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液体活检技术及在精准医疗中的应用
液体活检是一种快速、简便的癌症血液检测方法，是精准医疗重要途径之一，是非介入性的、可重复性地抽取肿瘤样本。应用液体活检技术实现癌症的预防、诊断、预后，从而在抗癌药物的选择、药物功效的评估、耐药的监测等方面拥有广泛的前景。笔者分别对液体活检技术之循环肿瘤DNA和循环肿瘤细胞监测及其在精准医疗中的应用进行综述。
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小细胞肺癌转化研究的探索
小细胞肺癌约占肺癌总数的15％ ～ 20％,具有高侵袭性,易早期发生转移.30年来小细胞肺癌的治疗一直进展缓慢,迫切需要新的治疗策略提高小细胞肺癌的疗效.医学转化研究是目前研究的热点,有助于研究小细胞肺癌的异质性以及探索适合的生物标志物,从而指导临床治疗.本文就小细胞肺癌的起源、循环肿瘤细胞、分子标志物、发病机制及靶向治疗等方面进行综述,以探讨小细胞肺癌转化研究的进展.
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肿瘤外周血循环细胞对胰腺癌的诊断价值
目的：评价胰腺癌外周血肿瘤循环细胞(circulating tumor cells，CTCs)对胰腺癌的诊断价值。方法采用免疫磁珠负性富集结合免疫荧光方法分离和鉴定CTCs，回顾性分析我院2010年5月-2012年5月就诊的69例胰腺癌患者(胰腺癌组)和30例健康对照组外周血CTCs水平，分析单独应用CTCs检测胰腺癌的临床价值及CTCs与CA19-9联合对胰腺癌的诊断价值。结果胰腺癌组CTCs的检出率为88.41%，对照组均未检测出CTCs，CTCs的检出情况和血清CA19-9升高水平具有相关性(r=0.23，P=0.012)；CA19-9与CTCs联合可提高胰腺癌诊断的灵敏性，阳性似然比＞10，阴性似然比＜0.2。结论 CTCs是胰腺癌诊断的敏感指标，联合CA19-9与CTCs可提高胰腺癌的诊断水平。
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可手术乳腺癌患者的循环肿瘤细胞与临床病理特征的关系
目的 探讨可手术乳腺癌患者外周周血巾循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)阳性率与其临床病理特征的相关性.方法 2014年1-9月本院收治的73例可手术乳腺癌患者为研究对象,使用CellSearch系统检测所有患者在接受化疗前的CTCs,分析其与原发肿瘤临床病理特征和预后的关系.结果 CTCs在可手术乳腺癌患者中的检出率为16.4％;CTCs阳性组与阴性组中肿瘤直径＞ 5cm的患者分别占25％、3.3％,两组差异有统计学意义(P=0.036),且肿瘤直径是CTCs阳性的独立影响因素(OR=2.024,P＜0.05);CTCs阳性与阴性患者1年无病生存(disease free survival,DFS)率分别为80.8％、100％,两组差异有统计学意义(P=0.01).结论 原发肿瘤大小与可手术乳腺癌患者CTCs有关,但CTCs与其预后的关系尚不明确.
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卵巢癌中循环肿瘤细胞阳性率及分型与临床特征的关系
目的 探讨上皮性卵巢癌患者外周静脉血中循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)阳性率及分型与临床特征的关系.方法 以2015年3月-2016年10月于本院诊治的31例上皮性卵巢癌患者为研究对象.选取不同时间节点抽取患者外周血.采用优化的CanPatrol CTC富集及分离技术检测血液中的CTC,分析其与临床特征的关系.结果 31例上皮性卵巢癌患者,26例术后外周血CTC阳性,检出率为83.87%.腹水及术后存在残余病灶患者的CTC检出率明显增高(P<0.05),而年龄、CA125表达、术后是否输血、淋巴结转移、先期化疗等临床病理特征对CTC检出率无显著影响(P>0.05).术后化疗患者血液中的CTC整体均数与上皮型CTC、混合型CTC及间质型CTC数量均呈逐渐下降趋势.12例患者完成6个月随访,4例复发,且4例复发患者CTC的阳性率为100%.结论 循环肿瘤细胞阳性预示预后不佳.
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卵巢癌患者循环肿瘤细胞中ERCC1表达与铂类药物敏感性的关系
目的 研究上皮性卵巢癌(epithelial ovarian cancer,EOC)患者外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cell,CTC)中切除修复交叉互补基因1(excision repair cross-complementation group 1,ERCC1)表达与铂类药物敏感性的关系.方法 以2015年3月-2017年6月本院诊治的60例EOC患者为研究对象,收集手术后化疗前及3个疗程化疗(卡铂/紫杉醇)后1周内患者外周血,利用纳米滤膜结合RNA原位杂交技术分离检测CTC及ERCC1+ CTC,分析ERCC1+CTC与临床特征、铂类药物敏感性的关系.结果 60例患者中83.3％(50例)检测出CTC,60％(36例)检测出ERCC1+CTC.将36例ERCC1+CTC患者按照化疗前后ERCC1+CTC数目变化分为化疗后ERCC1+CTC数目升高组(ERCC1+ CTC-H组,12例)和ERCC1+CTC数目未升高组(ERCC1+CTC-L组,24例),两组年龄、家族史、病理类型、腹水情况、腹水细胞学情况、残余病灶、FIGO分期等临床特征无统计学差异(P均＞0.05),ERCC1+CTC-L组中62.5％(15例)铂类药物敏感,ERCC1+CTC-H组中16.7％(2例)铂类药物敏感,两组差异有统计学意义(P＜0.05).结论 外周血循环肿瘤细胞ERCC1阳性可预测铂类药物敏感性.
关键词： 切除修复交叉互补基因1 循环肿瘤细胞 卵巢癌 铂类敏感性 -
免疫磁性分离技术在循环肿瘤细胞检测中的应用
免疫磁性分离技术是一种通过形成抗原-抗体-磁珠免疫复合物分离特定细胞的细胞分选技术,国外在循环肿瘤细胞检测的研究中应用较多.近年来随着纳米技术的飞速发展,出现了纳米免疫磁珠.由于具有高特异性、高浓缩性、高分离率,且不影响细胞活性等特点,因此,能从大量外周血细胞中筛选出极少量的肿瘤细胞.与常规检测技术(如免疫细胞化学、RT-PCR、流式细胞仪等)相结合,弥补了常规检测技术的不足,改善了这些检测方法对循环肿瘤细胞检测的敏感性及特异性.
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应用单细胞cDNA扩增技术鉴定循环肿瘤细胞
目的 建立单细胞cDNA扩增技术,实现在分子水平鉴定循环肿瘤细胞.方法 建立结肠癌循环肿瘤细胞模型,通过免疫荧光染色和显微切割技术分离出单个血细胞和肿瘤细胞;裂解细胞后利用碱基修饰的P1(dT)24引物反转录出cDNA第一链,并给第一链cDNA加上PolyA尾后利用碱基修饰的P2(dT)24引物合成第二链cDNA,然后利用P1(dT)24和P2(dT)24引物扩增分别得到血细胞和肿瘤细胞的全长cDNA;后通过PCR检测细胞特异的标记物CD45、EpCAM和CK19.结果 改良后的单细胞cDNA扩增方法能够获得高质量的全长cDNA,并能显著增加PCR检测效率;利用扩增得到的cDNA通过PCR检测细胞表面标记物CD45、EpCAM和CK19的表达,能有效鉴定出外周血中混杂的肿瘤细胞.结论 通过单细胞cDNA扩增技术在基因水平识别肿瘤细胞,建立了一种新的循环肿瘤细胞的鉴定方法.
关键词： 单细胞cDNA扩增技术 循环肿瘤细胞 激光捕获显微切割 聚合酶链式反应 -
液体活检技术在结直肠癌精准医疗中的应用与挑战
随着精准医疗在肿瘤临床领域中的广泛开展,对肿瘤分子生物学特性进行实时动态监测的需求越来越高.近年来,液体活检以简便快捷、微创、实时、特异性高和克服时空异质性等特点在肿瘤临床诊断与治疗中发挥着越来越重要的价值.本文围绕液体活检的两种主要技术:循环肿瘤细胞和循环肿瘤DNA检测技术的特点,介绍了其在结直肠癌精准医疗领域的新研究进展,探讨了面临的挑战和可行的解决方案.
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晚期EGFR突变型非小细胞肺癌接受埃克替尼治疗疗效和循环肿瘤细胞的关系
目的 评价晚期表皮生长因子受体(EGFR)突变型非小细胞肺癌中外周血循环肿瘤细胞(CTC)与埃克替尼疗效的关系.方法 74例晚期EGFR突变型非小细胞肺癌患者基于中位CTC数量被分为CTC低数量组和CTC高数量组,所有患者进行埃克替尼治疗,比较治疗疗效和预后.结果 CTC低数量组治疗有效率为46.88％(15/32),CTC高数量组治疗有效率为23.81％(10/42).CTC低数量组中位OS为22.0个月(95％CI:19.6～28.7个月),CTC高数量组中位OS为18.3个月(95％CI:15.3～25.4个月).结论 CTC低数量的晚期EGFR突变型非小细胞肺癌患者使用埃克替尼可以取得更好的疗效,CTC数量及治疗前后变化情况或可作为埃克替尼疗效的预测指标.
关键词： 非小细胞肺癌 循环肿瘤细胞 埃克替尼 CanPatrolTM -
NF-kB在肝癌中表达及其与上皮间质转化的关系
目的 探讨核转录因子NF-kB在肝癌中的表达情况及其与肝癌上皮间质转化(EMT)的关系.方法 (1)方便收集福建省龙岩市第二医院2014年12月—2015年10月肝癌患者12例外周血样本,采用CanPatrol CTC二代富集技术分离循环肿瘤细胞(CTCs);②采用RNA原位杂交(RNA-ISH)技术,鉴定CTCs类型和检测NF-kB的表达.结果 91.7%(11/12)肝癌患者外周血样本中检测出CTCs,根据EMT标志物,CTCs可被分为3个亚群,包括上皮型CTCs,上皮/间质混合型CTCs和间质型CTCs.间质型CTCs、NF-kB在肝癌外周血中表达率分别为66.7%(8/12)、83.3%(10/12);NF-kB表达与CTCs检出率、间质型CTCs表达显著相关(P<0.05).结论 NF-kB可能和肝癌的EMT发生有关,并促进肿瘤转移.
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循环肿瘤细胞联合癌胚抗原检测在Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌诊断中的应用研究
目的 分析循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTC)联合癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)检测在Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌中的应用价值,为Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者的临床治疗提供参考.方法 选取2017年4-9月温州市中心医院收治的结直肠疾病患者121例,根据病理学诊断将其分Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者和结直肠良性疾病患者,其中Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌患者86例作为观察组,结直肠良性疾病患者35例作为对照组,分别检测患者血清中CTC和CEA水平,分析患者CTC计数与其临床资料的关系,并采用一致性检验比较CEA检测、CTC检测、CEA联合CTC检测对Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌的诊断价值.结果 不同CEA水平患者的CTC计数差异有统计学意义(均P＜0.05),CEA检测结直肠癌的阳性率为47.67％ (41/86),CTC检测结直肠的阳性率为72.09％(62/86),CTC联合CEA检测结直肠癌的阳性率为90,70％ (78/86),一致性检验结果显示,CTC联合CEA检测的灵敏度、特异度、准确度及一致性均高于CEA及CTC单独检测.结论 CTC联合CEA检测在Ⅰ、Ⅱ期结直肠癌诊断中有较高应用价值.
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循环肿瘤细胞检测及其特性
肿瘤转移是导致肿瘤患者死亡的重要原因,现有影像学手段及传统肿瘤标志物不能辅助医生尽早发现肿瘤转移并判断预后.外周血循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)存在于肺癌、乳腺癌、前列腺癌、结直肠癌、膀胱癌和卵巢癌等多种恶性肿瘤中,与患者的临床分期、无进展生存期、总生存期、药物疗效以及早期复发和转移均密切相关,因有望成为实时的"液体活检"而备受关注[1].随着研究的深入,人们对CTCs的特征有了新的认识,并尝试采用新的方法对其进行分离检测.虽然已有文献对CTCs的分离和鉴定进行综述[2],但是CTCs作为热点话题,对其报道日新月异,更多CTCs的表型和分子特征被报道,新的研究手段也逐渐被尝试,分离鉴定技术也越来越完善,本文在前有基础上结合新检测技术以及CTCs的特性进行综述.
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循环肿瘤细胞致肿瘤血行转移研究进展
众所周知，肿瘤转移是造成肿瘤患者死亡的重要原因之一。原发肿瘤释放成千上万的肿瘤细胞入血，但仅有不足0.01％的循环肿瘤细胞（ circulating tumor cells， CTCs）能够在外周血存活并形成转移［1］， CTCs检测在肺癌、乳腺癌、前列腺癌等多种癌症中具有诊断、判断预后等价值［2］。以往认为肿瘤转移发生在原发肿瘤形成后，经典的肿瘤转移经过原发灶肿瘤、肿瘤细胞播散入血并在外周血存活、组织侵袭、形成转移灶等阶段［3］；但近研究发现，上皮细胞播散可发生于癌前病变极早期，在形成明显的原发灶之前，上皮细胞或已脱落入血并在远处定植［4］。肿瘤细胞脱落入血， CTCs在进行血行转移的过程中受到宿主细胞和血液微环境等多方面因素的调控，需要不断获得适应微环境的生存能力，因此认识和探讨CTCs的血行转移调控机制能够为临床监测肿瘤播散转移提供重要价值。
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循环肿瘤细胞的富集鉴定及临床应用
循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)是由实体肿瘤脱落至血液循环中与正常血细胞形态及生物学标志物存在差异的肿瘤细胞.鉴于其取材简便,能反映机体肿瘤负荷,相当于实时活检,日益得到广泛关注.但CTCs在循环系统中数量少,对检测造成困难.CTCs富集和鉴定手段的进步,有助于肿瘤转移的诊断、靶向治疗的疗效判断及预后判断.本文就循环肿瘤细胞的定义、特性、富集和鉴定方法及临床应用逐一阐述.
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循环肿瘤细胞检测分子标志物的研究现状及进展
循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)指自发或因诊疗操作由实体瘤或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞.这些进入循环的肿瘤细胞大部分在机体免疫识别及杀伤等作用下发生凋亡,极少数存活下来形成微小癌栓,在一定条件下发展为转移灶.
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循环肿瘤细胞的生物学特性及其临床意义
循环肿瘤细胞( CTCs)被认为是肿瘤侵袭的标志物,CTCs的检测也越来越被重视. 另外,连续检测患者外周血中的CTCs能够反映系统性治疗的有效性等临床相关信息. 然而,由于外周血中CTCs数目极少及其异质性,目前需要敏感性和特异性更高的检测方法. 该文综述了近年来关于CTCs的生物学特征和临床意义,同时也总结了富集和检测外周血CTCs的一些方法,探讨了 CTCs在肿瘤个体化治疗方面的应用及挑战.
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膀胱癌分子生物学标志物的研究进展
膀胱癌是目前常见的泌尿系恶性肿瘤,具有较高的发病率与病死率,已成为我国重要的公共卫生事件.目前膀胱镜检查和尿脱落细胞学仍是膀胱癌诊断的金标准.但随着检测技术不断进步,膀胱癌分子生物学标志物逐渐成为诊断膀胱癌的新标准.同时,通过对膀胱癌分子生物学标志物的研究,还能给临床医师带来肿瘤发病情况的实时信息,并很有可能改变目前临床医师对膀胱癌诊治的认识.
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结直肠癌相关肿瘤标志物与疗效、预后解读的研究进展
结直肠癌(CRC)是常见的消化道恶性肿瘤,其生存期与诊断分期密切相关,诊断分期是预测预后和指导术后治疗的金标准.近些年由于肿瘤标志物在临床上的应用越来越广泛,可用于CRC的筛查,并有助于指导治疗和监测复发转移.CRC常见的生物标志物是癌胚抗原(CEA),可用于早期诊断、复发及预后预测.然而,CEA不能确切地反映肿瘤的转移潜能,当发生复发或转移时,某些患者的CEA水平不会升高.这就迫切需要更多新型的CRC标志物,如循环肿瘤细胞、肿瘤基因标志物等,以为CRC的治疗与预后的判定提供新的思路.
