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感染过程中钩端螺旋体外膜蛋白抗原表达水平变化及其调控机制
目的:了解感染人巨噬细胞过程中问号钩端螺旋体(简称钩体)黄疸出血群赖型赖株主要外膜蛋白(OMP)抗原表达水平变化及其OmpR相关基因调控机制.方法:采用生物信息学技术预测问号钩体赖株OmpR及其组氨酸激酶(HK)基因和结构功能域.采用实时荧光定量RT-PCR检测钧体感染人THP-1巨噬细胞前后钩体主要OMP编码基因mRNA水平的变化.采用HK胞外区多肽抗血清封闭试验及氯氰碘柳胺阻断试验,检测OmpR及其HK对感染过程中问号钩体OMP编码基因mRNA水平变化的影响.结果:生物信息学分析结果显示,LB015和LB333可能是问号钧体赖株OmpR编码基因,LB014可能是其HK编码基因.问号钩体赖株感染THP-1细胞后,lipL21、lipL32、lipL41基因mRNA水平迅速并持续下降(P＜0.01),groEL、mce、loa22、ligB基因mRNA水平瞬时迅速升高(P＜0.01).氯氰碘柳胺或HK抗血清处理可使感染THP-1细胞而显著下降的问号钩体lipL21和lipL48基因mRNA水平明显回升(P＜0.01),氯氰碘柳胺处理可使感染THP-1细胞而显著升高的groEL、mce、loa22、ligB基因mRNA水平明显下降(P＜0.01).结论:问号钩体赖株感染人巨噬细胞后主要OMP抗原表达水平发生明显变化.问号钩体赖株染色体中存在一组编码OmpR及其HK的基因,其主要功能可能是下调感染过程中部分OMP抗原表达水平.
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伤寒沙门菌OmpR缺陷变异株制备与分泌蛋白初析
目的观察伤寒沙门菌调节蛋白OmpR的调节作用,制备伤寒沙门菌OmpR缺陷变异株,并比较分析野生株和OmpR缺陷变异株在不同渗透压环境培养下的分泌蛋白.方法用自杀质粒pGMB151介导同源性重组方法制备伤寒沙门菌OmpR缺陷变异株,用PCR方法观察重组现象,变异株经测序和外膜蛋白的SDS-PAG电泳鉴定,用SDS-PAG电泳结合Western blot比较分析野生株和OmpR缺陷变异株在高、低渗透压环境培养下的SipC等分泌蛋白.结果成功制备伤寒沙门菌OmpR缺陷变异株,并发现变异株中,包括SipC、鞭毛素蛋白在内的多种蛋白的表达分泌有明显差异.结论伤寒沙门菌OmpR在不同的渗透压下分别影响SipC、鞭毛素蛋白等多种蛋白的表达分泌.
