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鞘糖脂研究的创新思路
鞘糖脂作为真核细胞质膜的组成成分之一,不仅维持着细胞的基本结构,而且在细胞粘附、生长、分化、增殖、信号转导等细胞基本活动中发挥重要作用,还参与了细胞恶变、肿瘤转移等过程[1～3].本实验室在国家自然科学基金的资助下,对肿瘤相关中性鞘糖脂进行了深入研究,已经发表10余篇论文,并且将研究成果申请了一项国家发明专利.下面就我们在研究过程中的创新体会做一个总结.
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应激性高血压局灶性脑缺血大鼠脑组织中性鞘糖脂含量的变化及外源性神经节苷脂GM1的影响
目的研究局灶性脑缺血后脑组织内中性鞘糖脂含量的变化及外源性神经节苷脂GM1对其影响.方法采用雄性SD大鼠,通过足底电刺激方法制备应激性高血压动物模型,在此基础上阻断一侧大脑中动脉,制成局灶性脑缺血.实验组于缺血前30min腹腔内注射GM1(10mg/kg体重).分别测定缺血后3、12、24h后脑组织内中性鞘糖脂的含量.结果在缺血的早期中性鞘糖脂的含量明显降低,随着缺血时间的延长其含量逐渐升高.GM1保护组中性鞘糖脂含量的变化明显轻于实验组.结论脑缺血可以导致神经质膜结构成分发生变化而神经节苷脂GM1对脑缺血具有脑保护作用.
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N糖基化抑制对脑胶质瘤细胞株SWO-38 N-GSLs合成的影响
目的 探讨N糖基化抑制对肿瘤细胞中性鞘糖脂(N-GSLs)合成的影响.方法 以衣霉素(Tunicamycin)为N-糖基化抑制剂,观察其对胶质瘤细胞株SWO-38糖蛋白及N-GSLs合成的影响.结果 当衣霉素浓度≥5ug/ml,作用时间≥8小时,它可以在体外选择性地抑制N糖蛋白的合成,同时也抑制N-GSLs的合成,而对N-GSLs单一组分的相对百分含量无明显影响.结论 N-糖基化抑制剂在抑制细胞N糖蛋白合成的同时,对细胞N-GSLs的合成也有抑制作用.
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Glob-N对胶质瘤细胞株SWO-38生长的体外实验研究
目的:为了探讨正常及肿瘤相关中性鞘糖脂(N-GSLs)对肿瘤细胞生长的调控作用.方法:采用改良的Hakomori方法提取、纯化正常人脑、牛脑、正常人"O"型血红细胞膜的N-GSLs,运用柱层析的方法分离正常人脑、牛脑、红细胞膜的红细胞糖苷脂(Glob-N)及人脑二己糖神经鞘氨醇(CDH),MTT法检测各种来源的Glob-N及人脑CDH对胶质瘤细胞株SWO-38生长的影响.结果:三种不同来源的Glob-N均能抑制SWO-38细胞的增殖.其中以正常人脑的作用强,红细胞来源的作用次之,牛脑来源的弱,而人脑CDH则缺乏抑制作用.结论:Glob-N是一种胶质瘤细胞的生长抑制因子,其抑制作用与其结构相关.
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正常人脑Glob-N的分离及其结构的初步分析
目的探索一种新的脑胶质瘤生长抑制因子Glob-N的分离鉴定方法.方法人脑中性鞘糖脂经过加压柱层析,梯度甲醇/氯仿溶液洗脱.对所得到的产物行1H-NMR和13C-NMR测定.结果含甲醇60%的甲醇/氯仿溶液的洗脱物为纯化Glob-N,层析展开后呈单一清晰条带,Rf值0.45.初步结构分析表明人脑Glob-N含N-乙酰半乳糖,共3个糖基,其神经酰胺部分共有33个碳原子.结论柱层析分离中性鞘糖脂单一组分效果好,纯度高;人脑Glob结构中含3个糖基.
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红细胞糖苷脂可以抑制在体外培养的人脑胶质瘤细胞突起的形成
目的探讨中性鞘糖脂在脑胶质瘤细胞生长调控中的作用.方法用改良的Hakomori方法,提取正常脑组织和脑胶质瘤组织中的中性鞘糖脂,并经柱层析法进一步纯化其中的单一成分红细胞糖苷脂(globoside)和CDH,运用扫描电镜观察它们对胶质瘤细胞生长的影响.结果正常脑组织高表达的红细胞糖苷脂可以抑制体外培养人脑胶质瘤细胞株细胞突起的形成,而脑胶质瘤相关CDH对脑胶质瘤细胞生长无明显影响.结论中性鞘糖脂可以抑制胶质瘤细胞突起的形成,其作用与其结构相关.
