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吉祥草中甾体皂苷RCE-4对人宫颈癌Caski细胞Ras/Erk和p16/cyclinD1/CDK4通路的影响
目的:研究吉祥草中甾体皂苷RCE-4影响Ras/Erk和p16/cyclinD1/CDK4信号通路促进Caski细胞凋亡的作用机制.方法:体外培养人宫颈癌Caski细胞株,用RCE-4作为处理因素,MTT法检测细胞增殖活力;流式细胞术检测细胞周期分布;Real-time PCR检测p16、cyclinD1和CDK4mRNA表达水平;Western blot检测Ras/Erk信号通路总蛋白和磷酸化蛋白表达水平.结果:RCE-4呈剂量依赖性抑制Caski细胞增殖,其作用24 h的IC50值为12.33 μmol/L;升高G0/G1期细胞比例,降低S期细胞比例;抑制Ras、p-Raf、p-Mek1/2和p-Erk1/2蛋白表达,降低p-Raf/Raf、p-Mek1/2/Mek1/2和p-Erk1/2/Erk1/2比值,上调p16的mRNA表达,下调cyclinD1和CDK4的mRNA表达.结论:RCE-4可抑制Caski细胞的增殖,诱导细胞在G0/G1期阻滞,其诱导作用与其抑制Ras/Erk和p16/cyclinD 1/CDK4信号通路激活有关.
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吉祥草乙酸乙酯提取物抗炎作用及机制研究
目的 探讨吉祥草乙酸乙酯提取物及该部位分离得到的化合物RCE-4的抗炎活性及机制.方法 采用细菌脂多糖(LPS)刺激经佛波酯(PMA)诱导的人单核细胞THP-1体外炎症模型检测其干预前后上清液中促炎细胞因子(IL-1β、IL-6和TNF-α)的分泌量,角叉菜胶致小鼠足趾肿胀模型检测其肿胀抑制率,通过佐剂关节炎模型检测组织内和血清中NO的含量.结果 其能显著减少促炎因子的分泌量(P＜0.001),抑制角叉菜胶致小鼠足趾肿胀作用(P＜0.05),减少佐剂性关节炎模型组织内和血清中NO的含量(P＜0.01),并且抑制作用具有时间和剂量依赖性.结论 吉祥草乙酸乙酯提取物及RCE-4具有明显的抗炎活性,其作用机制可能与抑制促炎细胞因子和NO的释放有关.
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吉祥草中甾体皂苷RCE-4激活p53-ROS通路诱导人肝癌HepG2细胞凋亡的机制研究
目的:研究吉祥草中甾体皂苷RCE-4对HepG2的抑制作用及分子机制.方法:用RCE-4(1.62、3.13、6.25、12.5、25.0、50.0μM)处理HepG2细胞24h后,采用MTT法检测不同浓度RCE-4对HepG2细胞增殖的影响;RCE-4(6.25、12.5和25.0μM)分别处理HepG2细胞12、24和48h后,MTT法检测其对细胞增殖的影响;RCE-4(6.25、12.5和25.0μM)处理HepG2细胞24h后用DCFH-DA荧光探针标记进行细胞内的活性氧水平检测,Hoechst33258染色观察细胞形态变化,Annexin V-FITC/PI染色测定细胞凋亡率,PI标记测定细胞周期,JC-1染色法测定细胞线粒体跨膜电位水平,Caspase试剂盒检测HepG2细胞中Caspase-9和Caspase-3 的活性,Western blot检测Bcl-2、Bax和p53蛋白表达,并计算Bcl-2与Bax的比值.结果:RCE-4在16.2～50.0μM浓度范围内对HepG2细胞的生长抑制作用呈明显的时间-剂量依赖性,当药物浓度达到12.5μM时,抑制率达到大到54.2％,并且经IC50分析软件进行计算其IC50值为12.03μM;RCE-4(6.25、12.5和25.0μM)处理HepG2细胞12、24和48h均能显著抑制HepG2细胞增殖,促进其凋亡(P＜0.05或P＜0.01);当药物浓度为25.0μM,作用时间24h时,其抑制率高达93.4％.RCE4(6.25、1.25和25.0μM)处理HepG2细胞24h后可显著增加HepG2细胞内ROS水平,抑制细胞凋亡,阻滞细胞周期于G2/M期,降低线粒体膜电位,上调Bax和p53蛋白表达,下调Bcl-2蛋白表达和Bcl-2与Bax的比值,增强Caspase-9和Caspase-3的活性(P＜0.05或P＜0.01).结论:RCE-4可显著的抑制HepG2细胞增殖和诱导凋亡,其作用机制可能与其增加细胞内ROS水平,促进p53及下游靶基因Bax表达,增强Caspase-9和Caspase-3活性,抑制Bcl-2表达,降低Bcl-2和Bax比值及线粒体膜电位,阻滞细胞于G2/M期有关.
