首页 > 文献资料
-
炎症诱发抑郁症:吲哚胺2,3双加氧酶的激活是关键环节之一
本文通过回顾临床前期及临床期两阶段的文献,着重介绍炎症激活及抑郁症之间的相关联系并进一步探讨其机制.目前,抑郁症的机制研究热点之一是炎症反应又称为细胞因子假说,其中色氨酸-犬尿氨酸通路(KP)在该假说中的作用得到了越来越多的证实.该假说认为,色氨酸-犬尿氨酸途径是聚焦于抑郁症相关代谢产物改变的综合性通路.炎性抑郁症的产生是由于在免疫功能及神经递质改变下产生的炎性细胞因子激活了吲哚胺2,3-双加氧酶,从而进一步引发抑郁.吲哚胺2,3-双加氧酶的活性增加,不仅会导致色氨酸的衰竭同时还引起通过犬尿氨酸途径代谢的神经毒性产物的增加,而这两种改变都被认为与抑郁症的发病密切相关.在此基础上,我们主要聚焦于慢性病患者接受细胞因子治疗的相关研究,来探讨免疫激活病人中抑郁症发病的高风险性从而证明这一假说.这项工作的目的是希望通过对色氨酸-犬尿氨酸通路的研究,从吲哚胺2,3-双加氧酶的抑制,激活它的细胞因子的调节及寻找在犬尿氨酸途径中其它的靶点等方面来抗抑郁,从而为新型的抗抑郁药的发展提供新的方法途径.
-
原发性高血压患者血浆色氨酸、犬尿氨酸和犬尿喹啉酸浓度的变化
目的 通过测定血浆色氨酸(TRP)、犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)浓度,探讨外周吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和犬尿氨酸氨基转移酶(KAT)活性与原发性高血压(EH)的关系.方法 采用高效液相色谱法(HPLC)测定100例EH患者和80名健康体检者(对照组)血浆TRP、KYN和KYNA浓度,计算产物/底物的百分比来评价酶活性,即IDO活性=KYN/TRP×100%,KAT活性=KYNA/KYN×100%.结果 EH组血浆TRP浓度为(59.85±9.89) μmol/L,明显高于对照组[(48.19±7.72) μmol/L,P<0.001];KYN浓度为(2.01±0.48) μmol/L,明显低于对照组[(2.17±0.43) μmol/L,P<0.05].EH组和对照组血浆KYNA浓度分别为(24.10±9.12)、(23.59±7.27) μmol/L,二者差异无统计学意义(P>0.05).EH组IDO活性为3.40%±0.85%,明显低于对照组(4.54%±0.81%,P<0.001);而KAT活性为1.20%±0.36%,明显高于对照组(1.09%±0.27%,P<0.05).EH组血浆TRP浓度与年龄呈负相关(r=-0.316,P=0.001),而对照组二者之间无明显相关性(r=-0.208,P=0.064).EH组和对照组血浆IDO活性均与年龄呈正相关(EH组:r=0.264,P=0.008;对照组:r=0.305,P=0.006).2组血浆KYN、KYNA浓度及KAT活性与年龄均无明显相关性.结论 EH组血浆TRP浓度明显增高而KYN浓度明显降低,提示外周TRP-KYN代谢途径的IDO活性可能与EH有关.
-
高效液相色谱——紫外、荧光双检测器同时测定人尿中犬尿氨酸和犬尿喹啉酸
目的 建立高效液相色谱(HPLC)同时测定人尿中犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)方法.用KYNA/KYN比值评价人体犬尿氨酸氨基转移酶(KAT)活性.方法 采用HPLC测定KYN、KYNA,分析柱为安捷伦HC C18反相色谱柱;流动相为10 mmol/L乙酸钠-乙酸缓冲液:7%乙腈=93:7;流速1 mL/min;检测器波长:紫外365 nm,荧光344 am(激发)/398 mm(发射).结果 KYN和KYNA保留时间分别为6.9和11.5 min.水溶液标准与标准加入工作曲线斜率差异无统计学意义(KYN:P=0.406 8;KYNA:P=0.646 2).KYN和KYNA的平均回收率分别为98.74%±7.53%、95.17%±8.17%;稳定性试验的变异系数(CV)分别为3.35%和0.88%;精密度CV分别为2.73%和2.79%;低检测限分别为0.4和0.2μmol/L.30份健康成年人尿样的KYNA/KYN比值为2.45±1.54.尿中KYNA与KYN含量呈正相关关系(r2=0.375 8,P＜0.001).结论测定方法灵敏、准确、稳定.KYNA/KYN比值评测KAT活性具有简便、实用等特点,可用于相关疾病的临床辅助诊断和基础研究.
-
IDO在炎症性肠病中的研究进展
炎症性肠病(IBD)是一组病因未明的慢性非特异性肠道炎性疾病,有学者认为其发病与肠道免疫耐受被打破有关.吲哚胺2,3-双加氧酶(indoleamine2,3-dioxygenase,IDO)是一种色氨酸代谢酶,能够抑制T细胞克隆增殖,诱导免疫耐受,在炎性反应发生时,其表达和活性增加.故IDO与IBD的发病机制关系密切,有可能在IBD的诊断、治疗方面发挥着重要的作用.
-
基于HPLC的标准加入法同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸
目的 建立一种同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸浓度的高效液相色谱(HPLC)法,用于评价小鼠给予IDO抑制剂后体内IDO活性.方法 血清用6％高氯酸沉淀蛋白法处理,离心后取上清进样,采用标准加入法定量.选用ThermoHypersil GOLD色谱柱(250 mm×4.6 mm,5μm)分离,流动相为乙腈-醋酸钠(15mmol/L,冰醋酸调pH至4.0),流速1.1 mL/min,柱温30℃,犬尿氨酸和色氨酸的紫外检测波长分别为360 nm和280 nm.结果 犬尿氨酸保留时间为6.10 min,线性范围为0.25～10 μ mol/L,检测限为0.09 μmol/L;色氨酸保留时间10.12 min,线性范围为25～1 000 μmol/L,检测限为0.25μmol/L.精密度、回收率及稳定性等均符合生物样品定量分析方法验证指导原则的要求,并成功应用于62只小鼠血清犬尿氨酸和色氨酸浓度的测定.结论 建立了一种简单、快速、准确的HPLC分析方法,采用标准加入定量方式,可同时测定小鼠血清中犬尿氨酸和色氨酸血药浓度,并成功应用于实际生物样本的测定.
-
高效液相色谱-荧光法测定SLE患者血清色氨酸及其代谢产物
目的 建立一种同时测定血清色氨酸(tryptophan,Trp)、犬尿氨酸(kynurenine,Kyn)和犬尿喹啉酸(kynurenic acid,Kyna)的高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FD),并用此法检测SLE患者血清中Trp及其代谢产物Kyn、Kyna的含量.方法 血清标本经0.624 mol/L的高氯酸溶液去除蛋白质后取上清液20μl直接进样分析测定.色谱柱为Hypemil C18柱,流动相为0.20mol/L醋酸锌、8.3 mmol/L醋酸和2.5%的乙腈;流速为1.5 ml/min;荧光检测激发波长和发射波长在0～11 min分别为365nm和480 nm,11～15.5 min变换为344 nm和404 nm,15.5～20 min为254 nm和404 nm.采用建立的方法 测定体检健康者和SLE患者血清Trp、Kyn和Kyna的含量.结果 Trp的线性范围为0.610～196μmol/L,低检出浓度为0.05 μmol/L,平均回收率为103.71%;Kyn线性范围为0.049～98 μmol/L,低检出浓度为0.025μmol/L,平均回收率为97.45%;Kyna线性范围为1.050～1047 nmol/L,低检出浓度为0.050 nmol/L,平均回收率为100.60%.日内、日间测定值的变异系数均小于5%.苯丙氨酸、酪氨酸、5-羟色胺对测定均无干扰.与正常对照组比较,SLE患者的Trp含量显著减少,Kyn和Kyna的含量及Kyn/Trp的比值显著增高.结论 建立的HPLC-FD法能同时测定血清中Trp、Kyn和Kyna的含量,简便、快速、灵敏、特异.
关键词： 高效液相色谱法-荧光法 系统性红斑狼疮 色氨酸 犬尿氨酸 犬尿喹啉酸 -
血清吲哚氨2,3-双加氧酶活性测定在肺癌诊断中的价值
目的 探讨血清吲哚氨2,3-双加氧酶(IDO)活性测定对肺癌诊断的价值.方法 用高效液相色谱荧光法检测51例体检健康者、152例肺癌患者、31例肺良性疾病患者血清色氨酸(TRP)和犬尿氨酸(KYN)浓度,计算IDO活性,用ROC曲线评价IDO对肺癌的诊断性能.结果 肺癌组、健康人对照组与肺良性疾病组TRP浓度分别为(37.42±6.48)、(47.55±5.27)和(46.18±5.84) μmol/L；KYN浓度分别为2.58(1.55 ～3.26)、1.26 (0.87 ～ 1.75)和1.35(0.82～2.01)μmol/L,IDO活性分别是78.66(54.37～ 110.58)、25.75(16.85～36.32)和27.85(16.28 ～40.62)μmol/mmol.与健康人对照组比较,肺癌患者组TRP降低(t=-15.47,P＜0.01),而KYN和IDO升高(U分别为85.8、138.6,P均＜0.01).IDO诊断肺癌的ROC曲线下面积为0.895(95％CI:0.845～ 0.945),临界值为45.8 μmol/mmol时,敏感性为90.1％、特异性为84.2％.结论 肺癌患者血液IDO活性升高,IDO有望用于肺癌辅助诊断.
-
IDO激活剂治疗再生障碍性贫血的实验研究
目的 探讨IDO参与再生障碍性贫血(Aplastie Anemia,AA)的免疫系统异常活化的发病机制,观察IDO特异性激活剂--3,4-DAA治疗再障的疗效.方法 建立免疫介导的再障小鼠模型,用反向高效液相色谱法检测色氨酸(Trp)和其代谢产物犬尿氨酸(Kyn)的血清水平,用RT-PCR方法检测骨髓单个核细胞IDO mRNA的表达水平,探讨IDO在疾病进程中的异常表现;给予3,4-DAA治疗后检测相应指标的变化.结果 模型小鼠Trp浓度明显低于正常小鼠.Kyn浓度明显高于正常小鼠(P＜0.05),模型小鼠的单个核细胞IDO mRNA表达水平较正常小鼠高(P＜0.05);给予3,4-DAA治疗后上述指标差异更具统计学意义(P＜0.01).结论 在再障发病过程中,色氨酸限速酶IDO的表达水平和活性均较正常明显增高,促进色氨酸向犬尿氨酸转化,色氨酸的不足导致细胞内的"色氨酸饥饿状态"从而抑制T细胞的活化和增殖,是机体免疫系统自我调节的一种重要保护机制,IDO激活剂理论上是一种治疗再障的新策略.
-
犬尿氨酸代谢通路与中枢神经系统
犬尿氨酸代谢通路涉及一系列酶促反应,生成多种具有生物学活性的化合物,这些代谢产物统称为"犬尿氨酸能物质".犬尿氨酸能物质参与多种病理生理学过程,在中枢神经系统中有着重要的生理功能.例如,喹咻酸是N-甲基-D-天冬氨酸受体激动剂,在许多感染性神经系统疾病中可大量堆积在中枢神经系统,导致神经元因兴奋性中毒而死亡.犬尿喹啉酸可拮抗兴奋性谷氨酸盐受体,减少因兴奋性中毒导致的神经元死亡.文章就犬尿氨酸代谢通路在中枢神经系统中作用的相关研究做了综述.
-
血清色氨酸水平与终末期肾病患者抑郁的关系
目的：探讨终末期肾病患者抑郁发生与色氨酸及其代谢产物水平之间的关系。方法：将94例行维持性血液净化治疗的终末期肾病患者纳入研究，选取25名健康志愿者为对照组，以贝克抑郁量表（ BDI）评分，将终末期肾病检测患者分为抑郁组（≥14分）和非抑郁组（﹤14分）。检测几组的血清白细胞介素-6（IL-6）、色氨酸、犬尿氨酸、以及常规生化指标。结果：终末期肾病患者的IL-6、犬尿氨酸水平明显高于对照组（ p﹤0.01），色氨酸水平明显低于对照组（ p﹤0.01）。在94例透析患者中，抑郁组19例，非抑郁组75例；发生率为20.2%。抑郁组的血红蛋白、色氨酸水平明显低于非抑郁组（ p﹤0.05），IL-6、犬尿氨酸水平明显高于非抑郁组（ p﹤0.05）。终末期肾病患者BDI评分与IL-6、犬尿氨酸水平呈正相关（分别为r=0.294，p=0.004；r=0.217，p=0.038），犬尿氨酸与IL-6水平呈正相关（ r=0.244，p=0.019）。结论：炎症介质升高可能使犬尿氨酸水平增加，色氨酸水平下降，导致终末期肾病患者发生抑郁。
-
吲哚-2，3双加氧酶（IDO）调节免疫的新进展
吲哚胺2,3-双加氧酶（IDO）是一种含血红素限速酶，其催化色氨酸转化为犬尿氨酸，而犬尿氨酸是色氨酸主要代谢产物。IDO已经在非肝细胞中被发现，主要表达于滋养层细胞，树突细胞，单核细胞和巨噬细胞。IDO的表达与T细胞的免疫调节相关，其主要通过降解外周细胞中的色氨酸发挥调节作用。色氨酸是一种必需氨基酸，是所有生命合成蛋白的一种重要原料并参与其它重要的代谢功能。本文将对IDO的免疫调节的机制新进展做一综述。
-
槲皮素通过影响吲哚胺-2,3-双加氧酶活性抑制HeLa细胞增殖的研究
目的 研究槲皮素抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖的机制.方法 采用CCK-8法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞周期的变化;运用紫外可见分光光度计测定OD480值,反映色氨酸代谢及犬尿氨酸的生成情况;qPCR法检测IDO1的mRNA表达;表达、纯化IDO1蛋白并进行体外酶活性反应,用高效液相色谱法检测色氨酸和犬尿氨酸的含量变化.结果 槲皮素抑制HeLa细胞的增殖,引起Go/G1细胞周期阻滞;槲皮素抑制色氨酸的代谢;槲皮素能够明显抑制IDO1的体外酶催化活性,但不影响IDO1的表达;外源性添加色氨酸的代谢产物犬尿氨酸可以逆转槲皮素引起的细胞增殖抑制.结论 槲皮素可能通过抑制IDO1的酶催化活性,影响细胞色氨酸的代谢,这可能是槲皮素发挥其抗宫颈癌HeLa细胞增殖作用的机制之一.
-
血清IDO和KYN在溃疡性结肠炎中的临床价值研究
目的检测吲哚胺2,3-双加氧酶(IDO)和犬尿氨酸(KYN)在溃疡性结肠炎(UC)患者中的表达水平,利用受试者工作特征(ROC)曲线分析血清IDO、KYN诊断活动期UC的价值。方法60例UC组、18例疾病对照组和20例健康对照组。采用免疫组化法检测UC组结肠黏膜中IDO的表达,ELISA法检测3组血清中 IDO、KYN 和 C 反应蛋白(CRP)水平,利用ROC曲线进行分析。结果① UC组血清中IDO和KYN水平与结肠黏膜IDO表达量呈正相关(P<0.05)；② UC组患者血清IDO及KYN水平高②疾病对照组和健康对照组(P<0.05)；③ UC组中,活动期患者血清IDO、KYN水平高②缓解期(P<0.01),并随炎症严重程度升高而升高；④活动期UC组IDO、KYN水平与疾病活动度、CRP水平呈正相关；⑤ IDO、KYN、CRP的ROC曲线下面积分别为0.976、0.856和0.864；佳截断值分别为53.66 U/L、2.34 nmol/L 和1.75 mg/ml；灵敏度分别为90.5%、78.65%和100.0%；特异度分别为94.4%、83.3%和61.1%；Youden指数分别为0.8492、0.6190和0.6111。结论UC患者血清IDO和KYN水平可以作为判断UC患者炎症程度的重要指标,血清IDO、KYN和CRP水平对活动期UC有重要的诊断价值,其中 IDO 诊断价值高② KYN 和CRP。
-
不同组织中犬尿氨酸测定方法的建立及验证
目的 通过高效液相色谱(HPLC),建立测定小鼠血清、脑和肠组织中犬尿氨酸(Kyn)浓度的测定方法.方法 不同组织样本经高氯酸沉淀蛋白后,以乙腈:醋酸钠(10:90)为流动相,SunFireTM C8 column(150mm×4.6mm,5μm)为色谱柱进行分离并检测.结果 Kyn保留时间为3.1min,峰型对称,与内源性物质分离良好,日内、日间精密度的RSD值均<10％,回收率为96.50％ ～99.22％,稳定性良好.结论 建立了简单、快速、准确的测定小鼠血清、脑和小肠中犬尿氨酸浓度的HPLC分析方法.
-
急性髓性白血病患儿血清中犬尿氨酸和miR-335表达及其临床意义
目的 探讨急性髓性白血病患儿血清中犬尿氨酸和miR-335的表达及其临床意义.方法 筛选出急性髓性白血病患儿85例,其中初发26例、缓解29例、复发30例.同期选择体检健康者30例儿童为对照组.酶联免疫吸附法(Elisa)检测研究对象血清中犬尿氨酸和miR-335水平,并进行对比分析.结果 与对照组比较,急性髓性白血病患儿血清犬尿氨酸和miR-335水平明显升高.急性髓性白血病初发和复发组患儿血清中犬尿氨酸和miR-335水平明显高于缓解组,急性髓性白血病初发与复发组患儿间的血清中犬尿氨酸和miR-335水平差异无统计学意义.血清犬尿氨酸和miR-335水平与急性髓性白血病患儿的年龄、性别、骨髓中白血病细胞比例及FAB分型无明显相关性.结论 急性髓性白血病患儿血清中犬尿氨酸和miR-335水平明显升高,与该病的发生、发展密切相关.
-
LC-MS/MS法测定小鼠肿瘤中犬尿氨酸和色氨酸的含量
目的 建立同时测定ICR小鼠Lewis皮下移植肿瘤组织中犬尿氨酸和色氨酸的检测方法.方法 以稳定同位素标记的氨基酸为内标,肿瘤组织匀浆后再以甲醇蛋白沉淀后取上清液进行液相色谱串联质谱(LC-MS/MS)分析,色谱柱为C18分析柱(2.1 mm×100 mm,3.5μm),流动相为甲醇-水(均含0.1％甲酸).正离子模式,采用多反应监测(MRM)进行测定.结果 浓度范围在100～25000 nmol?L-1内线性关系良好,精密度、准确性、特异性和稳定性结果均符合接受标准.结论 该法可准确测定小鼠肿瘤组织中犬尿氨酸和色氨酸的含量.
-
精神分裂症患者血清犬尿氨酸和犬尿喹啉酸水平及临床意义
目的 研究精神分裂症(SZ)患者血清犬尿氨酸(KYN)和犬尿喹啉酸(KYNA)的浓度变化以及不同临床分型患者之间二者浓度的差异性.方法 采用高效液相色谱-荧光检测法(HPLC-FLD)检测SZ患者和正常对照人群以及不同临床分型患者血清KYN和KYNA含量并计算KYN/KYNA比值.结果 SZ患者血清KYN水平[(2.148±0.605)μmol/L]与正常对照组[(2.108±0.592)μmol/L]比较差异无显著性意义( t =0.675,P >0.05),血清KYNA水平[(24.231±6.831)nmol/L]低于正常对照组[(29.420±7.595)nmol/L]( t =1.657,P <0.05), KYN/KYNA比值(111.496±23.797)高于正常对照组(80.330±17.639)( t =1.654,P <0.05).偏执型SZ患者血清KYN含量低于青春型,血清KYNA含量高于单纯型和青春型;青春型KYN/KYNA比值高于偏执型和未分型,均差异有显著性( P <0.05).结论 SZ患者血清KYNA水平和KYN/KYNA比值可为SZ的临床诊断和治疗提供实验室依据.
-
脂多糖对大鼠脑内犬尿氨酸代谢通路的影响
目的 利用微透析采样技术观察单次给予脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)后大鼠脑内色氨酸(tryptophan,TRP)及代谢物犬尿氨酸(kynurenine,KYN)、犬尿喹啉酸(kynurenic acid,KA)的动态变化,对LPS与TRP代谢通路的相关性进行确证,进一步探究炎症相关的抑郁症的发病机制.方法 实验组SD大鼠单次腹腔注射LPS 3.5 mg/kg,对照组给予相同剂量的生理盐水,利用微透析技术采集0～8 h大鼠腹侧海马区的透析液,并通过LC-MS/MS法测定TRP及其代谢产物KYN、KA的含量,并用Western-blot法检测吲哚胺2,3-双加氧酶蛋白的表达量.结果 实验组在给予LPS 4 h后TRP浓度为(550.15± 107.96) pmol/L、KYN浓度为(337.95±62.73) pmol/L,相比对照组[TRP浓度:(368.38±59.31) pmol/L,KYN浓度:(172.80±43.96) pmoL/L]明显升高,差异有统计学意义(P＜0.05).KA则呈逐渐降低趋势,7h左右降到小值[(3.47±0.62) pmol/L] (P＜0.05).KYN/TRP的比值在5 h(0.69±0.11)开始逐渐升高,KA/KYN的比值在给予LPS 4h后(0.02±0.00)明显低于对照组(0.05±0.01)(p＜0.05).大多数分析物的浓度在4～8h呈明显动态变化.LPS组(1.48±0.37)吲哚胺2,3-双加氧酶蛋白的表达量相比正常对照组(1.00±0.24)明显增加(P＜0.01).结论 大鼠单次腹腔注射LPS可能会引起其体内TRP的代谢异常,促进色氨酸向犬尿氨酸途径代谢,且可能减少了通过犬尿氨酸途径代谢的神经保护因子KA的含量.
-
高效液相色谱法测定孕妇血清犬尿氨酸的含量
目的:建立一种高效液相色谱法测定孕妇血清中的犬尿氨酸(kynurenine)的含量.方法:反相高效液相色谱法,采用外标法,Diamonsil C18柱,流动相为甲醇-0.001 mol*L-1磷酸二氢钾(pH=4)(10∶90),检测波长245 nm.流速1.2 mL*min-1.结果:kynurenine的线性范围0.25～5.09 μmol*L-1,r=0.9972,21例孕妇血清Kynurenine 的含量为(0.98±0.27) μmol*L-1.结论:本法简便,准确,适用于临床和科研.
-
分析前标本处理对血犬尿氨酸测定的影响
目的 探讨血液犬尿氨酸(Kyn)测定时标本采集与保存对测定结果的影响. 方法 采用高效液相色谱-荧光法测定血清及相应血浆标本中Kyn浓度,对结果进行比较;测定在不同温度下保存不同时间的血清标本中Kyn浓度,对结果进行统计分析. 结果 EDTA-K2抗凝血浆与血清中犬尿氨酸测定结果比较无统计学意义(P>0.05).冰冻(-20℃)条件下一周内血清中的Kyn浓度保持稳定. 结论 在血Kyn测定时,可用EDTA-K2抗凝血浆标本代替血清.血清标本不能及时检测时,好蔑于≤-20℃条件下保存.
