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趋化性细胞因子对人Tc1和Tc2细胞内Ca2+浓度变化的影响
为了探讨趋化性细胞因子在体外对人Tc1和Tc2亚群细胞内Ca2+浓度变化的影响,从PBMC中分离纯化CD8+T细胞,在特定细胞因子及细胞因子抗体作用下,体外定向诱导出能长期培养的Tc1和Tc2细胞系,用免疫荧光染色结合流式细胞术分析对其进行鉴定后,通过流式细胞术检测在趋化性细胞因子刺激前后,细胞内Ca2+浓度的变化.发现受SDF-1作用后,Tc1及Tc2细胞内Ca2+浓度变化均不明显,而IP-10刺激后,Tc1及Tc2细胞内Ca2+水平在短时间内明显上调,且在Tc1胞内的上升幅度远高于Tc2细胞,在MIP-1β刺激后,也观察到类似趋势;受Eotaxin刺激后,Tc1及Tc2细胞内Ca2+水平均有微小上升,在Tc2细胞内的上升幅度略高于Tc1细胞.说明Tc1和Tc2细胞受趋化性细胞因子作用后,细胞内Ca2+浓度有不同程度的变化,且与趋化性细胞因子受体的表达呈现一定的相关性.
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胃肠道癌患者外周血CD8+T细胞功能相关标志物的检测及意义
目的探讨胃肠道癌患者外周血T细胞亚群和CD8+T细胞CD28共刺激分子等功能相关性标志物的表达及意义.方法用三色或四色荧光标记流式细胞术检测27例胃肠道癌患者及16例正常对照的外周血淋巴细胞.结果与正常对照组相比,肿瘤患者外周血T细胞标志如CD3+、CD4+、CD8+表达水平及CD4+/CD8+比值差异无显著性;CD8+CD28-T细胞显著增加(P<0.01),而CD8+CD28+T细胞显著降低(P<0.05).表达HLA-DR的活化CD8+T细胞显著增加(P<0.01),分泌IFN-γ的CD8+T细胞(Tc1)明显增多(P<0.01),而分泌IL-4的CD8+T细胞(Tc2)则正常人和肿瘤患者均很低.患者CD8+T细胞CD28及IFN-γ的表达变化与肿瘤分期无关.结论胃肠道癌患者中CD8+T细胞存在系统性活化的表现,其机制可能与CD28/B7以外的信号传递有关.胃肠道癌患者体内Tc1细胞的增加与肿瘤的分期缺乏明确关系.
关键词： CD8+/CD28+ CD8+/CD28- Tc1 Tc2 胃肠道恶性肿瘤 肿瘤免疫 -
ICR小鼠感染日本血吸虫后Tc1和Tc2细胞的动态观察及其功能分析
目的 观察日本血吸虫感染ICR小鼠后不同时期T淋巴细胞中杀伤性T细胞(Tc)亚型Tc1和Tc2比例的动态变化,并分析两者分别与Th1和Th2细胞比例变化的相关性.方法 分别取日本血吸虫感染0、3、5、8、13周的小鼠脾脏淋巴细胞,采用流式细胞术检测各个时期Tc1、Tc2和Th1、Th2细胞亚群分别占T淋巴细胞的比例.结果 与0周对照比较,感染3、5、8、13周小鼠T淋巴细胞中Tc1细胞比例显著增高(P均＜0.01),感染5、8、13周小鼠T淋巴细胞中Tc2细胞比例显著增高(P均＜ 0.01).比较Tc1和Tc2细胞比例在相同时间点的增速发现,感染3周时Tc1细胞比例增高显著,而感染5周时Tc2细胞比例的增高显著.感染各个时间点CD3+T细胞中的Th1细胞比例与Tc1细胞比例平行增长,且两者呈正相关(r=0.978,P=0.004)；CD3+T细胞中的Th2细胞比例与Tc2细胞比例平行增长,且两者呈正相关(r=0.974,P=0.005).体外可溶性成虫抗原(SWA)刺激脾细胞可优势增加T淋巴细胞中的Tc1细胞比例(P＜0.01),而可溶性虫卵抗原(SEA)刺激脾细胞可优势增加T淋巴细胞中的Tc2细胞比例(P＜0.01).结论 日本血吸虫感染不同阶段,小鼠T淋巴细胞中的Tc1和Tc2细胞比例均显著升高,并分别与Th1和Th2细胞比例呈正相关.在感染3周时主要以Tc1细胞比例升高为主,而感染5周时主要以Tc2细胞比例升高为主.SWA可优势诱导Tc1细胞,而SEA可优势诱导Tc2细胞.
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慢性支气管哮喘患者外周血CD8+T细胞平衡及其与细胞因子的关系
目的 探索CD8+ CD28+杀伤性T细胞和CD8+CD28-抑制性T细胞及其所构成的平衡在慢性支气管哮喘发病机制中的作用.方法 选取稳定期慢性支气管哮喘患者25例为实验组,同时选取慢性支气管炎及健康志愿者各25例作为对照组.采集外周血并采用多色流式细胞仪检测CD8+ CD28+及CD8+ CD28-T细胞的含量,并检测细胞因子γ干扰素(IFN-γ)及白介素4(IL-4)含量.结果 与慢性支气管炎及健康志愿者比较,慢性支气管哮喘患者的CD8+ CD28-抑制性T细胞含量明显降低(P＜0.05),而CD8+ CD28+杀伤性T细胞以及CD8+ CD28+/CD8+CD28-T细胞平衡含量明显升高(P＜0.05).慢性支气管哮喘患者CD8+ CD28+杀伤性T细胞内IFN-γ明显降低,而CD8+CD28-抑制性T细胞内IL-4含量明显升高(P＜0.05).结论 CD8+ CD28-T细胞含量降低导致免疫抑制不足可能是慢性支气管哮喘的重要机制,CD8+ CD28+T细胞过度分泌IL-4诱导Tc2类免疫反应可能是慢性哮喘发作的关键环节.
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趋化性细胞因子受体在Tc1和Tc2亚群的差异表达
目的研究趋化性细胞因子受体在体外长期培养的人Tc1和Tc2细胞系中的表达.方法将新鲜分离的PBMC在特定细胞因子及细胞因子抗体存在条件下,定向诱导为Ⅰ型和Ⅱ型T细胞系,用免疫荧光染色结合流式细胞术分析鉴定,并以膜表面及胞内三色流式细胞术检测趋化性细胞因子受体在不同T细胞亚群的表达.结果①在Ⅰ型和Ⅱ型T细胞整体水平上,CXCR4的表达水平接近,CXCR3和CCR5的表达在Ⅰ型T细胞明显高于Ⅱ型T细胞,CCR3在2种T细胞系的表达水平均较低,但在Ⅱ型T细胞的表达略高于Ⅰ型T细胞;②趋化性细胞因子受体在Tc1和Tc2亚群细胞的表达与上述结果类似,即CXCR的表达水平接近,CXCR3和CCR5的表达在Tc1高于Tc2,CCR3的表达水平较低,但在Tc2则略高于Tc1.结论趋化性细胞因子受体在Tc1和Tc2亚群的表达具有差异性.
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CD86对CD8+T细胞分化的影响
目的探讨CD86(B7-2)对CD8+T细胞分化的影响.方法用限制性内切酶XhoⅠ酶切质粒pCDM8得到CD86基因,并将其插入pCDNA3,用BamH Ⅰ酶切鉴定.用脂质体法介导pCDNA3-CD86真核表达载体转染人肝癌细胞株HMC7721,600μg/mL C418筛选,稳定且高表达CD86的抗性克隆用流式细胞仪进行鉴定.从健康志愿者血中分离外周血单个核细胞(PB-MC),使PBMC与靶细胞之比为20:1,共同培养48 h后,用流式细胞仪检测CD3+T细胞内IL-4和IFN-γ的表达率.结果成功构建pCDNA3-CD86真核表达载体;CD86在HMC7721-CD86细胞中的表达率为30.8%,而在HMC7721细胞中的表达率为0.98%;健康志愿者CD3+T细胞内IL-4和IFN-γ的表达率分别为1.92%和24.4%;PBMC与靶细胞共同培养48h后,无论是否用IFN-α刺激,IL-4/IFN-γ的阳性比值在HMC7721-CD86转染组均大于1,而在H-MC7721未转染组均小于1.结论在细胞培养中,CD86可诱导CD8+T细胞活化,并向Tc2表型转化.
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人同种异体抗原诱导的T细胞克隆在体外的建立及鉴定
目的: 在体外建立长期培养的人T细胞克隆.方法: 以60Co照射的无关PBMC作为饲养细胞, 在条件培养液中以有限稀释法对经单向混合淋巴细胞反应活化的T细胞进行克隆化.用免疫荧光染色和流式细胞术分析鉴定所获克隆.结果: 获得的16株克隆中, 除1株外, 均为αβT细胞.15株αβT细胞克隆中, 有9株为Th(3株Th0、6株Th2), 6株为Tc(5株Tc0, 1株Tc2).结论: 建立了15株稳定的T细胞克隆并进行了鉴定, 为Tc1和Tc2亚群标记和功能的研究打下了基础.
