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基于Wnt/β-catenin信号通路探讨透骨消痛胶囊含药血清对经TNF-α诱导的软骨细胞多靶点保护作用
目的 观察透骨消痛胶囊含药血清对经TNF-α诱导的软骨细胞Wnt/β-catenin信号通路的影响,探讨其对关节软骨细胞的多靶点保护作用.方法 将4周龄SD大鼠关节分离软骨细胞进行体外培养、传代,用免疫组化法鉴定第三代软骨细胞.以第3代软骨细胞为靶细胞,分为正常组、模型组和治疗组,模型组和治疗组用TNF-α诱导软骨细胞凋亡后,分别给予生理盐水血清和透骨消痛胶囊含药血清作用24 h,Western blot法观察各组软骨细胞中Wnt/β-catenin信号通路关键蛋白Wnt 4、β-catenin和GSK-3β的表达.结果 (1)细胞鉴定结果为Ⅱ型胶原免疫细胞化学染色阳性,由此说明分离细胞为软骨细胞.(2)与正常组相比,模型组Wnt 4和β-catenin表达升高(P<0.05),而GSK-3β的表达降低(P<0.05);与模型组相比,治疗组Wnt 4和β-catenin表达降低(P<0.05),而GSK-3β的表达升高(P<0.05).结论 透骨消痛胶囊能多靶点调控Wnt/β-catenin信号通路,对软骨细胞具有保护作用,为其治疗骨关节炎提供依据.
关键词： 骨关节炎 软骨细胞 透骨消痛胶囊 Wnt/β-catenin信号通路 多靶点 -
沉默干扰HMGA2对胃癌细胞Wnt/β-Catenin信号转导通路的影响
目的:观察小分子RNA沉默HMGA2在胃癌细胞株MKN-45的表达,研究HMGA2对Wnt/β-Catenin通路中主要分子β-Catenin以及下游靶分子c-myc、Cyclin D1的表达量及转录活性的影响,探讨HMGA2对Wnt/β-Catenin信号转导通路的影响.方法:构建针对人MGA2基因的shRNA真核表达载体,瞬时转染人胃癌细胞株MKN-45,用RT-PCR、Western blot分别检测转染后shHMGA2组、scrambled组和空白对照组细胞中HMGA2 mRNA和蛋白的表达情况,评估抑制效应；分别检测转染后3组细胞中的β-Catenin、c-myc、Cyclin D1 mRNA和蛋白的表达水平.结果:转染48 h后shHMGA2-1组的HMGA2mRNA相对表达量(0.58±0.07),与shHMGA2-2组(0.92±0.13)、shHMGA2-3组(0.90±0.16)、scrambled组(1.07±0.14)及空白对照组(1.19±0.09)相比有统计学意义(P＜0.05),其他4组相比无统计学意义(P＞0.05)；转染48 h后shHMGA2-1组的HMGA2沉默效果好,HMGA2 mRNA表达明显下降,抑制率51.3％；故选用质粒shHMGA2-1继续后续实验；Western blot结果显示转染72 h后shHMGA2-1组HMGA2蛋白相对表达量为(0.11±0.03),与scrambled组(0.48±0.12)及空白对照组(0.55±0.08)相比有统计学意义(P＜0.05),HMGA2蛋白表达明显下降,抑制率80％；沉默干扰HMGA248 h和72 h后,β-Catenin mRNA和蛋白表达水平在空白对照组(1.07±0.02,0.69±0.04)与scrambled组(0.91±0.02,0.67±0.10)中无明显差异(P＞0.05),而shHMGA2-1组(0.53±0.04,0.44±0.05)较之两组有明显的下降(P＜0.05)；shHMGA2-1组中c-myc mRNA和蛋白相对表达量为(0.39±0.04,0.25±0.07)较之空白对照组(0.88±0.05,0.75±0.09)、scrambled组(0.84±0.03,0.66±0.l0)有明显下降(P＜0.05),后两组相比较无统计学意义(P＞0.05)；shHMGA2-1组中Cyclin D1 mRNA和蛋白相对表达量为(0.31±0.02,0.12±0.01)较之空白对照组(0.52±0.03,0.73±0.12)、scrambled组(0.51±0.01,0.63±0.07)有明显下降(P＜0.05),后两组相比较无统计学意义(P＞0.05).结论:RNAi载体能有效地抑制HMGA2在胃癌细胞株MKN-45中的表达,沉默干扰HMGA2抑制了Wnt/β-Catenin通路中的主要分子β-Catenin以及下游靶分子c-myc、Cyclin D1的表达,HMGA2基因可能是通过调控Wnt/β-Catenin通路对胃癌细胞生长和凋亡发挥作用的.
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脐带间充质干细胞治疗糖尿病足的研究进展
全球大约有15％的糖尿病患者有发展成为足溃疡的可能,其中6％需要住院治疗.糖尿病足(DF)的治疗已成为威胁人类健康的世界性公共卫生问题,需要更为有效的治疗方案.脐带间充质于细胞(UCMSCs)是具有自我复制和多向分化潜能的原始细胞,可通过改善糖尿病下肢缺血、修复糖尿病周围神经病变(DPN)及调节免疫等方面促进足部创面愈合,且Wnt/β-catenin信号通路在治疗中发挥重要的调节作用.UCMSCs治疗已成为治疗糖尿病及其并发症的一种有潜力的治疗新方法,具有广阔的应用前景.
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替罗非班联合血栓抽吸对心肌梗死患者外周血单核细胞Wnt/β-catenin信号通路及预后的影响
目的 探讨替罗非班联合血栓抽吸对心肌梗死患者外周血单核细胞Wnt/β-catenin信号通路及预后的影响.方法 选取邯郸市中心医院确诊为ST段抬高型的心肌梗死(STIME)患者120例作为研究对象,所有患者均给予常规基础药物治疗,包括术前给予阿司匹林300 mg、氯吡格雷300 mg负荷量顿服,术后给予阿司匹林100 mg,氯吡格雷75 mg及低分子肝素抗凝、他汀类药物稳定斑块及调脂治疗.所有患者均先给予血栓抽吸,而后给予球囊预扩张以及冠状动脉支架植入术,依据血栓抽吸结果分为抽吸阳性组(A组)与抽吸阴性组,再将抽吸阴性组随机分为对照组(C组)和联合组(B组),对照组患者给予球囊扩张以及支架植入术,联合组患者在对照组基础上给予替罗非班10μg/kg负荷量,给予替罗非班0.15μg/kg/min持续泵入48小时,A组治疗方法同B组,对比各组患者外周血单个核细胞Wnt/β-catenin信号通路表达水平及不良心血管事件发生情况.结果 各组患者治疗前Wnt、T细胞因子-4(Tcf-4)、β-连环b(β-catenin)表达差异无统计学意义.治疗后A、B、C三组患者Wnt、Tcf-4、β-catein表达明显下降,但A、B两组患者水平均低于C组对照组患者.A、B两组患者TIMI血流3级和心肌灌注率分别为90％、87.5％;87.5％、85％,均明显高于C组.A组、B组肌酸激酶同工酶(CK-MB)、心肌肌钙蛋白I(cTnI)降至正常的平均时间分别为48.4 h、40.7 h和47.9 h、39.8 h,均明显高于对照组C组患者(P均<0.05).A组患者发生恶性心律失常、再梗死、心功能恶化及死亡患者共5例与B组(5例)对比差异无统计学意义(P>0.05),明显低于C组(P<0.05).结论 替罗非班联合血栓抽吸有助于改善心肌梗死患者冠状动脉血流和临床预后.
关键词： 急性心肌梗死 Wnt/β-catenin信号通路 替罗非班 预后 -
17β-雌二醇及Wnt／β-catenin信号通路对人成骨肉瘤细胞基质Gla蛋白表达的影响
目的：观察17β-雌二醇（17β-E217β-estradiol）对骨肉瘤细胞（osteosarcoma MG 63）基质Gla蛋白（MGP Matrix GLA protein）表达的影响及Wnt／β-catenin信号通路在其中的作用，探讨MGP在骨质疏松症发病过程中的可能机制。方法17β-E210－10、10－8、10－6mol／L及雌激素受体抑制剂氟维司群（Faslodex简称ICI）10－7 mol／L， ICI 10－7 mol／L ＋17β-E210－8 mol／L干预MG63细胞48 h。用10－8 mol／L的17β-E2及200 ng／mL Wnt／β-catenin信号通路阻断剂Dickkopf1分泌蛋白-1（ DKK-1）干预MG63细胞48 h。用10－8 mol／L 17β-E2及MGP抑制剂华法林10μmol／L干预MG63细胞48 h。干预后的细胞提取蛋白及总RNA，后用荧光定量PCR及Westernblotting观察MGP、β-catenin、Runx2、LRP5蛋白及基因的表达。结果17β-E2能上调MGP的表达，10－10、10－8、10－6 mol／L 17β-E2干预后， MGP mRNA的表达是对照组的4.63、7.16、2.95倍（ P＜0.05）， MGP蛋白的表达分别是对照组的1.17、1.58、1.28倍（ P＜0.05），以10－8 mol／L 17β-E2的作用明显。 ICI 能阻断17β-E2对MGP的上调作用，与单用17β-E2相比，差异有统计学意义（ P＜0.05）。17β-E2能增加Wnt／β-catenin经典信号通路中相关蛋白的表达，β-catenin及Runx2 mRNA及蛋白的表达与对照组相比，差异有统计学意义（ P＜0.05）。DKK-1则阻断17β-E2对MGP、β-catenin、 Runx2、 LRP5的上调作用，与对照组相比，差异有统计学意义（ P ＜0.05）。华法林可阻断17β-E2的作用，与对照组相比 MGP、β-catenin、Runx2、LRP5的表达均下调，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论17β-E2调节成骨肉瘤细胞内Wnt／β-catenin信号通路同时也调节MGP表达，该作用可能是骨质疏松症发病的机制之一。
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白细胞介素10基因修饰的树突状细胞对肝纤维化小鼠的治疗作用及其机制
目的 探讨白细胞介素(IL)10基因修饰的树突状细胞(DC)对肝纤维化小鼠的治疗作用及其机制.方法 体外构建IL-10基因修饰的DC(DC-IL-10),流式细胞术检测DC-IL-10表型及功能的变化.6～8周龄健康雄性BALB/c小鼠按随机数字表法随机分成空白对照组(DC组)、肝纤维化组、阴性对照慢病毒转染树突状细胞(DC-mock)处理组和DC-IL-10治疗组.比较各组小鼠肝功能炎症因子、免疫功能变化,以及肝脏组织形态学情况;实时PCR及免疫印迹法研究DC-IL-10对Wnt/β-连环蛋白信号通路的影响及在肝纤维化中的作用.结果 体外实验显示,组间表面分子(主要组织相容性复合物、CD80、CD86)表达差异有统计学意义(F值分别为14.708、22.503、12.595,P值均<0.05);DC-IL-10组明显降低于DC组和DC-mock组(P值均<0.05);T淋巴细胞增殖组间比较差异有统计学意义(F=50.295,P<0.05),DC-IL-10组T淋巴细胞增殖率明显低于DC组和DC-mock组(P值均<0.001).体内实验显示,DC-IL-10治疗组丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)水平明显低于肝纤维化组(P值均<0.05);肿瘤坏死因子(TNF)α、IL-6、IL-1β的表达明显低于肝纤维化组(P值均<0.05);调节性T细胞(Treg)比例明显高于肝纤维化组(P<0.05);病理显示肝组织损伤轻于肝纤维化组;Wnt3a、α-平滑肌肌动蛋白、β-连环蛋白mRNA表达量及蛋白表达量均明显低于肝纤维化组(P值均<0.001).结论DC-IL-10诱导Treg产生免疫耐受,抑制过度的炎症反应,阻断Wnt/β-连环蛋白信号转导通路,进而抑制肝纤维化的进展.
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Wnt/β-catenin信号通路在胃癌中的研究进展
Wnt/β-catenin信号通路是胚胎及器官发育的重要信号通路之一,参与调控机体内多种细胞的增殖、分化、极化、迁移及凋亡等过程,同时在胃癌的发生发展、侵袭转移、药物耐药中发挥重要作用.本文就Wnt/β-catenin信号通路在胃癌领域的新研究进展进行综述,为发现新的胃癌治疗方式提供理论依据.
关键词： 胃肿瘤 综述 治疗应用 Wnt/β-catenin信号通路 -
orexin-1受体抑制剂通过Wnt通路促进骨髓间充质干细胞的成骨分化
目的 研究Wnt/β-catenin信号通路对orexin-1受体抑制剂介导大鼠骨髓间充质于细胞(BMSCs)成骨分化的影响.方法 (1)分离提取SD大鼠股骨、胫骨的BMSCs,用流式细胞仪进行细胞表型鉴定;(2)实验分组:对照组、10-s mol/L、10-6mol/L质量浓度的orexin-1受体抑制剂溶液,于成骨诱导第5天免疫印迹法和实时荧光定量PCR法观察Wnt/β-catenin信号通路关键靶点蛋白Dickkopf-1、Gsk3β、β-catenin以及基因Gsk3β、β-catenin mRNA表达,以观察Wnt信号通路对orexin-1受体抑制剂诱导大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化的影响.结果 10-5 mol/L、10-6mol/L的orexin-1受体抑制剂处理BMSCs5天后,Dickkopf-1、β-catenin和GSK3β蛋白表达升高,β-catenin和GSK3β mRNA表达升高.结论 orexin-1受体抑制剂促进大鼠骨髓基质干细胞向成骨细胞方向分化的作用可能与调控Wnt/β-catenin信号通路有关.
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补肾填精中药血清对去势小鼠骨髓干细胞Wnt/β-catenin成骨分化信号通路的影响
目的 探讨补肾填精中药血清对小鼠骨髓干细胞增殖、分化、矿化功能的影响,并检测Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白的表达,深化"肾主骨、生髓"理论的科学内涵.方法 以不同浓度含药血清培养去势小鼠骨髓干细胞,MTT观察细胞增殖,连续培养1周后,检测成骨基因的表达并进行碱性磷酸酶染色,培养28天后茜素红染色观察钙结节的形成,Elisa及Western-blot检测Wnt/β-catenin通路主要信号蛋白β-连环蛋白(β-catenin)、低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)、T细胞因子(TCF)的表达水平.结果 补肾填精含药血清促进了去势小鼠BMSCs的增殖、成骨基因的表达和钙结节的形成,β-catenin、LRP-5、TCF显著上调.结论 补肾填精中药血清促进了小鼠BMSCs的成骨分化与矿化能力,这种促进作用与Wnt/β-catenin信号通路存在密切关系.
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1,25(OH)2D3对人骨肉瘤MG63细胞基质GLA蛋白及Wnt信号通路的影响
目的 观察1,25(OH)2D3对人成骨肉瘤MG63细胞株Wnt信号通路及MGP表达的影响,探讨其在骨质疏松发病中可能的新机制.方法 分别使用10-8 mol/L 1,25(OH)2D3、200 ng/ml Wnt信号通路阻断剂DKK-1、10-8 mol/L 1,25(OH)2D3+200 ng/ml DKK-1干预人骨肉瘤细胞MG63细胞株48 h,使用实时荧光定量RT-PCR及western-blot技术测定Wnt/β-catenin信号通路中相关因子β-catenin、Runx2、LRP5及MGP基因及蛋白表达的影响.结果 (1)10-8 mol/L 1,25(OH)2D3上调MG63细胞中Wnt/β-catenin信号通路中相关因子β-catenin、Runx2、LRP5及MGP的基因表达及蛋白的表达,其中上调基因分别是对照组的2.73倍、3.72倍、1.53倍、2.31倍,差异有统计学意义(P＜0.05);上调蛋白表达分别是对照组的1.13倍、1.17倍、1.14倍、1.21倍,差异有统计学意义(P＜0.05).(2)DKK1下调β-catenin、LRP5、Runx2、MGP的基因及蛋白表达,其中下调基因表达分别是对照组的0.34倍、0.52倍、0.42倍、0.78倍,差异有统计学意义(P＜0.05).下调蛋白表达分别是对照组的0.93倍、0.92倍、0.87倍、0.86倍,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 1,25(OH)2D3有可能通过Wnt/β-catenin信号通路影响MGP的表达.
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骨质疏松相关信号通路研究进展
骨代谢过程包括骨形成及骨吸收，当两者间的平衡被打破后便会出现骨硬化或者骨量减少甚至骨质疏松，其具体的分子调节通路不明。现代研究表明，在骨代谢过程中至少存在RANKL /RANK/OPG信号通路、Wnt/β-catenin信号通路、PTH信号通路、PPAR-γ信号通路等，各个通路间还存在交叉。通过分子信号通路，可有效促进骨代谢研究，并开发具有治疗骨质疏松的新药。
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Wnt／β-catenin 信号通路及与之相关骨质疏松药物研究
目的： Wnt/β-catenin信号通路在维持骨组织平衡过程中发挥至关重要的作用，主要通过调节信号通路过程中的三类抑制物实现，分别为Sclerostin、Dickkopfs （ DKKs）、Secreted frizzled-related proteins （ SFRPs）。同时，与之相关的促进骨形成的新药，如Sclerostin单克隆抗体（ AMG 785）和DKK1单克隆抗体（ RH2-18），正在进行动物及III期临床试验。本文就Wnt/β-catenin信号通路的结构及分布，该通路及其调节机制对骨代谢的作用及与之相关的骨质疏松药物研究作一综述。
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强直性脊柱炎炎性骨破坏和病理性骨化的信号转导机制
炎性骨破坏和病理性骨化是强直性脊柱炎的特征性病理表现，有多种细胞因子和信号通路参与其中。目前，肿瘤坏死因子а、白细胞介素是广为人知的参与炎性破坏的细胞因子，与此同时，伴随着越来越多新的生物学标志物的出现，Wnt／β－catenin信号通路、BMP／TGF－β信号通路等在AS骨化中的作用也日益受到重视。细胞因子介导的炎症与病理性骨化信号通路之间关系的研究，可能从分子水平上揭示强直性脊柱炎从炎症到骨化过程的机制，并为TNF抑制剂的长期临床应用提供依据。
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基于Wnt/β-catenin 信号通路的中医药干预骨关节炎的研究进展
骨关节炎是老年人常见的骨病之一,该病的发病机制尚不明确,除手术外无有效治疗手段.目前Wnt/β-catenin信号通路与骨关节炎已成为研究热点,近年来中医药调控Wnt/β-catenin信号通路干预骨关节炎的研究取得较大进展.作者通过查阅CNKI、维普和PUBMED 数据库近10 年的国内外相关文献,总结了中医药调控Wnt/β-catenin信号通路干预骨关节炎的研究进展,分析这些研究中存在的问题,以期进一步阐明中医药如何通过调控Wnt/β-catenin信号通路干预骨关节炎的分子机制,发掘中医药防治骨关节炎的潜在价值.
关键词： 中医药 Wnt/β-catenin信号通路 骨关节炎 -
Wnt/β-catenin信号通路与肾性骨病
大量研究显示Wnt/β-catenin信号通路在肾性骨病发生发展中具有重要作用.本文从生理、病理两个层面综述了Wnt/β-catenin信号通路在肾骨调控中的作用.在生理状态下,Wnt/β-catenin信号通路不仅具有调节肾形成祖细胞自我更新与分化,进而形成足量的肾单位的作用,而且可以促进多能间充质干细胞分化成成骨细胞系,抑制其向软骨以及脂肪细胞系分化的同时抑制成骨细胞凋亡,延长其生命,促进骨形成,还可以通过调节OPG的表达抑制破骨细胞分化和骨吸收.当肾脏受损后,在SOST、DKK1、VitaminD/VDR、FGF23/α-Klotho、PTH/PTHlR、TGF-β/BMPs等诸多因素直接或间接影响下,一方面骨细胞中Wnt/β-catenin信号表达异常,影响正常的骨形成与骨吸收,引起骨稳态失衡进而发生骨病,另一方面肾脏中Wnt/β-catenin信号的异常表达或加速或修复自身损伤,并进一步影响骨稳态.
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人PKD2基因慢病毒的构建及其对常染色体显性遗传性多囊肾病小鼠肾脏上皮细胞多囊蛋白-2和Wnt/β-catenin信号通路的修复作用
目的 构建携带入PKD2基因的重组慢病毒载体,并探讨该载体对Pkd2缺失小鼠肾脏上皮细胞中多囊蛋白-2(PC2)的表达,以及对下游Wnt/β-catenin信号通路的作用.方法 2016年8月至2017年2月采用Xba Ⅰ和Xho Ⅰ酶将PKD2基因从已有pcDNA3.1-TM-PKD2质粒中切出,并插入慢病毒空载体pLV-sfGFP_ 2A_Puro,测序验证后获得重组慢病毒载体pLV-sfGFP-PKD2.然后,将重组慢病毒载体与包装质粒共脂质体转染293T细胞,包装病毒,获得病毒浓缩液.按照实验组(pLV-sfGFP-PKD2病毒感染)、对照组(pLV-sfGFP病毒感染)和空白组(未感染)进行分组,分别处理携带Pkd2基因的B3、D3细胞(Pkd2+-)和Pkd2缺失的B2、E8细胞(Pkd2-/-),采用蛋白质印迹法、免疫荧光染色法检测PC2表达情况.后,选取B3和B2细胞,利用增殖细胞核抗原(PCNA)荧光染色检测细胞增殖活性,实时荧光定量PCR检测PKD2下游Wnt/β-catenin信号通路的变化.结果 重组慢病毒载体酶切后凝胶电泳结果显示插入片段与PKD2基因一致,基因测序结果显示PKD2插入方向正确.经pLV-sfGFP-PKD2病毒感染后,实验组B2和E8细胞的PC2表达量分别为0.668±0.013和0.763±0.021,空白组B3和D3细胞的PC2表达量分别为0.687±0.015和0.776±0.008,差异均无统计学意义(P=0.164,P=0.409).实验组B2细胞增殖活性(0.573±0.010)明显低于空白组(0.848±0.031),差异有统计学意义(P＜0.01);与空白组B3细胞(0.585±0.017)比较差异无统计学意义(P =0.369).实时荧光定量PCR检测结果显示,实验组B2细胞中的Wnt7a和β-catenin基因表达量分别为0.037±0.005和0.554±0.008,与空白组B3细胞的0.037±0.004和0.571±0.013比较差异均无统计学意义(P =0.969,P=0.640).结论 本研究成功构建携带人PKD2基因并具有感染能力的重组pLV-sfGFP-PKD2慢病毒,慢病毒可重建PKD2基因缺失的小鼠肾脏上皮细胞PC2的表达,使过度激活的Wnt/β-catenin信号通路恢复正常,进而降低PC2缺失所导致的细胞异常增殖活性.
关键词： 多囊肾 常染色体显性 Wnt/β-catenin信号通路 转基因 慢病毒 -
抑制宫颈癌中NGAL基因的表达对癌细胞增殖及凋亡的影响和机制研究
目的 探讨抑制宫颈癌中中性粒细胞相关载脂蛋白(NGAL)基因的表达对癌细胞增殖及凋亡的影响及机制.方法 RT-PCR检测NGAL基因在宫颈癌组织中的mRNA表达;人宫颈癌HeLa细胞分为空白组、阴性对照组和NGAL转染组,转染48 h后,Western bloting检测各组细胞中NGAL、活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Cleaved caspase3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期素D1(Cyclin D1)蛋白表达;CCK8实验和流式细胞仪分别检测细胞的增殖和凋亡情况.结果 宫颈癌组织中NGAL的mRNA表达显著高于癌旁组织(P＜0.01);NGAL转染组NGAL的蛋白表达显著降低;NGAL转染组细胞存活率及Bcl-2、β-catenin、Cyclin D1蛋白表达均显著低于空白组(P＜0.01);细胞凋亡率及Cleaved caspase3蛋白表达显著高于空白组(P＜0.01).结论 抑制宫颈癌中NGAL基因的表达可显著降低癌细胞的增殖及诱导细胞凋亡,其机制与下调Wnt/β-catenin信号通路有关.
关键词： 宫颈癌 NGAL基因 增殖 凋亡 Wnt/β-catenin信号通路 -
miRNA-143对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响及机制研究
目的 探讨miRNA-143对宫颈癌细胞增殖及凋亡的影响及机制.方法 实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测宫颈癌组织、癌旁组织及宫颈癌C-33A、HeLa、CaSki细胞中miRNA-143的表达水平.将miR-NA-143 mimics、miRNA-143 inhibitor及HIF-1α-siRNA转染至HeLa细胞中,未转染的作为对照组.Western blot检测转染48 h后miRNA-143 mimics组、miRNA-143 inhibitor组和对照组的HIF-1α蛋白表达水平.将miRNA-NC+miRNA-143 mimics、Wt-HIF-1α+miRNA-143 mimics、Mut-HIF-1α+miRNA-143 mimics转染HeLa细胞,检测荧光素酶活性;后续实验分为对照组、miRNA-143 mimics组及HIF-1α-siRNA组,各组细胞转染48 h后,CCK8试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Western blot检测Ki-67、cleaved caspase 3、β-catenin、cyclin D1蛋白表达水平.结果 宫颈癌组织中miRNA-143的表达水平明显低于癌旁组织(P<0.01),人宫颈癌CaSki细胞中的miR-NA-143表达水平高于人宫颈癌HeLa细胞和C-33A细胞(P<0.05).miRNA-143 mimics组的HIF-1α蛋白表达水平低于对照组,miRNA-143 inhibitor组的HIF-1α蛋白表达水平高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).Wt-HIF-1α+miRNA-143 mimics组的荧光素酶活性低于miRNA-NC+miRNA-143 mimics组和Mut-HIF-1α+miRNA-143 mimics组,差异均有统计学意义(P<0.05);而Mut-HIF-1α+miRNA-143 mimics组与miRNA-NC+miRNA-143 mim-ics组的荧光素酶活性比较,差异无统计学意义(P>0.05).miRNA-143 mimics和HIF-1α-siRNA组的细胞存活率及Ki-67、β-catenin、cyclin D1蛋白表达水平均低于对照组,细胞凋亡率及cleaved caspase 3蛋白表达水平均高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 miRNA-143在宫颈癌中低表达,miRNA-143可通过下调HIF-1α的表达及抑制Wnt/β-catenin信号通路,抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖并促进其凋亡.
关键词： miRNA-143 宫颈癌 增殖 凋亡 Wnt/β-catenin信号通路 -
PDCD4通过Wnt/β-catenin信号通路抑制宫颈癌细胞增殖的基础研究
目的 探讨细胞程序性死亡蛋白4(PDCD4)对人宫颈癌细胞增殖、凋亡的影响以及其作用机制.方法 以人宫颈癌细胞HeLa转染PGC-FU-GFP-PDCD4载体和空载体PGC-FU-GFP分别作为过表达组和空载体组,以未做转染的HeLa细胞作为空白对照组.采用蛋白质印迹法(Western blot)检测转染效果,噻唑蓝法检测转染细胞的增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测细胞中β-连环蛋白(β-catenin)、分泌型蛋白Dickkopf-1(DKK1)、细胞周期蛋白D1(cyclin D1)的表达水平.结果 过表达组细胞中PDCD4的表达量高于空载体组和空白对照组(P﹤0.05),空载体组细胞中PDCD4的表达量与空白对照组比较,差异无统计学意义(P﹥0.05).过表达组细胞的存活率低于空载体组和空白对照组,凋亡率高于空载体组和空白对照组,差异均有统计学意义(P﹤0.05);空载体组与空白对照组细胞的存活率和凋亡率比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05).过表达组细胞中β-catenin、DKK1、cyclin D1蛋白的表达水平均低于空载体组和空白对照组(P﹤0.05);空载体组细胞中β-catenin、DKK1、cyclin D1蛋白的表达水平与空白对照组比较,差异均无统计学意义(P﹥0.05).结论 PDCD4基因可以抑制宫颈癌细胞的增殖,促进宫颈癌细胞的凋亡,其可能的作用机制为通过影响Wnt/β-catenin信号通路进而抑制下游靶基因的表达.
关键词： 细胞程序性死亡蛋白4 宫颈癌 Wnt/β-catenin信号通路 增殖 凋亡 -
ATF3在结肠癌组织中表达及其对HCT116细胞增殖和迁移影响机制探讨
目的 激活转录因子3(activating transcription factor 3,ATF3)是转录因子ATF/CREB(cyclic AMP-respon-sive element binding protein)家族中的一员,在正常细胞中表达低,但是通过信号刺激可以诱导其短时间快速表达发挥作用.本研究旨在探讨ATF3在结肠癌中的表达及临床病理特征相关性,揭示ATF3过表达对结肠癌HCT116细胞Wnt/β-catenin信号通路和EMT的影响.方法 利用免疫组化法分析ATF3在结肠癌组织中的表达及其临床病理特征相关性.分别向HCT116细胞转染空载和ATF3过表达质粒:采用细胞增殖检测试剂盒8(cell counting kit 8,CCK8)法检测ATF3对细胞增殖的影响;利用划痕实验观察ATF3对细胞迁移的影响;采用蛋白质印迹法检测ATF3过表达对Wnt/β-catenin信号通路和EMT过程中蛋白的影响.结果 ATF3在正常结肠黏膜上皮中高表达,在癌组织及转移癌中低表达,χ2=27.2,P<0.001.细胞实验显示,转染前两组细胞增殖差异无统计学意义,t=0.60,P=0.566;与对照组相比,观察组48 h的吸光度值降低,t=4.21,P=0.003.转染质粒48 h观察组划痕愈合速度变慢;转染48 h观察组ATF3蛋白表达量明显多于对照组;观察组β-catenin、c-myc、Cyclin D1、TCF7 L2和N-cadherin蛋白表达减少,GSK-3β和E-cadherin增多.结论 ATF3过表达可以抑制结肠癌细胞的增殖和迁移;ATF3过表达可以抑制Wnt/β-catenin信号通路和上皮-间质转化,抑制结肠癌的发生及转移;ATF3可能在结肠癌的发生发展起着重要的作用.
