新生变种[1],但事实上,AD型新生隐球菌无论在地区分布、致病特征等方面,均与新生隐球菌新生变种中的A型和D型有明显不同[2,3].本文采用变性梯度胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术和核酸序列分析,首次发现新生隐球菌AD型28S rDNA基因型与新生隐球菌新生变种的A、D型不同,而与新生隐球菌格特变种B、C型完全一致,现报道如下.
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人类Y染色体STR基因座多态性及其法医学应用
人类基因组的基因及基因外区域含有的二碱基、三碱基及四碱基的短串联重复序列(short tandem repeat,STR),能提供大量的遗传标记(genetic marker,GM)[1,2],可用于构建基因连锁图,诊断遗传性疾病,以及解决法医学实践中生物物证的个人识别及亲子鉴定等问题.STR基因座的DNA多态性可用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis,PAGE)及硝酸银染色法检测,通过待测样品扩增产物与等位基因标记物比较,可迅速准确地判断扩增产物片段的大小,并命名等位基因.STR等位基因片段小,大约为核心序列长度为2~6 bp,可用于测定陈旧检材中已经降解了的DNA,解决常见性犯罪的混合斑检验问题.
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单细胞凝胶电泳在检测人精子DNA损伤中的应用
单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)又称彗星实验,是一种在单细胞水平上检测真核细胞DNA损伤与修复的方法.由于SCGE快速、简便和灵敏,已广泛用于检测外来化学物质对体细胞DNA的损伤[1].目前,这项技术广泛应用于检测人的肿瘤细胞[2]、淋巴细胞[3]、成纤维细胞[4]等,对动物的检测则有肝细胞、血细胞[5]等,以及植物细胞[6]DNA的损伤.精子DNA是精子细胞内重要的成分,是遗传物质的直接载体.临床资料显示,精子DNA损伤与男性不育有直接的关系,精子DNA的损伤关系到子代和亲代两代的健康[7,8].然而,由于精子细胞核特有的致密结构,DNA很难与核蛋白分离,使SCGE用于检测人精子DNA损伤有一定的局限.国内学者徐德祥[9]用改进的SCGE技术,成功地在显微镜下观察到人精子细胞DNA链的断裂,使近几年SCGE技术在评估男性生殖中得到了广泛的应用和迅速的发展.全文主要就SCGE的原理、具体操作方法及其在检测人精子DNA损伤中的应用和一些注意事项作一介绍.
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单细胞凝胶电泳在检测人精子DNA损伤中的应用
单细胞凝胶电泳(single cell gel electrophoresis,SCGE)又称彗星实验,是一种在单细胞水平上检测真核细胞DNA损伤与修复的方法.由于SCGE快速、简便和灵敏,已广泛用于检测外来化学物质对体细胞DNA的损伤[1].目前,这项技术广泛应用于检测人的肿瘤细胞[2]、淋巴细胞[3]、成纤维细胞[4]等,对动物的检测则有肝细胞、血细胞[5]等,以及植物细胞[6]DNA的损伤.精子DNA是精子细胞内重要的成分,是遗传物质的直接载体.临床资料显示,精子DNA损伤与男性不育有直接的关系,精子DNA的损伤关系到子代和亲代两代的健康[7,8].然而,由于精子细胞核特有的致密结构,DNA很难与核蛋白分离,使SCGE用于检测人精子DNA损伤有一定的局限.国内学者徐德祥[9]用改进的SCGE技术,成功地在显微镜下观察到人精子细胞DNA链的断裂,使近几年SCGE技术在评估男性生殖中得到了广泛的应用和迅速的发展.全文主要就SCGE的原理、具体操作方法及其在检测人精子DNA损伤中的应用和一些注意事项作一介绍.
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彗星实验检测单细胞DNA损伤的方法
彗星试验(Comet assay),又称单细胞凝胶电泳(Single cell gel electrophoresis,SCGE),是由Ostling和Johanson[1]首先提出,后经Singh等[2]进一步改进和完善的一种在单细胞水平上检测DNA损伤与修复的方法.因具有快速、灵敏、简便、花费少等特点,SCGE目前已被广泛应用于放射生物学、遗传毒理学、生物检测、细胞凋亡、肿瘤细胞治疗评价等诸多领域的研究[3,4].用于SCGE方法研究DNA损伤的细胞有许多种,如肝脏细胞、各种肿瘤细胞、淋巴细胞等.其中,因外周血淋巴细胞具有易于采集、对机体损伤小、可用于活体检测等优点而被广泛采用,尤其在自然状态下DNA损伤的检测中更显示其优势.就SCGE的原理、操作方法及其在外周血淋巴细胞DNA损伤中的应用作一介绍.
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AIM: To determine the evolutionary pattern of parenchymal cell apoptosis in multiple organs early after intestinal ischemia-reperfusion(I/R) and its induction mechanisms and the role of apoptosis in triggering SIRS/MODS. METHODS: An I/R model was reproduced by clipping and releasing the superior mesenteric artery in rats and mice. Flow cytometry, electron microscope, DNA agarose gel electrophoresis, TUNEL method, fluorescent and Gomori's silver-HE staining were used to detect apoptosis. Distribution features of apoptotic parenchymal cells in multiple organs were observed. Immunohistochemical staining of HSP 70 and Bcl-2 were performd to study the induction mechanisms of apoptosis.RESULTS and CONCLUSION: 1. Damage of the liver, lung, gut and kidney was appeared in early phase of I/R. The percentages of apoptosis in parenchyma organs increased progressively. The percentages of cell necrosis increased with the prolonged I/R duration. 2. Percentages of apoptosis were much higher near the central veins of liver lobules, in the outer medulla of the kidney, and the antimescenteric border of intestinal mucosal epithelium because of ischemia. 3. The expression of HSP 70 increased and Bcl-2 reduced in the areas mentioned above because of hypoperfusion. 4. Apoptosis of I/R hepatocytes, splenocytes and thymocytes was obviously increased after Kupffer cell blockage with GdCl3, showing the functional state of Kupffer cells may play an important role in SIRS/MODS.
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彗星试验中磨砂玻片的制作
彗星试验(COMET)又称单细胞凝胶电泳(singlecell gel electrophoresis,SCGE)是一种简便而灵敏的在单细胞水平上检测有核细胞DNA损伤与修复的方法,在国外广泛的用于各类化学诱变剂的检测.该试验是把在培养过程中经诱变剂或有毒物质干预后的细胞放在凝胶中制片,然后经裂解、解旋、电泳和漂洗及染色一系列过程,后在荧光显微镜下观察,求出拖尾细胞的百分率及拖尾细胞的尾长进行统计分析.
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单细胞凝胶电泳在精液标本检测中的影响因素及解决方法
单细胞凝胶电泳实验(single cell gel electrophoresis, SCGE)或称彗星试验(comet assay),是一种直接在荧光显微镜下用肉眼观察单个细胞DNA链断裂的试验方法,也是目前检测外来有害物质对精子损伤的有效方法.在应用过程中我们发现有许多因素能够造成SCGE结果的不稳定,特别是精液标本的保存和制备过程中的影响因素较大.我们就一些主要影响因素进行分析并探讨解决的方法.
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琼脂糖和聚丙烯酰胺凝胶电泳检测肠道菌群基因扩增产物的方法学比较研究
琼脂糖凝胶电泳(agarose gel electrophoresis, AGE))和聚丙烯酰胺凝胶电泳(polyacrylamide gel electrophoresis, PAGE)常用的分离纯化和鉴定核酸的方法.琼脂糖凝胶电泳的有效分离范围是0.1~2kb,聚丙烯酰胺分离小片段DNA(5~500 bp)效果好,分辨力极高,测序的聚丙烯酰胺凝胶可分离相差lbp的DNA片段.
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