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吉非替尼和西妥昔单抗联合治疗非小细胞肺癌的体外实验研究
背景与目的:表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor,EGFR)在非小细胞肺癌中高度表达并且参与其病理过程.目前针对于表皮生长因子受体开发了两种治疗肺癌的药物,-种是EGFR小分子抑制剂吉非替尼(Gefitinib),另-种是EGFR单克隆抗体西妥昔单抗(Cetuximab).然而,Gefitinib、Cetuximab联合治疗肺癌的效果以及具体机制还不是很清楚.本实验旨在研究Gefitinib、Cetuximab对人肺癌细胞A549、H460、H1299、SPC-A、95C、95D细胞增殖、细胞周期与凋亡、侵袭转移及相关蛋白表达的影响,并探讨其相应的分子机制.方法:CCK8法检测各细胞对Gefitinib、Cetuximab的IC50.流式细胞技术观察细胞凋亡状况;Transwell实验检测细胞侵袭和迁移黏附情况;Western blot检测Gefitinib、Cetuximab对增殖相关信号通路蛋白表达的变化.结果:1 nmol/L Gefitinib和5 μmol/L Cetuximab对A549细胞生长抑制率大概为30%和40%,而两者联合使用的抑制率能够达到50%以上.5 μmol/L Gefitinib和10 nmol/LCetuximab单独及联合作用对A549细胞迁移率降低约为18%、22%和35%.通过Western blot检测到Gefitinib、Cetuximab处理组的P-AKT、p-EGFR、p-MAPK蛋白量较对照组明显下降.结论:Gefitinib和Cetuximab能够抑制肺癌细胞生长和迁移,并且有着良好的协同作用,提示两药联合使用临床肺癌治疗可能具有很大的潜力.
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洛伐他汀克服非小细胞肺癌PC9细胞株吉非替尼耐药的体外研究
目的:研究联合洛伐他汀(10vastatin)和吉非替尼(gefitinib)对体外诱导吉非替尼获得性耐药的非小细胞肺癌细胞株PC9细胞凋亡以及相关蛋白表达的影响,并探讨其可能的机制.方法:应用洛伐他汀联合吉非替尼处理耐吉非替尼的非小细胞肺癌PC9细胞株后,采用WST-1法检测不同药物处理对PC9细胞增殖的影响,Hoechst33342荧光染色法观察细胞凋亡形态,FCM法观察细胞凋亡状况,蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白的表达水平.结果:洛伐他汀联合吉非替尼可在体外诱导耐吉非替尼的PC9细胞凋亡,抑制其细胞增殖;洛伐他汀联合吉非替尼可诱导耐吉非替尼的PC9细胞中磷酸化表皮生长因子受体(phosphorylated epidermal growth factorreceptor,p-EGFR)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B,p-AKT)和磷酸化细胞外调节蛋白激酶1/2(phosphorylated extracellular signal-regulated kinase 1/2,p-ERK1/2)蛋白表达水平明显下调.结论:在体外诱导吉非替尼获得性耐药的非小细胞肺癌细胞株PC9中,洛伐他汀可以克服吉非替尼耐药,两者具有良好的协同作用,提示两药联合对于出现吉非替尼耐药的非小细胞肺癌的临床治疗可能具有很大的应用潜力.
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凉血通瘀方对血管内皮细胞增殖、分泌及相关信号通路蛋白表达的影响
目的 通过研究凉血通瘀方对血管内皮细胞(VEC)增殖、分泌及相关信号通路蛋白表达的影响,探讨其治疗出血性中风的作用机理.方法 体外培养血管内皮细胞,1 mmol/L过氧化氢(H2O2)造成血管内皮细胞氧化损伤模型;MTT法检测细胞增殖活性,倒置显微镜观察细胞形态,Hochst法观察细胞凋亡,化学法检测细胞上清NO、TNOS和iNOS的表达,West-ern blot法检测细胞NF-κB、P53、caspase-3和P21蛋白的表达.结果 与H2O2模型组相比较,高、中、低剂量组的凉血通瘀方能明显提高VEC的增殖活力,显著增加细胞上清液中NO、TNOS和iNOS的表达水平;中剂量组凉血通瘀方能改善细胞形态,减少细胞凋亡,降低NF-κcB、P53、caspase-3和P21蛋白的表达.结论 凉血通瘀方通过促进细胞增殖、抑制细胞凋亡、提高细胞NO的分泌和TNOS、iNOS的活性,降低NF-κB、P53、caspase-3和P21信号通路蛋白的表达,从而保护血管内皮细胞是凉血通瘀方治疗出血性中风的作用机理.
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电离辐射克服NSCLC细胞株H1975吉非替尼耐药的体外研究
目的 探讨电离辐射联合吉非替尼对NSCLC耐药株H1975耐药突变、细胞凋亡及相关蛋白表达的影响及其可能机制.方法 实时荧光定量PCR对不同处理组H1975细胞的T790M突变进行相对定量分析;流式细胞仪检测不同处理组H 1975细胞的凋亡率;免疫印迹检测不同处理组凋亡相关蛋白的表达水平.结果 2.5 Gy电离辐射组相较于0 Gy对照组,H1975细胞株T790M突变量降为原来的0.67倍,随电离辐射剂量的增高,T790M突变量降低(P＜0.05);电离辐射联合吉非替尼组的细胞凋亡率为(44.35±8.49)％,相较于单独电离辐射组(21.84±5.62)％或吉非替尼组(17.38±6.78)％明显升高(P＜0.05);电离辐射联合吉非替尼可诱导H1975细胞中磷酸化表皮生长因子受体(phosphorylated epidermal growth factor receptor,p-EGFR)、磷酸化蛋白激酶B(phosphorylated protein kinase B, p-AKT)蛋白表达水平明显下调.结论 在吉非替尼耐药的NSCLC细胞株H1975中,电离辐射可以克服吉非替尼耐药,与吉非替尼有良好的协同作用.
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氧化应激相关酶及信号通路蛋白表达对动静脉内瘘患者血栓形成的影响
目的：探讨氧化应激相关酶及信号通路蛋白表达对动静脉内瘘（AVF）患者血栓形成的影响。方法该院血液中心于2014年1月-2016年1月收治120例行AVF手术或AVF修补术的肾脏疾病患者依据AVF术后是否有血栓形成分为两组：A组71例（AVF术后有血栓形成），B组49例（AVF术后无血栓形成），比较两组患者氧化应激酶及信号通路蛋白水平。结果 A组血浆甲状旁腺激素、半胱氨酸水平高于B组（=0.000和0.000），血红蛋白、C反应蛋白水平低于B组，差异有统计学意义（=0.000和0.000）；A组患者血管组织中超氧化物歧化酶-1（SOD-1）、超氧化物歧化酶-2（SOD-2）、血红素氧化酶-1（HO-1）、Ras相关C3肉毒素酶解-2（Rac-2）和还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶（NOX-4）水平高于B组，差异有统计学意义（=0.000、0.000、0.000、0.000和0.000）；A组患者血管组织中NADPH氧化酶亚单位P-22、磷脂酰肌醇3激酶（PI3K）、叉头框蛋白01（P- Fox01）和叉头框蛋白03a（P- Fox03a）水平高于B组，差异有统计学意义（=0.000、0.000、0.000和0.000）；内瘘患者血栓形成与血管组织中SOD-1、SOD-2、HO-1、Rac-2、NOX-4、P-22、P13K、P- Fox01和P- Fox03a水平呈正相关（=0.040、0.010、0.041、0.022、0.030、0.021、0.031、0.020和0.021）。结论氧化应激反应通过P13K/Fox0信号通路传导表达相关酶及蛋白，引发血管内皮损伤，导致动静脉内瘘吻合处狭窄及血栓形成，临床可通过干预动静脉内瘘患者体内应激反应及相关信号通路蛋白表达预防或治疗动静脉内瘘血栓的形成。
